Tổng XN HBV (+) HCV(+) HIV(+) Cobas® TaqScreen MPX PCR (ID) n=194 4,12% (n=8) 0% (n=0) 0% (n=0) Kết quả xét nghiệm ID NAT trên 194 mẫu máu hiến của chúng tôi tỷ lệ phản ứng HBV 4,12%, HCV 0%, HIV 0% .
Trần Vân Chi 61 Luận văn Thạc sÜ Khoa häc
So sánh tỷ lệ phản ứng ID NAT HBV, HCV, HIV với nghiên cứu của:
Tác giả Dong J và cộng sự (2013) nghiên cứu ID NAT 178447 mẫu máu hiến ở Trung Quốc tỷ lệ nhiễm HBV là 1:1056 (0,94‰) ngƣời hiến máu. Vì có thể cỡ mẫu nghiên cứu của chúng tơi cịn nhỏ và chủ yếu là các mẫu có phản ứng giả với xét nghiệm miễn dịch ban đầu.
Tác giả Vermeulen M, Coleman C và cộng sự (2013) nghiên cứu độ nhạy của xét nghiệm ID NAT và xét nghiệm MP NAT phát hiện giai đoạn cửa sổ phụ thuộc trực tiếp vào kích cỡ pool. Ấn độ, nghiên cứu trên 107 mẫu máu hiên HBsAg, HBV ID DNA phản ứng (Ultrio) và 29 mẫu HBV DNA âm tính, HBsAg dƣơng đƣợc sử dụng so sánh với xét nghiệm hịa lỗng NAT. Độ nhạy của xét nghiệm đƣợc kiểm tra bằng tiêu chuẩn Châu Âu.
3.2.3. Kết quả xét nghiệm NAT gồm MP NAT và ID NAT. (xem phụ lục kết quả xét
nghiệm NAT dương tính).
Bảng 3.10: Tỷ lệ HBV, HCV, HIV phản ứng bằng kỹ thuật MP NAT và ID NAT
Tổng XN HBV (+) HCV(+) HIV(+)
Procleix Ultrio TMA
(pool4+IDT) 81040 98 00 00 Cobas® TaqScreen MPX PCR (pool6+IDT) 111181 79 01 02 Tổng (‰) 192221 177 1:1086 (0,92‰) 01 1:192221 (0,005‰) 02 1:96110 (0,01‰) Tỷ lệ HBV, HCV, HIV phản ứng tƣơng ứng là 1:1086 ; 1:192221; 1:96110 (HBV 0,92‰, HCV 0,0052‰, HIV 0,01‰).
Trần Vân Chi 62 Luận văn Thạc sĩ Khoa häc
Bảng 3.11: Tỷ lệ HBV, HCV, HIV phản ứng xét nghiệm ID NAT và MP NAT ở ngƣời hiến máu so với các tác giả
T T
Tác giả Địa điểm Năm
Số đơn vị máu hiến HBV HCV HIV 1 Soisaang Phikulsod và cộng sự TTTM Thái Lan 2009 486676 1:2800 1:490000 1:97000 2 Yaseen S.G. và cộng sự Malaysia 2013 1388 1:277 0 0 3 Dong J. và cộng sự China 2011 178447 1:1055 0 0 4 R.N. Makroo và cộng sự Ấn Độ 2008 12224 1:2037 1:12224 1:6112
5 Moiz B. và cộng sự Paskistan Nam 2014 41304 1:5900 1:1529 1:41304
6 ElEkiaby M. và cộng sự Ai cập 2009 15655 Ko nghiên cứu 1:3100 Ko nghiên cứu 7 Jose Eduardo Levi
và cộng sự
SaoPaulo
Brazil 2013 24441 1:67265 1:271387 1:204951
VHHTMT
W 2015 192221 1:1086 1:192221 1:96110
Tỷ lệ NAT HBV phản ứng trong nghiên cứu của chúng tôi đều cao hơn các nghiên cứu của các tác giả khác có thể do nhiều nguyên nhân nhƣ tỷ lệ nhiễm trong quần thể cao. Tỷ lệ nhiễm HBV ở khu vực Đơng Nam Á cao. Có thể do nhiễm HBV thể ẩn (OBI). Nhiễm HBV thể ẩn (OBI) đƣợc định nghĩa là sự có mặt của HBV DNA trong máu hoặc mô gan ở bệnh nhân âm tính HBsAg nhƣng bệnh nhân có hoặc khơng có kháng thể HBV (Prasun Bhattacharya và cộng sự 2007), ( Dong Hee Seo và cộng sự 2015). Hoặc cũng có thể do chúng tơi đang trong giai đoạn chỉnh lý kỹ thuật, nên tỷ lệ dƣơng tính giả NAT HBV cao. Một nghiên cứu trên ngƣời hiến máu ở Đông Nam Á tỷ lệ gặp genotype B và C là chủ yếu.
Trần Vân Chi 63 Luận văn Thạc sĩ Khoa häc
Tỷ lệ NAT HCV phản ứng trong nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn trong nghiên cứu của các tác giả khác. Có thể do kỹ thuật xét nghiệm sàng lọc miễn dịch chúng tôi áp dụng là kỹ thuật mới, có độ nhạy và độ đặc hiệu cao.
Tỷ lệ NAT HIV phản ứng trong nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn tỷ lệ nhiễm NAT HIV ở mẫu máu hiến ở Thái Lan và Ấn Độ, phù hợp với tình hình nhiễm HIV ở Việt Nam. Chƣơng trình phịng chống HIV/AIDS theo WHO báo cáo tỷ lệ nhiễm mới HIV đã đƣợc khống chế từ năm 2013, tỷ lệ nhiễm HIV Việt Nam không tăng nhiều cho thấy hiệu quả hoạt động của chƣơng trình phịng chống HIV/AIDS của Bộ Y tế và chính phủ Việt Nam. Nhƣ vậy, mặc dù các Quốc gia rất nỗ lực trong việc nâng cao ý thức, nhận thức của ngƣời hiến máu về an toàn truyền máu, nhƣng tỷ lệ nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ huyết thanh trong các nghiên cứu cũng phần nào phản ánh tỷ lệ nhiễm bệnh HIV mới trong các quần thể.
3.2.4. KQXN ngƣời hiến máu HBV NAT đƣợc quay lại làm xét nghiệm kiểm tra tình trạng sức khỏe.
Chúng tôi tiến hành tƣ vấn cho ngƣời hiến máu, tất cả những ngƣời hiến máu có kết quả phản ứng sau 3 tháng sẽ đƣợc gửi thƣ và gọi điện thoại mời đến lấy máu xét nghiệm lại để kiểm tra tình trạng sức khỏe. Có nhiều ngƣời hiến máu không quay trở lại để tƣ vấn. Trong số 09 ngƣời hiến máu có HBV NAT phản ứng quay lại làm xét
nghiệm tƣ vấn phát hiện đƣợc 01 ngƣời hiến máu có nhiễm HBV giai đoạn cửa sổ.
Bảng 3.12: KQXN tƣ vấn ngƣời hiến máu giai đoạn cửa sổ HBV mã số BM2.11573
Ngày Roche Elecsys HBsAg II ECLIA (S/CO) Abbott Architect HBsAg Qual II CMIA (S/CO) Pool 6- Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) ID-Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) 21/5/2015 0,87 0,21 34,6 36,3 31/8/2015 1,59 1,79 NA NA
NA: Không xét nghiệm
S/CO: Tỷ số mẫu trên ngƣỡng. CT: Cycles of threshold.
Trần Vân Chi 64 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
Ngồi ra, chúng tơi cịn thấy một số trƣờng hợp khác ngƣời hiến máu quay lại xét nghiệm kiểm tra có kết quả nhƣ sau:
03 NHM có NAT HBV phản ứng sau 3 tháng đến xét nghiệm tƣ vấn NAT HBV
không phản ứng và anti HBc total phản ứng. Chúng tôi cho rằng đây là nhiễm HBV thể ẩn OBI sau 3 tháng đến xét nghiệm thì khơng phát hiện đƣợc HBV DNA trong huyết tƣơng, chỉ có thể phát hiện đƣợc trong gan hoặc do sau q trình điều trị HBV khơng còn vi rút HBV chỉ còn kháng thể HBc. Ở nghiên cứu này chúng tơi chƣa có điều kiện khai thác tiền sử ngƣời hiến máu, sinh thiết gan để xác định chẩn đoán.
01 NHM có NAT HBV phản ứng đến xét nghiệm tƣ vấn NAT HBV không
phản ứng và anti HBc total không phản ứng. Trƣờng hợp này chúng tôi cho rằng phản ứng giả NAT HBV.
04 NHM có NAT HBV phản ứng đến xét nghiệm tƣ vấn có kết quả NAT HBV
phản ứng và kết quả xét nghiệm miễn dịch khơng phản ứng, chúng tơi cho rằng có thể đây là trƣờng hợp nhiễm HBV thể ẩn.
Ngƣời hiến máu BM2.11573 giai đoạn cửa sổ huyết thanh. Thơng thƣờng trong chẩn đốn HBV thƣờng dựa trên sự có mặt của HBsAg có trong máu. Tuy nhiên, việc sàng lọc máu trong các ngân hàng máu thì việc xét nghiệm HBsAg không đủ phát hiện nhiễm HBV gây ra lây nhiễm trong truyền máu, khi không phát hiện đƣợc HBsAg trong máu không loại trừ đƣợc việc có mặt HBV DNA trong máu (nhiễm HBV tiềm ẩn OBI) theo tác giả Prasun Bhattacharya (2007) và tác giả Dong Hee Seo (2015) nghiên cứu OBI. Ngƣời hiến máu có thể nhiễm HBV nhƣng khơng thể phát hiện đƣợc HBsAg, ngƣời có nhiễm HBV đƣợc chỉ ra bằng xét nghiệm anti-HBc phản ứng và HBV DNA phản ứng có thể là nguồn lây nhiễm HBV.
Để giảm nguy cơ truyền nhiễm HBV, bên cạnh việc xét nghiệm sàng lọc HBsAg cho đơn vị máu hiến, cần xét nghiệm NAT HBV và anti HBc để giảm thiểu nguy cơ truyền nhiễm HBV cho ngƣời nhận máu. Nhƣng việc xét nghiệm anti HBc
Trần Vân Chi 65 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
không phải nƣớc nào cũng đáp ứng, anti HBc không phù hợp cho các nƣớc có vùng dịch tễ HBV ở mức trung bình, nhƣ Nhật Bản, họ khơng sử dụng xét nghiệm anti HBc vì loại bỏ những bịch máu phản ứng có tỷ lệ cao. NAT HBV có thể phát hiện đƣợc HBV giai đoạn cửa sổ. Do đó, mặc dù giá thành cao, NAT HBV vẫn đƣợc sử dụng cho xét nghiệm sàng lọc máu ở những nƣớc nằm trong vùng dịch tễ HBV cao.
Theo kết quả khảo sát quốc tế, vào năm 2008 có 170 NAT HBV phản ứng trên tổng số 19887649 đơn vị máu hiến, tần suất nhiễm HBV thể ẩn là 8,55:1000000 đơn vị máu. Để phát hiện nhiễm HBV thể ẩn, đảm bảo an tồn cho đơn vị máu truyền thì MP NAT có thể đƣợc sử dụng để làm giảm giá thành xét nghiệm ở các nƣớc đang phát triển. Tuy nhiên, các nƣớc có vùng dịch tễ nhiễm HBV cao, MP NAT cho nhiều kết quả pool ban đầu phản ứng, sau đó nhiều chế phẩm sẽ phải để lại chờ kết quả xét nghiệm ID NAT cho đến khi tìm ra mẫu phản ứng. Do đó làm sàng lọc ID NAT tốt hơn là sàng lọc MP NAT khi ở vùng có dịch tễ cao. HBV sao chép chậm hơn so với HIV và HCV, và thời gian tăng lên gấp đơi HBV ƣớc tính khoảng 2,56 ngày. Do đó MP NAT để phát hiện HBV ít hiệu quả hơn phát hiện HCV và HIV. Mỗi quốc gia sẽ phải có chiến lƣợc xét nghiệm sàng lọc cho chính mình dựa trên quần thể nhiễm HBV, bằng các phƣơng pháp sàng lọc khác nhau và giá thành hiệu quả nhất.
Trần Vân Chi 66 Luận văn Thạc sÜ Khoa häc
Trần Vân Chi 67 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
3.2.5. KQXN ngƣời hiến máu HCV NAT đƣợc quay lại làm xét nghiệm kiểm tra tình trạng sức khỏe Chúng tôi phát hiện đƣợc 01 mẫu NAT dƣơng tính với HCV.
Ngƣời hiến máu đƣợc gọi điện mời đến tƣ vấn, nhƣng ngƣời hiến máu không đến.
Bảng 3.13: KQXN ngƣời hiến máu giai đoạn cửa sổ HCV mã số ACA.67515
Ngày hiến máu Roche Elecsys anti HCV ECLIA (S/CO) Abbott Architect anti HCV CMIA (S/CO) Pool 6- Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) ID-Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) Định lƣợng HCV RNA* (copies/ ml) 3/5/2015 0,047 0,070 21,1 18,3 4,46x106
S/CO: Tỷ số mẫu trên ngƣỡng. CT: Cycles of threshold.
*: Ngƣỡng phát hiện 2,5x102-5x107 copies/ml .
Mẫu máu đã đƣợc xét nghiệm định lƣợng HCV số lƣợng HCV RNA đƣợc khẳng định là nhiễm HCV, nhƣng do ngƣời hiến máu không quay lại làm xét nghiệm tƣ vấn nên chúng tơi chƣa có bằng chứng HCV ở giai đoạn chuyển đổi huyết thanh.
Tác giả Silvano Wendel (2007) nghiên cứu 139678 ngƣời hiến máu có 315 mẫu HCV RNA phản ứng trong đó có 310 mẫu khẳng định bằng nested-PCR dƣơng tính và anti HCV phản ứng, NAT phản ứng khi có nồng độ viral cao có trên 5x105 copies/ml.
Tác giả Soisaang Phikulsod (2009) nghiên cứu 242363 mẫu máu hiến bằng máy xét nghiệm Cobas s201 và sinh phẩm TaqScreen MPX phát hiện đƣợc 01 mẫu NAT phản ứng HCV. Theo dõi tình trạng nhiễm HCV ngƣời hiến máu, sau khoảng 60 ngày (3/12/2007 đến 30/1/2008) ngƣời hiến máu đến làm xét nghiệm, ngƣời hiến máu có chuyển đổi huyết thanh nhiễm HCV. Nhóm nghiên cứu không làm xét nghiệm khẳng định cho đơn vị máu hiến mà chỉ làm xét nghiệm ở các lần ngƣời hiến máu đƣợc mời đến làm xét nghiệm tƣ vấn để theo dõi diễn biến huyết thanh học ở ngƣời hiến máu.
Trần Vân Chi 68 Luận văn Thạc sĩ Khoa häc
Trong nghiên cứu của chúng tôi, anti HCV vẫn chƣa phát hiện đƣợc, nhƣng MP NAT pool 6 Cobas® TaqScreen MPX phát hiện đƣợc, định lƣợng HCV RNA là 4,46x106 copies/ml. Nhƣ vậy cho thấy độ nhạy của xét nghiệm MP NAT là hiệu quả cho an toàn truyền máu đặc biệt sử dụng trên sinh phẩm Cobas TaqScreen MPX.
Theo Roche báo cáo độ nhạy chuyển đổi huyết thanh của sinh phẩm Cobas TaqScreen MPX làm với 20 bộ mẫu chuyển đổi huyết thanh thƣơng mại làm ID NAT và MP NAT (pool6) so với sinh phẩm ORTHO HCV Version 3.0 ELISA và sinh phẩm ABBOTT PRISM HCV plus. Cobas TaqScreen MPX với xét nghiệm ID NAT có số ngày phát hiện sớm hơn số ngày 2 sinh phẩm miễn dịch có thể phát hiện là 24-25 ngày, với xét nghiệm MP NAT pool 6 phát hiện sớm hơn số ngày 2 sinh phẩm miễn dịch trên có thể phát hiện là 23-24 ngày. Có 1/20 bộ mẫu chuẩn Cobas TaqScreen MPX không phát hiện đƣợc sớm hơn 2 sinh phẩm miễn dịch trên.
Theo Roche báo cáo độ nhạy HCV RNA theo tiêu chuẩn WHO Second International Standard for HCV (96/798) trên 90% phản ứng ở nồng độ từ 10IU/mL, tƣơng đƣơng 9-27 copies/ml áp dụng theo tiêu chuẩn quy đổi (hệ thống tự động) của Cobas Amplicor HCV Monitor v2.0 là 1IU/mL = 0,9 copies/ml, (hệ thống bán tự động) là 1IU/mL=2,7 copies/ml.
Theo Roche báo cáo độ nhạy Genotype/ Subtype nghiên cứu trên 74 mẫu nhiễm HCV có genotype (8 genotype 1a, 13 genotype 1b, 1 genotype 2, 7 genotype 2a, 1 genotype 2a/c, 9 genotype 2b, 8 genotype 3a, 1 genotype 3a/b, 6 genotype 4, 1 genotype 4a, 1 genotype 4b/4c, 1 genotype 4h, 2 genotype 5, 9 genotype 5a, 2 genotype 6 và 4 genotype 6a) u phỏt hin c.
Trần Vân Chi 69 LuËn văn Thạc sĩ Khoa học
Trần Vân Chi 70 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
3.2.6. KQXN ngƣời hiến máu HIV NAT đƣợc quay lại làm xét nghiệm kiểm tra tình trạng sức khỏe.
Chúng tơi phát hiện đƣợc 02 mẫu NAT dƣơng tính với HIV.
Bảng 3.14: KQXN ngƣời hiến máu giai đoạn cửa sổ HIV mã số ACA.78780
Ngày hiến máu Roche Elecsys HIVAgAb combi PT ECLIA (S/CO) Abbott Architect HIVAgAb Combo CMIA (S/CO) SD Bioline HIV1/2 3.0 Rapid test Pool 4- Ultrio Elite TMA (S/CO) IDT- Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) Định lƣợng HIV ARN*(copie s/ ml) 25/9/2015 0,475 0,25 NA 12,6 26,7 Phát hiện 6/11/2015 65,18 6,67 Phản ứng NA NA NA
S/CO: Tỷ số mẫu trên ngƣỡng. CT: Cycles of threshold.
*: Ngƣỡng phát hiện 2,5x102-5x107 copies/ml. NA: không xét nghiệm.
Sau 40 ngày ngƣời hiến máu đƣợc mời đến xét nghiệm tƣ vấn, xét nghiệm Roche Elecsys HIVAgAb combi PT ECLIA, Abbott Architect HIVAgAb Combo CMIA và SD Bioline HIV1/2 3.0 Rapid test, ngƣời hiến máu đƣợc khẳng định dƣơng tính HIV theo quy định của Bộ Y tế: HIV dƣơng tính chỉ đƣợc khẳng định bằng 3 phƣơng pháp xét nghiệm có nguyên lý và chuẩn bị kháng nguyên khác nhau .
Đây là một ngƣời hiến máu đã từng hiến máu 4 lần ngày 11/11/2012, 29/5/2013, 9/11/2013, 25/9/2015. 3 lần đầu hiến máu tình nguyện, lần thứ 4 hiến máu lấy tiền, nhƣ vậy cũng phần nào phản ánh vai trò tự sàng lọc trƣớc hiến máu vơ cùng quan trọng, khi đã có nguy cơ lây truyền bệnh khơng nên hiến máu.
Trần Vân Chi 71 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
Hình 3.3: Kt qu xột nghim ID-Cobasđ
Trần Vân Chi 72 Luận văn Thạc sĩ Khoa học
Bảng 3.15: Xét nghiệm ngƣời hiến máu giai đoạn cửa sổ HIV mã số AM9.97435
Ngày hiến máu Roche Elecsys HIVAgAb combi PT ECLIA (S/CO) Abbott Architect HIVAgAb Combo CMIA (S/CO) SD Bioline HIV1/2 3.0 Rapid test Pool 4- Ultrio Elite TMA (S/CO) IDT- Cobas® TaqScreen MPX PCR (CT) Định lƣợng HIV ARN*(copie s/ ml) 27/8/2015 0,218 NA NA 2,85 34,2 Phát hiện
S/CO: Tỷ số mẫu trên ngƣỡng. CT: Cycles of threshold.
*: Ngƣỡng phát hiện 2,5x102-5x107 copies/ml. NA: không xét nghiệm
Chúng tôi gửi thƣ, gọi điện mời ngƣời hiến máu quay lại xét nghiệm để tƣ vấn về tình trạng sức khỏe, nhƣng ngƣời hiến máu không đến làm xét nghiệm kiểm tra nên chúng tôi không theo dõi đƣợc chuyển đổi huyết thanh HIV của ngƣời hiến máu này.
Trần Vân Chi 73 Luận văn Thạc sÜ Khoa häc
Hình 3.4: Kết quả xét nghiệm ID-Cobas®
Trần Vân Chi 74 Luận văn Thạc sĩ Khoa häc
Mặc dù NAT phát hiện đƣợc vi rút giai đoạn cửa sổ nhƣ đã chứng minh ở trên nhƣng vẫn còn nguy cơ âm tính giả khi nồng độ vi rút trong máu thấp. Việc sử dụng MP NAT trong sàng lọc máu càng không thể phát hiện đƣợc nồng độ vi rút thấp. Nên việc sử dụng hóa chất và chiếu xạ thích hợp bất hoạt vi rút để phá hủy viral ADN và ARN đƣợc nhiều trung tâm truyền máu sử dụng. Việc sử dụng vaccin HBV, HCV ở trong quần thể cũng đóng vai trị quan trọng trong việc giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm. Bên cạnh đó, việc tuyên truyền nâng cao ý thức, nhận thức cho máu an toàn cho ngƣời cho máu đóng vai trị vơ cùng quan trọng, khi đã có yếu tố nguy cơ lây nhiễm khơng nên hiến máu.
Trần Vân Chi 75 Luận văn Thạc sĩ Khoa häc