3.1. Nghiên cứu khảo sát tối ƣu điều kiện tách 3TC,NVP và AZT
3.1.3. Chọn phƣơng pháp bơm mẫu
Trong kỹ thuật điện di mao quản có thể đƣa vào mao quản bằng ba phƣơng pháp là phƣơng pháp điện động học (electrokinetic), phƣơng pháp thủy động học (hydrodynamic) và phƣơng pháp Xiphong (siphon). Trong đó phƣơng pháp điện động học và thủy động học đƣợc dùng rộng rãi. Nguyên tắc của phƣơng pháp điện là đặt một thế nhất định trong một thời gian nhất định vào đầu của hai điện cực, một
điện cực nhúng trong lọ mẫu và một điện cực kia nhúng trong lọ đệm. Trong khi đó hai đầu của mao quản cũng đƣợc nhúng vào hai lọ mẫu và đệm nói trên. Nhƣ thế những ion mẫu sẽ di chuyển vào mao quản tạo thành vùng mẫu đầu mao quản. Ion nào có kích thƣớc nhỏ, điện tích lớn sẽ đƣợc dẫn vào mao quản nhiều hơn. Trong mẫu nếu có hai chất phân tích có cùng nồng độ nhƣng điện tích khác nhau thì lƣợng ion của những chất này đƣợc dẫn vào mao quản khác nhau. Do vậy nồng độ chất phân tích đƣợc nạp vào mao quản sẽ khác so với nồng độ mẫu thực. Sự sai khác này sẽ lớn nếu thời gian bơm mẫu dài. Trong thực tế điều này khơng đáng ngại vì ngƣời ta có thể loại trừ bằng cách bơm mẫu trong thời gian ngắn và ở những điều kiện nhƣ nhau trong mọi thí nghiệm nghiên cứu, thời gian bơm mẫu ngắn ảnh hƣởng đến độ nhạy. Ngồi ra lƣợng mẫu bơm cịn phụ thuộc vào độ dẫn của dung dịch mẫu, đặc biệt ở những mẫu có nồng độ muối cao mà ta không thể biết trƣớc đƣợc nhƣ những mẫu nƣớc tiểu.
Trong phƣơng pháp bơm mẫu thứ hai là bơm mẫu theo kiểu thủy động lực học bao gồm trong kiểu bơm mẫu này là bơm bằng áp suất hoặc xiphong. Nguyên tắc của phƣơng pháp xiphong dựa trên sự chênh lệch độ cao của hai đầu ống mao quản đƣợc đặt cao thấp khác nhau một khoảng H, một đầu nhúng vào lọ chứa mẫu và đầu kia nhúng vào lọ chứa đệm để mẫu tự xiphong vào ống mao quản trong thời gian nhất định. Nhƣ thế mẫu nạp vào đƣợc đặt ở đầu mao quản cao. Phƣơng pháp này đơn giản nhƣng khi nạp một lƣợng mẫu nhỏ cỡ vài nl thì khó chính xác và áp dụng cho những hệ điện di tự tạo đơn giản, độ lặp lại kém. Vì vậy ít đƣợc dùng.
Phƣơng pháp bơm mẫu bằng áp suất là dùng một áp suất thích hợp để nén vào lọ chứa mẫu và tạo chân khơng phía đầu kia mao quản trong một thời gian nhất định. Do lực áp suất đẩy và hút mà một lƣợng mẫu sẽ đƣợc bơm vào đầu mao quản. Áp suất hay đƣợc dùng từ 50 – 300 mbar. Mẫu đƣợc bơm vào sẽ có nồng độ đều và giống với nồng độ của chất tan trong mẫu phân tích. Trong phƣơng pháp này chúng tơi chọn bơm mẫu theo phƣơng pháp thủy động lực học với áp suất là 50 mbar và cách bơm mẫu này sẽ đƣợc dùng trong suốt q trình thí nghiệm