b, Giá trị sử dụng của loài Dendrobium fimbriatum Hook.
2.2.4Nhân giống invitro
Theo Georger (1993) quá trình nhân giống in vitro bao gồm các bước sau:
* Chọn lọc và chuẩn bị cây mẹ
Trước khi tiến hành nhân giống in vitro cần chọn lọc các cây mẹ các cây này cần phải sạch bệnh, ựặc biệt là bệnh virut. Việc trồng các cây mẹ trong ựiều kiện thắch hợp với chế ựộ chăm sóc và phòng trừ sâu bệnh hiệu quả trước khi lấy mẫu cấy sẽ làm giảm tỷ lệ nhiễm, tăng khả năng sống và sinh trưởng của mẫu cấỵ
* Nuôi cấy khởi ựộng:
Là giai ựoạn khử trùng ựưa mẫu vào nuôi cấy in vitrọ Giai ựoạn này cần ựảm bảo các yêu cầu sau: tỷ lệ nhiễm thấp, tỷ lệ sống cao, mô tồn tại và sinh trưởng tốt.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 20
trọng nhất là ựỉnh chồi ngọn, ựỉnh chồi nách và sau ựó là các ựỉnh chồi hoa và cuối cùng là ựoạn thân, mảnh láẦ
* Nhân nhanh:
Là giai ựoạn kắch thắch mô nuôi cấy phát sinh hình thái và tăng nhanh số lượng thông qua các con ựường: hoạt hóa chồi nách, tạo chồi bất ựịnh và tạo phôi vô tắnh.
Vấn ựề là phải xác ựịnh ựược môi trường và ựiều kiện ngoại cảnh thắch hợp ựể có hiệu quả cao nhất. Theo nguyên tắc chung môi trường có nhiều cytokinin sẽ
kắch thắch tạo chồị Chế ựộ nuôi cấy thường là 25-270C và 16h chiếu sáng/ngày,
cường ựộ ánh sáng 2000-4000 lux. Tuy nhiên ựối với mỗi loại ựối tượng nuôi cấy ựòi hỏi có chế ựộ nuôi cấy khác nhaụ
* Tạo cây hoàn chỉnh
để tạo rễ cho chồi, người ta chuyển chồi từ môi trường nhân nhanh sang môi trường tạo rễ. Môi trường tạo rễ thường ựược bổ sung một lượng auxin. Một số loại chồi có thể phát sinh rễ ngay sau khi chuyển từ môi trường nhân nhanh giàu cytokinin sang môi trường không chứa chất ựiều tiết sinh trưởng.
* Thắch ứng cây in vitro ngoài ựiều kiện tự nhiên
để ựưa cây từ ống nghiệm ra ngoài vườn ươm với tỷ lệ sống cao, cây sinh trưởng tốt cần ựảm bảo một số yêu cầu
- Cây trong ống nghiệm ựã ựạt ựược những tiêu chuẩn hình thái nhất ựịnh (số
lá, số rễ, chiều cao câỵ.)
- Có giá thể tiếp nhận cây in vitro thắch hợp: giá thể sạch, tơi xốp, thoát nước.
- Phải chủ ựộng ựiều chỉnh ựược ẩm ựộ, sự chiếu sáng của vườn ươm cũng
như chế ựộ dinh dưỡng phù hợp.