* Phương pháp thử độc lực của canh khuẩn
Xác định độc lực của canh khuẩn các chủng vi khuẩn C.perfringens phân lập được theo phương pháp của Carter (1984) [20]. Vi khuẩn được nuôi cấy trên môi
Giai đoạn Số chu kỳ Nhiệt độ (0C) Thời gian (phút)
Giai đoạn 1 1 94 4 94 1 55 1 Giai đoạn 2 30 72 1 Giai đoạn 3 1 72 10
trường Thioglycolate trong điều kiện yếm khí (95%N2, 5 % CO2) ở 37oC/16-24 giờ. Mỗi chủng tiêm cho 2 chuột, mỗi con tiêm 0,2 ml vào xoang phúc mạc. Theo dõi số lượng và thời gian chuột chết.
Hình 2.1. Phương pháp tiêm canh khuẩn vào xoang phúc mạc
* Phương pháp thử độc lực của độc tố typ A
Xác định độc lực của độc tố các chủng type A theo phương pháp của Garicía- Alvarado và cộng sự (1992) [26]. Vi khuẩn được nuôi cấy Thioglycolate trong điều kiện yếm khí (95%N2, 5 % CO2) ở 37oC/từ 8 – 12 giờ. Phá vỡ tế bào bằng máy khuấy siêu tốc (Ultrasonics), ly tâm tách độc tố ở 10.000 vòng/phút trong thời gian 30 phút, thu phần dịch nổi và tiêm tĩnh mạch cho chuột với liều 0,5 ml/con.
* Phương pháp thử độc lực của độc tố typ D
Xác định độc lực của độc tố các chủng type D theo phương pháp của Miserez và cộng sự (1998) [33]. Vi khuẩn được nuôi cấy Fluid Thioglycolate trong điều kiện yếm khí (95%N2, 5 % CO2) ở 37oC/ 8 – 12 giờ, ly tâm 10.000vòng/phút trong 25 phút ở 4oC, bỏ phần cặn, lấy phần nước trong ở trên, xử lý với dung dịch trypsin 0,25%, ủ ở 37oC trong 30 phút. Mỗi chủng tiêm cho 2 chuột, mỗi con tiêm 0,3 ml vào đường tĩnh mạch đuôi. Theo dõi số lượng và thời gian chuột chết. Chuột đối chứng được tiêm 0,3 ml nước lọc môi trường xử lý với dung dịch trypsin 0,25%.
Hình 2.2. Phương pháp tiêm độc tố vào tĩnh mạch đuôi của chuột