CHƢƠNG 1 : TỔNG QUAN
2.5 Xõy dựng phƣơng phỏp định lƣợng flavonoid trong nụ và lỏ vối
2.5.1 Định lƣợng flavonoid toàn phần bằng phƣơng phỏp trắc quang
Định lƣợng toàn phần flavonoid trong nụ và lỏ vối bằng phƣơng phỏp tắc quang: Thực hiện dựa trờn phản ứng của flavonoid với AlCl3 sẽ tạo phức màu hồng cú độ hấp thụ ỏnh sỏng cực đại ở bƣớc súng 510 nm. Đo độ hấp thụ của dung dịch ở bƣớc súng 510 nm rồi tớnh ra hàm lƣợng flavonoid (tớnh theo chất chuẩn CO-1 và catechin) tƣơng đƣơng với mẫu chuẩn làm cựng điều kiện.
Khảo sỏt lựa chọn dung mơi thớch hợp trong việc định lƣợng flavonoid toàn phần.
Dựa trờn phản ứng tạo phức của flavonoid với thuốc thử tạo màu trong việc lựa chọn bƣớc súng xỏc định.
Xõy dựng phƣơng phỏp phõn tớch theo cỏc chỉ tiờu: + Tớnh đặc hiệu
+ Độ lặp lại + Độ đỳng
+ khoảng tuyến tớnh
+ Giới hạn của phƣơng phỏp
2.5.2 Định lƣợng flavonoid chớnh bằng phƣơng phỏp HPLC
Khảo sỏt lựa chọn chƣơng trỡnh sắc ký thớch hợp để định lƣợng flavonoid chớnh trong nụ và lỏ vối.
Dựa trờn cụng thức phõn tử và cấu trỳc húa học của flavonoid chớnh chiết xuất đƣợc từ dƣợc liệu nụ vối, để tỡm cỏc điều kiện sắc ký phự hợp nhƣ: Bản chất pha tĩnh, thành phần pha động, bƣớc súng phỏt hiện, tốc độ dịng pha động, thể tớch tiờm mẫu, nồng độ dung dịch thử, dung mụi pha mẫu.
Xõy dựng phƣơng phỏp phõn tớch theo cỏc tiờu chỉ tiờu: - Tớnh đặc hiệu.
- Độ tuyến tớnh và khoảng nồng độ tuyến tớnh. - Độ chớnh xỏc.
- Độ đỳng: Độ đỳng đƣợc xỏc định bằng phƣơng phỏp thờm chuẩn và tớnh thơng qua tỷ lệ thu hồi:
Tỷ lệ thu hồi (%) = Hamluongtimthay
Hamluongthucchovao x 100% - Giới hạn của phƣơng phỏp
- Sự phự hợp của hệ thống sắc ký