Hình 3 .29 Sắc đồ píc sắc ký Rhodamine với các tỷ lệ dung môi chiết
Hình 3.32 Đường chuẩn(a) và sắc đồ (b)khi thêm chuẩn đối với mẫu siro
Ta có:
Cx= a/b = 0,0081(ppm) (nhỏ hơn LOQ)
Theo cơng thức tính hàm lượng chất phân tích trong 0,5ml mẫu ban đầu, tính được
mx = 1,62.10-5(mg)
Hay khối lượng rhodamine B có trong 1l mẫu siro dâu là 0,0324mg/l Hiệu suất thu hồi của chất phân tích trong mẫu là
H= 0,0081/0,01 x 100=81%
Nhận xét: Với các kết quả phân tích trên, nhận thấy rằng, trong đối tượng mẫu siro dâu, hàm lượng rhodamine B nằm trong giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp, hiệu suất thu hồi tương đối tốt. Như vậy với đối tượng phân tích là mẫu siro dâu thì dung mơi chiết và phương pháp tối ưu lựa chọn là phù hợp và cho hiệu quả phân tích tốt. Kết quả phân tích cũng cho thấy trong mẫu siro dâu được phân tích khơng chứa rhodamine B.
3.5.2.5. Mẫu nƣớc ngọt hƣơng dâu
-0.010 -0.005 0.000 0.005 0.010 0.015 0.020 0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000 80000 90000 100000 Spi c(mAu.s) nong do RhodamineB(ppm) Y = A + B * X
he so gia tri sai so ------------------------------------------------------------ A 27844.5 452.80377 B 3.43415E6 35074.02885 ------------------------------------------------------------ R SD N P ------------------------------------------------------------ 0.99995 496.02167 3 0.0065 ------------------------------------------------------------
Quá trình chiết mẫu và phân tích nước ngọt hương dâu cũng được tiến hành tương tự mẫu siro.
Đối với mẫu nước ngọt hương dâu,quy trình chiết như sau: mẫu nước ngọt được đong chính xác 1ml bằng pipet rồi chuyển vào bình định mức 25ml, thêm 10 ml hỗn hợp etanol và nước theo tỷ lệ 40:60, lắc đều, siêu âm 60 phút. Sau khi chiết, lấy 2,0ml dung dịch chiết lọc qua giấy lọc thường, rồi lọc qua màng lọc Whatman 0,45m, lấy dịch chiết bơm vào cột sắc ký HPLC với các điều kiện sắc ký như đã chọn (mục 3.4.1).
Kết quả phân tích mẫu rhodamine B trong mẫu nước ngọt hương dâu được trình bày trong bảng sau:
Bảng 3.21. Kết quả phân tích mẫu nước ngọt hương dâu
TT Lƣợng mẫu thực (ml)
Lƣợng rhodamine B chuẩn thêm vào (ppm)
Diện tích píc (mAu.s)
1 1,0 0,0 96898,0
2 1,0 0.1 169861
3 1,0 0.2 248919
Kết quả được tính tốn theo phần mềm thống kê Origin 7.5 như sau:
-0.20 -0.15 -0.10 -0.05 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0 20000 40000 60000 80000 100000 120000 140000 160000 180000 200000 220000 240000 260000 Spi c(mAu.s) nong do Rhodamine B(ppm) Y = A + B * X
he so gia tri sai so ------------------------------------------------------------ A 95882.16667 2271.47239 B 760105 17594.74945 ------------------------------------------------------------ R SD N P ------------------------------------------------------------ 0.99973 2488.27333 3 0.01473 ------------------------------------------------------------ 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 min 0 2500 5000 7500 10000 ( a) (b)
Hình 3.34. Đường chuẩn (a) và sắc đồ (b) khi thêm chuẩn đối với mẫu nước ngọt hương dâu
Ta có: Cx= a/b = 0,126(ppm)
Theo cơng thức tính hàm lượng chất phân tích trong 1ml mẫu ban đầu, tính được
mx =0,1386 (mg)
Hay khối lượng rhodamine B trong 1l mẫu nước ngọt hương dâu là 138,6mg/l Hiệu suất thu hồi của chất phân tích trong mẫu là
H= 0,126/0,1 x 100=126%
Nhận xét: Với các kết quả phân tích trên, nhận thấy rằng, trong đối tượng mẫu nước ngọt, hàm lượng Rhodamine B nằm trong giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp, hiệu suất thu hồi tốt (126%). Như vậy với đối tượng phân tích là mẫu nước ngọt hương dâu thì dung mơi chiết và phương pháp tối ưu lựa chọn là phù hợp và cho hiệu quả phân tích tốt.
Kết quả phân tích cũng cho thấy trong mẫu nước ngọt được phân tích có chứa 138,6mg/l rhodamine B .
KẾT LUẬN
Trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, nhằm ứng dụng kỹ thuật phân tích HPLC sử dụng detector UV-Vis để xác định hàm lượng rhodamine B trong thực phẩm, chúng tôi thu được một số kết quả sau đây:
1. Đã chọn được các điều kiện phù hợp cho việc xác định hàm lượng
rhodamine B có trong các mẫu thực phẩm bằng kỹ thuật HPLC sử dụng detetơ UV-Vis:
Pha tĩnh: RP- C8 (4,6 x 150 mm, 5m)
Pha động: 85% ACN- 15% đệm (HCOOH- 7mM natri heptansunfonat), pH=3 Tốc độ pha động: 0,8 ml/phút Nhiệt độ cột tách: 300 C Thể tích vịng mẫu: 20l Detector: UV-Vis 550 nm
2. Đã đánh giá phương pháp phân tích:
Khoảng tuyến tính của Rhodamine B: 0,01- 2ppm Giới hạn phát hiện:
+ Theo phương pháp phân tích trực tiếp là 1ppb + Theo phương pháp đường chuẩn là 15ppb Giới hạn định lượng:
+ Theo phương pháp phân tích trực tiếp là 3,33ppb + Theo phương pháp đường chuẩn là 50,2ppb
3. Khảo sát mẫu thực
Đã chọn được quy trình phân tích và khảo sát được các dung mơi chiết
Trên cơ sở quy trình tối ưu tìm được đã tiến hành xác định được hàm lượng rhodamine B trong các mẫu thực phẩm gồm mẫu hạt dưa, mẫu bánh xu xê, mẫu siro dâu, mẫu nước ngọt hương dâu với độ lặp lại tốt.
Kết quả xác định các mẫu thực cho thấy: trong các mẫu thực phẩm
đang được lưu hành trên thị trường đã lấy mẫu, hàm lượng rhodamine B xác định được đều nằm trong giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp. Chứng tỏ mặc dù bị cấm sử dụng trong chế biến và bảo quản thực phẩm, nhưng rhodamine B vẫn đang được sử dụng khá phổ biến trong một số loại thực phẩm đã kiểm tra.
Từ kết quả thu được, chúng tôi thấy phương pháp HPLC sử dụng detectơ UV-Vis có độ nhạy cao, thích hợp cho việc xác định hàm lượng rhodamine B có trong các loại thực phẩm với cách xử lý mẫu thích hợp.
Chúng tơi hy vọng những nghiên cứu trên sẽ góp phần vào việc ứng dụng kỹ thuật HPLC sử dụng detectơ UV-Vis nói riêng và các kỹ thuật HPLC nói chung để xác định rhodamine B trong các đối tượng mẫu thực phẩm, phục vụ trong lĩnh vực an toàn vệ sinh thực phẩm bảo vệ sức khoẻ người tiêu dùng.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Thái Bình (18/ 11/2009), “Rhodamine B có trong vị thuốc đông y là chất
gây ung thư”, báo Sức khoẻ và đời sống.
2. Nguyễn Thạc Cát, Từ Vọng Nghi, Đào Hữu Vinh (1980) “Cơ sở ký thuyết
hố học phân tích”, nhà xuất bản Đại học và trung học chuyên nghiệp, Hà Nội.
3. Nguyễn Xuân Dũng, Từ Vọng Nghi, Phạm Luận (1986) “Các phương
pháp tách- Sắc ký lỏng cao áp”, Đại học Tổng hợp Amsterdam, Hà Nội.
4. Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung
(2003), “Hố học phân tích- Phần II- Các phương pháp phân tích cơng cụ”, ĐHQG Hà Nội.
5. Nguyễn Đắc Kiên (2009- 2010), “Nghiên cứu sự hình thành và tích lũy
độc tố afltoxin trong bảo quản thức ăn thủy sản”, luận văn thạc sỹ khoa học- Đại học khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia, Hà Nội.
6. Phạm Luận (1999), “Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao”,
Đại học Tổng hợp Hà Nội.
7. Bùi Thị Ngoan, Trần Thắng, Đào Tố Uyên, Phạm Văn Hoan (2009), “Xác
định Sudan I trong một số loại gia vị bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)”, tạp chí y học thực hành, số 1 (641+642), trang 58-60.
8. Đỗ Văn Quân (2007), “Xác định các hợp chất Sudan bằng phương pháp
sắc ký lỏng có độ phân giải cao”. Luận văn thạc sỹ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội.
9. TCVN 8670-2011 về việc xác định Rhodamine B bằng HPLC
10. An activity of asean committee on science and technology federation of
of prohibited colorants in cosmetic products by TLC and HPLC”, ACM SIN 02, pp 1-6.
11. Brian Stuart and M.Walker (2006) “Analysis of illegal Dyes in Chili
Powder by LC- UV”, Statutory analysis government chemist: Programme ad hoc project 1, pp 1-11.
12. C.Minier (1996) “Rhodamine B accumulation and MXR protein
expression in musscle blood cells: effects of exposure to vicristine” Marine ecology progress series vol 142 pp 165-173.
13. Carcinogen, Pesticide Branch, (2/1989), Rhodamine B, OSHA analytical
Laboratory- Salt Lake city- Utah.
14. Geertruida Sihombing (2001), “An Exploratory Study on three Synthetic
Colouring Matters Commonly Used as Food colours in Jakarta”, Master Theses from JKPKBPPK.
15. Hu- sheng cheng (2007) “Indentification of Rhodamine B 6g and
Rhodamine B dyes present in ballpoint pen ink using high performance liquidchromatography and UV vis spectro mettry”, Frorensic science journal pp21-37.
16. L.Gagliardi, D.De Orsi, G.Cavazzutti, G.Multari, D. Tonelli, (6/1996),
“HPLC determination of rhodamine B (C.I. 45170) in cosmetic products”,
Chromatographia Vol.43.ultari
17. Noureddine Barka and CS(2008) “Factors influencing the photocatalytic
degradation of Rhodamine B by TiO2- coated non- woven paper” journal of photochemistry and photobiology A: Chemistry 195, pp 346-351.
18. Giao Xuân, (1/2/2010), “Chili powder maker suspended for Rhodamine B
19. Petr botek, Jan Poustka (2007). “Determination of banned dyes in spices by liquid chromatography- Mass spectrometry”, Czech J. Food Sci, vol.25, No.1, pp 17- 24.
20. R.W. Mason và L.R.Edwards (1989), “High-performance liquid
chromatographic determination of rhodamine B in rabbit and human plasma”, Journal of Chromatography, 491 page 468- 472.
21. Wirasto, Skrisi (2008). “Analisis Rhodamine B dan metanil yellow danam
minuman jajana anak sd di kecamatan laweyan kotamadya surakarta
dengan metade kromatography lapis tipis” Fakultas Farmasi,
Muhammaadiyah surakarta, Indonesia, pp 2-17
22. http://en.wikipedia.org/wiki/Rhodamine_B (7/2011) 23. http://vietbao.vn/Suc-khoe/Phat-hien-chat-doc-Rhodamine-B-trong-gia- vi/70077015/248/ (9/2/2007) 24. http://wordpress.com/2010/03/02/vấn-đề-an-toàn-thực-phẩm-tại-việt- nam-nổi-cộm-trở-lại-với-vụ-bột-gia-vị-nhiễm-rhodamine B/Tonelli 2. 25. http://duoclieu.net/Dlieuhoc/Tools/Phuongphap/SKLM.htm (6/2011) 26. www.asean.org/MRA-Cosmetic/Doc-2.pdf (02/12/2005)
27. http://www.leo.com (9/2008) “Using LC- TOFMS for screening of Sudan
Dyes in food”.
28. http://duocphamvn.com/baiviet/6159-28-TCN198-2004-Histamin-trong-
san-pham-thuy-san-Phuong-phap-dinh-luong-bang-sac.thuoc
29. http://3c.com.vn/Story/vn/tintucvasukien/diemtin/2007/2/8174.htmlc