CHỦNG VI KHUẨN CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
Chúng tôi tiến hành giám định các đặc tính về hình thái, tính chất bắt màu đối với thuốc nhuộm Gram, đặc tính nuôi cấy trên các loại môi trường như Fluid Thioglycolate, SPS agar (Perfringens Slection Agar), thạch máu, giám định các đặc tính sinh hóa trên các loại môi trường sinh hóa như Egg Yolk, Litmus milk, khả năng lên men các loại đường như glucose, maltose, sucrose, mannitose,... phản ứng OF-Test, CAMP-Test, khả năng làm dung giải Gelatin theo mô tả của Quinn và cộng sự (1994) [36] của 12 chủng vi khuẩn Clostridium perfringens (28, 53, 58, 97,
125, 9, 29, 141, 143, 149, CNT, DKH) được phân lập từ dê, cừu mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy tại 3 tỉnh Khánh Hòa, Ninh Thuận và Bình Thuận. Kết quả được trình ở bảng 3.1 và các hình từ 3.1 đến 3.10.
Bảng 3.1. Kết quả kiểm tra đặc tính sinh học, hóa học 12 của chủng vi khuẩn
Clostridium perfringens phân lập được
STT Tính chất Số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Tỷ lệ (%) 1 Gram dương 12 12 100 2 Di động 12 0 0 3 Indole 12 0 0 4 Urease 12 0 0 5 Glucose 12 12 100 6 Lactose 12 12 100 7 Maltose 12 12 100 8 Sucrose 12 12 100 10 Sinh hơi 12 12 100 11 Mannitol 12 0 0
12 Egg yolk (vòng trắng sữa
do sản sinh Lecithinase) 12 12 100
13 Litmus milk (vón cục) 12 12 100
14 Thạch SPS (khuẩn lạc
tròn đen) 12 12 100
15 Dung huyết trên thạch
máu 12 12 100
16 OF - Test (lên men và oxi
hóa) 12 12 100
17
Camp - Test
(tăng khả năng dung huyết)
12 12 100
18 Khả năng làm dung giải
Hình 3.1. Hình thái vi khuẩn, trực
khuẩn Gram dương
Hình 3.2. Hình thái vi khuẩn, phương pháp soi tươi
Hình 3.3. Dung huyết β trên môi
trường thạnh máu
Hình 3.4. Hình thái khuẩn lạc trên
môi trường thạch SPS
Hình 3.7. Môi trường đường chưa nuôi
cấy
Hình 3.8. Mannitol: -, Glucose: +, Lactose: +, Maltose: +, Sucrose: + (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hình 3.9. Phản ứng CAMP Hình 3.10. Phản ứng O-F
Nhận xét
Từ kết quả phân tích ở bảng 3.1 cho thấy:
- 100% các chủng kiểm tra đều là vi khuẩn bắt màu gram dương (màu tím). - 100% các chủng kiểm tra đều không có khả năng di động (vi khuẩn chỉ mọc trên đường cấy) và không lên men đường mannitol.
- Sau 24 - 28 giờ nuôi cấy 100% các chủng vi khuẩn kiểm tra trên các môi trường đường (glucose, lactose, maltose, sucrose) đều phát triển lên men đường làm môi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng. Vi khuẩn sử dụng đường tạo thành các sản phẩm trung gian có tính axit làm giảm pH của môi trường. Môi trường chuyển sang màu vàng với chỉ thị phenol red.
- Trên môi trường Litmus milk, vi khuẩn C.perfringens được nuôi cấy trong môi trường Litmus milk sau 24 - 28 giờ trong tủ ấm 370C, 10% CO2, vi khuẩn phát
triển, lên men đường lactose, làm đông vón casein, môi trường chuyển từ màu tím sang nâu sang trắng với chỉ thị pH litmus.
- Trên môi trường Egg yolk, sau 24 giờ nuôi cấy trong điều kiện yếm khí ở tủ ấm 370C, 10% CO2, vi khuẩn phát triển sản sinh men Lecithinase, thủy phân lecithine tạo thành vòng trắng sữa xung quanh khuẩn lạc.
- 100% các chủng kiểm tra đều có phản ứng dương tính với phản ứng O – F (cả 2 ống đều chuyển từ màu tím sang màu vàng). Khi cấy vi khuẩn C.perfringens
vào môi trường O – F, vi khuẩn phát triển lên men đường trong môi trường tạo ra các sản phẩm trung gian có tính axit. Các sản phẩm này làm giảm pH môi trường.
- 100% các chủng kiểm tra sau 18 - 24 giờ nuôi cấy trong điều kiện yếm khí có phản ứng dương tính đối với phản ứng CAMP (xuất hiện dung huyết hình mũi tên trên bề mặt thạch). Nhân tố protein được tiết ra bởi loài Streptococus agalactiae có vai trò tăng cường hoạt tính của alpha toxin và theta toxin (có vai trò trong việc gây ra hiện tượng dung huyết). Do đó tăng cường điều kiện tiếp xúc và xúc tác thủy phân thành phần chủ yếu của màng hồng cầu cừu là sphingomyelin làm hồng cầu trở nên dễ vỡ tạo nên hiện tượng dung huyết mạnh hơn ở vùng tiếp xúc giữa hai đường cấy của hai loại vi khuẩn.
- Trên môi trương thạch máu: vi khuẩn phát triển tạo thành khuẩn lạc có các đặc điểm sau: Khuẩn lạc tròn, nhẵn và bóng; được bao bởi một vòng bên trong dung huyết hoàn toàn (do độc tố theta) và một vòng bên ngoài dung huyết không hoàn toàn (do độc tố alpha). Người ta gọi hiện tượng này là dung huyết beta (β).
- Trên môi trường SPS, vi khuẩn phát triển cho khuẩn lạc tròn màu đen, do vi khuẩn sinh H2S tác dụng với Fe có sẵn trong môi trường tạo thành FeS có màu đen.
Từ kết quả phân tích ở trên cho thấy tất cả các chủng vi khuẩn giám định đều mang đầy đủ các đặc tính sinh vật, hóa học của vi khuẩn C.perfringens như các tài liệu đã công bố [36], [20].