CHƢƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.1. Phƣơng pháp khảo sát xác định các điều kiện thích hợp
Khảo sát điều kiện phân tích tối ƣu đƣợc thực hiện trên thiết bị CE-C4D với mao quản có chiều dài 55 cm, đƣờng kính trong 50 µm, thế áp vào hai đầu mao quản -15 kV. Các điều kiện này giữ nguyên trong tất cả các thí nghiệm. Các điều kiện cần khảo sát gồm: dung dịch đệm điện di, chiều cao và thời gian bơm mẫu. Việc khảo sát đƣợc thực hiện theo phƣơng pháp đơn biến, thay đổi một thành phần trong khi cố định các thành phần còn lại để thu đƣợc điều kiện tối ƣu nhất.
2.2.1.1. Khảo sát dung dịch đệm điện di
Với hỗn hợp chất phân tích amlodipin besilat và perindopril tert-butylamin, dung dịch đệm điện di đƣợc khảo sát bằng cách thay đổi thành phần hệ đệm, pH và nồng độ đệm tại thế tách -15 kV, bơm mẫu ở độ cao 20 cm trong 30 s.
Việc khảo sát pH đƣợc thực hiện trong khoảng pH từ 4, 5, 6, 7, 8 đến 9. Điều chỉnh pH bằng máy đo pH trên cơ sở giữ nguyên nồng độ hợp phần bazơ và thêm hợp
Thành phần hệ điện di thay đổi với 3 hệ đệm Tris/ace, Tris/asc, Arg/ace. Trong đó giữ nguyên nồng độ hợp phần bazơ (Tris, Arg) 10mM và dùng hợp phần acid (Ace, Asc) điều chỉnh đến pH 8.
Nồng độ đệm điện di đƣợc khảo sát ở các mức nồng độ 7 mM, 10 mM và 15 mM với hệ đệm Tris/ace ở pH = 8.
2.2.1.2. Khảo sát thời gian bơm mẫu
Khảo sát thời gian bơm mẫu bằng cách giữ nguyên các điều kiện khảo sát đƣợc tối ƣu thu đƣợc ở các thí nghiệm khác và thay đổi thời gian bơm 10 s, 20 s, 30 s và 50 s.
2.2.1.3. Khảo sát chiều cao bơm mẫu
Chiều cao bơm mẫu đƣợc thực hiện ở các mức 15 cm, 20 cm, 25 cm, 28 cm với các điều kiện đã tối ƣu khảo sát ở trên.
2.2.2. Phƣơng pháp xử lý mẫu
2.2.2.1. Phương pháp xử lý mẫu thuốc
Các mẫu dƣợc phẩm đƣợc mua ở các cửa hàng thuốc ở Hà Nội và đƣợc bảo quản trong q trình phân tích. Thơng tin về các mẫu dƣợc phẩm phân tích đƣợc nêu trong bảng 2.1.
Bảng 2.1. Thông tin và đặc điểm của từng loại mẫu dƣợc phẩm
Tên thuốc Đặc điểm Xuất xứ Hàm lƣợng
Coveram Dạng viên, 30 viên/lọ Servier Ireland Industries Ltd (số lô: 234410 , hạn dùng: 10/2019)
Mỗi viên thuốc chứa 5 mg amlodipin besilat và 5mg perindopril tert butylamin trong 1 viên nén, còn lại là tá dƣợc
Coversyl Dạng viên, 30 viên/ lọ
Les laboratoires servier Industries (số lô: 619010, hạn dùng:
03/2020)
Mỗi viên thuốc chƣa chứa 5mg perindopril tert butylamin trong 1 viên nén, còn lại tá dƣợc Ambelin Dạng viên, 10 viên/ vỉ Công ty TNHH liên doanh HASAN – DEMAPHARM (số lô: 00416, hạn dùng: 11/2019)
Mỗi viên thuốc chƣa chứa 5mg amlodipin besilat trong 1 viên nén, còn lại tá dƣợc Amlodipin Dạng viên, 10 viên/ vỉ Công ty CP Dƣợc Trung Ƣơng VIDIPHA(số lô: 721116 , hạn dùng: 11/2019)
Mỗi viên thuốc chƣa chứa 5mg amlodipin besilat trong 1 viên nén, còn lại là tá dƣợc
2.2.2.2. Phương pháp xử lý mẫu nước tiểu
Mẫu nƣớc tiểu đƣợc lấy từ 3 ngƣời bệnh có tiền sử bệnh huyết áp mãn tính và đang sử dụng thuốc có chứa hoạt chất amlopidin ở 3 thời điểm liên tiếp 10h, 12h, 14h sau khi sử dụng thuốc.
Vì các mẫu nƣớc tiểu thƣờng có nền mẫu phức tạp và hàm lƣợng thuốc trong nƣớc tiểu thƣờng nhỏ nên cần đƣợc xử lý bằng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng để làm giàu mẫu và loại bỏ 1 phần các tạp chất trƣớc khi bơm mẫu vào thiết bị CE.
Phƣơng pháp chiết lỏng lỏng là kĩ thuật chiết cho chất phân tích tan ƣu tiên vào một trong hai pha lỏng không trộn lẫn, còn tạp chất và các chất cần tách khác ở lại trong pha kia, từ đó tách chất phân tích ra khỏi nền hoặc các tạp chất ra khỏi chất phân tích [3].
Các bƣớc chiết lỏng – lỏng: