3.1. Nghiên cứu khảo sát tối ƣu điều kiện tách 3TC,NVP và AZT
3.1.2. Mao quản và xử lý mao quản
Trong kỹ thuật điện di việc sử dụng mao quản silica đƣờng kính trong nhỏ hơn 100 µm sẽ làm mất ảnh hƣởng của nhiệt jun sinh ra trong ống mao quản và do vậy mới cho phép áp vào hai đầu mao quản điện thế cao tới 20 – 30kV. Hơn nữa kích thƣớc mao quản sẽ rất thuận lợi khi phân tích những mẫu có hàm lƣợng nhỏ nhƣ mẫu huyết thanh. Tuy nhiên, nếu mao quản có đƣờng kính q nhỏ thì thể tích mẫu nạp cũng bị giới hạn, điều này lại ảnh hƣởng đến độ nhạy phát hiện. Khoảng đƣờng kính trong của mao quản thƣờng là 25 – 150 µm. Tốt nhất nên dùng mao quản có đƣờng kính trong từ 25- 75 µm. Vì mao quản có ID lớn hơn 75 µm thƣờng cho hiệu ứng nhiệt Jun lớn và khó khống chế nhiệt độ mao quản khi điện di. Để phù hợp với điều kiện của phịng thí nghiệm loại mao quản chúng tôi sử dụng trong nghiên cứu này có đƣờng kính trong là 75 µm .
Chiều dài mao quản cũng là yếu tố quan trọng, vì muốn áp thế cao vào hai đầu mao quản thì chiều dài mao quản phải đủ lớn. Về mặt lý thuyết, thế áp vào mao quản thông thƣờng đảm bảo từ 200 – 600 V/cm là thích hợp. Việc chọn chiều dài mao quản chỉ có tính chất định tính phụ thuộc vào khoảng cách từ lọ mẫu đến detector và từ detector đến lọ đệm tùy thuộc vào hỗn hợp chất mẫu cần tách. Mao quản của chúng tôi sử dụng là loại mao quản silica trần, có tổng chiều dài là 64,5cm, chiều dài hiệu lực là 60 cm, loại bubble cell (có độ nhạy cao gấp 3 -5 lần so với cell thông thƣờng) của hãng HP. Để tạo flowcell trên mao quản, tại chiều dài 60 cm tính từ đầu mao quản loại bỏ lớp poliamit bằng cách đốt nóng một đoạn mao quản dài 2mm. Sau đó dùng giấy mềm tẩm axeton hoặc etanol lau sạch và lắp vào hệ điện di.
Điều kiện rửa mao quản: trong thời gian tiến hành điện di, mao quản đều đƣợc rửa để phục hồi và duy trì bề mặt mao quản ổn định, giảm sự hấp phụ của chất phân tích lên bề mặt mao quản, làm mới lại bề mặt để tạo điều kiện cho silanol điện ly, tạo bề mặt mao quản mang điện tích.
Thời điểm bắt đầu : lần lƣợt rửa bằng nƣớc deion 5 phút, dung dịch NaOH 1M 10 phút , dung dịch NaOH 0,1 M 5 phút và rửa lại bằng nƣớc deion 10 phút (tất cả các dung dịch trƣớc khi chạy đều đƣợc lọc qua màng lọc 0,2µm).
Giữa các lần chạy: 2 phút nƣớc cất deion- 1 phút NaOH 0,1 M – 1 phút nƣớc cất deion– 2 phút dung dịch đệm.
Thời điểm kết thúc: lần lƣợt rửa bằng nƣớc cất deion 5 phút, dung dịch NaOH 0,1M 5 phút, nƣớc cất deion 10 phút.