3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.2Phương pháp nghiên cứu
3.2.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: Nghiên cứu khử trùng, chọn nguồn vật liệu ban ựầu ựưa và nuôi cấy khởi ựộng loài lan Dendrobium fimbriatum
Hook.
Thắ nghiệm 1. Nghiên cứu xác ựịnh phương pháp khử trùng chồi (keiki)
+ CT1: Tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch cồn 700
trong 1 phút, tráng sạch lại bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch HgCl2
0,1% trong 3 phút, tráng sạch lại bằng nước cất vô trùng, tách bỏ bớt phần lá bao
bên ngoài, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1% trong 1 phút, tráng sạch lại bằng nước
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 30
+ CT2: Tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch cồn 700
trong 1 phút, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2%
trong 5 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng, tách bỏ bớt phần lá bao
bên ngoài, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 2 phút, tráng sạch nhiều lần bằng
nước cất vô trùng. Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi mẫụ
+ CT3: Tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch cồn 700
trong 1 phút, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2%
trong 5 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng, tách bỏ bớt phần lá bao
bên ngoài, ngâm trong dung dịch HgCl2 trong 1 phút, tráng sạch nhiều lần bằng
nước cất vô trùng. Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi mẫu là môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường+10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
Thắ nghiệm trên mẫu chồi cây với 3 công thức, bố trắ 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại trên 30 mẫu/công thức.
Thắ nghiệm 2. Nghiên cứu phương pháp khử trùng quả của loài lan
Dendrobium fimbriatum Hook.
+ CT1: Tráng sạch quả bằng nước cất vô trùng, nhúng quả trong dung dịch cồn
960 hơ trên ngọn lửa ựèn cồn. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấỵ
+ CT2: Tráng sạch quả bằng nước cất vô trùng, ngâm rửa trong dung dịch cồn
960, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 5
phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấỵ
+ CT3: Tráng sạch quả bằng nước cất vô trùng, ngâm rửa quả trong dung dịch
cồn 960, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1%
trong 5 phút, tráng sạch quả nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấy là môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
Thắ nghiệm trên mẫu quả với 3 công thức, bố trắ 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại trên 3 quả/công thức.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 31 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thắ nghiệm 3. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số hợp chất hữu cơ tự nhiên ựến giai ựoạn khởi ựộng mẫu tạo vật liệu ban ựầu loài lan Dendrobium
fimbriatum Hook.
CT1 (đC): Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môitrường +
6g agar/lắt môi trường
CT2: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường CT3: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường CT4: đC + 60g táo/lắt môi trường CT5: đC + 60g chuối/lắt môi trường
Gieo hạt lan trên 5 công thức, mỗi công thức bố trắ trên 3 bình, 03 lần lặp lạị
3.2.2.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 2: Nhân nhanh in vitro loài lan
Dendrobium fimbriatum Hook.
* Giai ựoạn nhân nhanh protocorm
Thắ nghiệm 4. Nghiên cứu ảnh hưởng của nền môi trường nuôi cấy ựến khả năng nhân nhanh protocorm loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT2: Môi trường VW + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT3: Môi trường KC + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT4: Môi trường RE + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
Thắ nghiệm 5. Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng ựường ựến khả năng nhân nhanh protocorm loài Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường KC + 100ml ND/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC). CT2: đC + 10g sacaroza/lắt môi trường
CT3: đC + 20g sacaroza/lắt môi trường CT4: đC + 30g sacaroza/lắt môi trường
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 32
CT5: đC + 40g sacaroza/lắt môi trường CT6: đC + 50g sacaroza/lắt môi trường
Thắ nghiệm 6. Nghiên cứu ảnh hưởng của các dịch chiết hữu cơ tự nhiên bổ sung vào môi trường nuôi ựến khả năng nhân nhanh protocorm loài lan
Dendrobiumfimbriatum Hook.
CT1: Môi trường KC + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC)
CT2: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường CT3: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường CT4: đC + 60g táo/lắt môi trường CT5: đC + 60g chuối/lắt môi trường
CT6: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g cà rốt/lắt môi trường CT7: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g táo/lắt môi trường CT8: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường CT9: đC + 60g cà rốt /lắt môi trường + 60g táo/lắt môi trường CT10: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường CT11: đC + 60g táo/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường
Thắ nghiệm 7. Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng khoai tây ựến khả năng nhân nhanh protocorm loài lanDendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường KC + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường 6g agar/lắt môi trường (đC)
CT2: đC + 20g khoai tây/lắt môi trường CT3: đC + 40g khoai tây/lắt môi trường CT4: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường CT5: đC + 80g khoai tây/lắt môi trường CT6: đC + 100g khoai tây/lắt môi trường
Các thắ nghiệm 4, 5, 6, 7 tiến hành cấy vào mỗi bình 3 cụm protocorm có ựường kắnh 5mm và mỗi cụm mang 50 protocorm, mỗi công thức cấy 03 bình, thắ nghiệm 03 lần lặp lạị
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 33
* Nhân nhanh cụm chồi (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thắ nghiệm 8. Nghiên cứu ảnh hưởng của nền môi trường nuôi cấy ựến khả năng nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT2: Môi trường VW + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT3: Môi trường KC + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
CT4: Môi trường RE + 100ml ND/lắt môi trường + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
Thắ nghiệm 9. Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng ựường ựến khả năng nhân nhanhcụm chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC)
CT2: đC + 10g sacaroza/lắt môi trường CT3: đC + 20g saccaroza/lắt môi trường CT4: đC + 30g saccaroza/lắt môi trường CT5: đC + 40g saccaroza/lắt môi trường CT6: đC + 50g saccaroza/lắt môi trường
Thắ nghiệm 10. Nghiên cứu ảnh hưởng của các dịch chiết hữu cơ tự
nhiên bổ sung vào môi trường nuôi ựến khả năng nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 20g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC)
CT2: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường CT3: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường CT4: đC + 60g táo/lắt môi trường
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 34
CT6: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g cà rốt/lắt môi trường CT7: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g táo/lắt môi trường CT8: đC + 60g khoai tây/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường CT9: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường + 60g táo/lắt môi trường CT10: đC + 60g cà rốt/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường CT11: đC + 60g táo/lắt môi trường + 60g chuối/lắt môi trường
Thắ nghiệm 11. Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng chuối chắn ựến khả năng nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 100ml ND/lắt môi trường + 20g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC)
CT2: đC + 30g chuối chắn/lắt môi trường CT3: đC + 60g chuối chắn/lắt môi trường CT4: đC + 90g chuối chắn/lắt môi trường CT5: đC + 120g chuối chắn/lắt môi trường CT6: đC + 150g chuối chắn/lắt môi trường
Thắ nghiệm 8, 9, 10, 11 ựược tiến hành cấy vào mỗi bình cấy 3 cụm chồi có ựường kắnh 10mm và mỗi cụm chứa 15 chồi, mỗi công thức cấy 03 bình, thắ nghiệm 03 lần lặp lạị
3.2.2.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: Tạo cây hoàn chỉnh
Thắ nghiệm 12. Nghiên cứu ảnh hưởng của nền môi trường nuôi cấy ựến sinh trưởng của chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường MS + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường CT2: Môi trường VW + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường CT3: Môi trường KC + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường CT4: Môi trường RE + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường
Thắ nghiệm 13. Nghiên cứu ảnh hưởng của than hoạt tắnh (THT) ựến khảnăng ra rễ của chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1: Môi trường RE + 10g sacaroza/lắt môi trường + 6g agar/lắt môi trường (đC) CT2: đC + 0,5g THT/lắt môi trường
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 35
CT3: đC + 1,0g THT/lắt môi trường CT4: đC + 1,5g THT/lắt môi trường CT5: đC + 2,0g THT/lắt môi trường
Thắ nghiệm 14. Nghiên cứu ảnh hưởng của cường ựộ chiếu sáng tới sinh trưởng của chồi loài lan Dendrobium fimbriatum Hook.
CT1 (đC): 800 lux
CT2 : 1.300 lux
CT3 : 1.800 lux
CT4 : 2.300 lux (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thắ nghiệm 12, 13, 14 tiến hành cấy vào mỗi bình cấy 3 chồi ựơn, mỗi chồi có chiều cao 3cm, 3lá và mỗi công thức cấy 3 bình, thắ nghiệm 03 lần lặp lạị