CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.6. Khảo sát vai trò của protein BBAP trong sự phát triển melanoma
3.6.2. BBAP tham gia tham gia điều hòa sự xâm lấn (di căn) của tế bào G
thông qua con đường FAK/AKT.
Để chứng minh cho kết quả về khả năng di căn trực tiếp của tế bào có biểu hiện cao BBAP, chúng tơi tiến hành phân tích mức độ biểu hiện của một số protein quan trọng trong các con đƣờng quyết định khả năng di chuyển, xâm lấn, di căn của tế bào ung thƣ đã đƣợc phân tích bằng kỹ thuật WB.
Hình 3.6.2a. Mức độ biểu hiện protein BBAP (81 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dịng tế bào G361đối chứng;
Hình 3.6.2b. Mức độ biểu hiện của protein FAK bị photphat hóa tại vị trí Tyrosine 397 (125 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dòng tế bào G361đối chứng;
Đường chạy 3,4- Các dòng tế bào G361 siêu biểu hiện BBAP.
Hình 3.6.2c. Mức độ biểu hiện protein FAK tổng số (125 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dòng tế bào G361đối chứng;
Hình 3.6.2d.Mức độ biểu hiện protein AKT bị photphat hóa tại vị trí Threonine 308 (60 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dòng tế bào G361đối chứng;
Đường chạy 3,4- Các dòng tế bào G361 siêu biểu hiện BBAP.
Hình 3.6.2e. Mức độ biểu hiện protein AKT tổng số (60 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dòng tế bào G361đối chứng;
Hình 3.6.2f. Mức độ biểu hiện protein nội chứng TUBULIN (50 KDa).
Đường chạy 1,2- Các dòng tế bào G361đối chứng;
Đường chạy 3,4- Các dòng tế bào G361 siêu biểu hiện BBAP.
Kết quả phân tích Western Blot cho thấy sự tăng cƣờng biểu hiện của protein BBAP (hình 3.6.2a) làm tăng sự phosphor hóa gốc tysosine 397 trên phân tử FAK (hình 3.6.2b) và gốc threonine 308 trên phân tử AKT (hình 3.6.2d), trong khi đo protein FAK tổng số (hình 3.6.2c) và AKT tổng số (hình 3.6.2e) ít có sự thay đổi và protein TUBULIN (nội đối chứng) có mức độ biểu hiện bằng nhau ở các dịng tế bào quan sát (hình 3.6.2f). Kết quả này cho thấy rằng protein BBAP có khả năng tham gia làm tăng khả năng di căn của các tế bào ung thƣ thông qua khả năng làm tăng cƣờng sự biểu hiện của p-FAK và p- AKT.
KẾT LUẬN
Từ các kết quả nghiên cứu thu đƣợc, chúng tôi đƣa ra một số kết luận nhƣ sau Đã thiết kế thành công vector biểu hiện tái tổ hợp mang gen mã hóa cho protein BBAP.
Đã thành cơng trong việc tạo dịng tế bào G361 có biểu hiện tăng cao BBAP BBAP có khả năng có ảnh hƣởng trực tiếp và gián tiếp đến khả năng xâm lấn, di căn của tế bào ung thƣ melanoma thông qua việc làm tăng sự biểu hiện của p-FAK và p-AKT.
KIẾN NGHỊ
Từ kết quả của nghiên cứu này chỉ ra rằng BBAP nên đƣợc xem xét nhƣ là một marker sinh học trong chẩn đoán và theo dõi tiên lƣợng ung thƣ da dạng melanoma và tiến tới đƣợc sử dụng nhƣ một đích tác dụng của thuốc trong việc điều trị căn bệnh này.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu Tiếng Việt
1. Trần Đăng Quyết, (2000) Sinh lý Da, Đại học Y Hà nội
2. Nguyễn Duy Phƣơng, Najaren Tuleja, Lê Huy Hàm, Phạm Xuân Hội, (2012),
Biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp NLI-IF từ tế bào Escherichia coli,
số 34, quyển 3, trang 347 – 353.
3. Trần Quốc Dung, Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Thị Lệ, (2006), Công nghệ chuyển gen (động vật, thực vật), Đại học Huế.
4. Lê Trung Thọ, (2012), Bệnh học U, Đại học Y Hà nội
5. Vũ Thái Hà, Nguyễn Hữu Sáu, Lê Đức Minh, Trần Hậu Khang, Nguyễn Sỹ Hóa, Ngơ Văn Tồn, (2011), Nghiên cứu phân bố các loại ung thư da tại bệnh viện Da liễu Trung Ương giai đoạn 2007 – 2010, Y học thực hành, tập
8, trang 33 – 36.
6. Vũ Thanh Phƣơng, Nguyễn Đại Bình, Bùi Diệu, (2010), Kết quả sống thêm 5
năm sau điều trị triệt căn ung thư hắc tố giai đoạn I – III tại bệnh viện K, Y học TP. Hồ Chí Minh, tập 14, phụ bản của số 4, trang 589 – 595.
Tài liệu Tiếng Anh
7. About melanoma Skin Cancer - A quick Guide, (2014), Cancer Research UK 8. American Cancer Society. Cancer Facts & Figures 2015. Atlanta, Ga:
American Cancer Society; 2015.
9. American Joint Committee on Cancer, "Melanoma of the skin", AJCC Cancer
Staging Manual, 7th ed. New York: Springer; 2010, p. 325-344.
10. Annegret Vogl, Ute Sartorius, Thomas Vogt, Alexander Roesch, Micheal Landthaler, Wihelm Stolz, and Bernd Becker, (2005), "Gene Expression Profile Changes between Melanoma Metastases and their Daughter Cell Lines: Implication for Vaccination Protocols", Journal of Investigative Dermatology, Vol 124, p. 401 - 404.
11. Chen, H., Lin, R. J., Xie, W., Wilpitz, D., and Evans, R. M, (1999),"Regulation of hormone-induced histone hyperacetylation and gene
activation via acetylation of an acetylase", Cell, Vol 98, p. 675–686.
12. Christopher Haqq, Mehdi Nosrati, Daniel Sudilovski, Julia Crothers, Daniel Khodabakhsh, Brian L. Pulliam, Scot Federman, James R.Miller III, Robert E.Allen, Mark I.Singer, Stanley P.L. Leong, Britt-Marie Ljung, Richard W. Sagebiel, and Mohammed Kashani-Sabet, (2004), "The gene expression signatures of melanoma progression", PNAS, Vol 102(17), p. 6092 - 6097. 13. Corine Bertolotto, (2013), "Melanoma: From Melanocyte to Genetic
Alterations and Clinical Options", Scientifica, Vol 2013, doi:
10.1155/2013/635203.
14. Ewan A.Gibb, Katey S.S.Enfield, Ivy F.L.Tsui, Raj Chari, Stephan Lam, Carlos E.A, and Wan L.Lam, (2010), "Deciphering Squamous Cell
Carcinoma Using
Multidimensional Genomic Approaches", Journal of Skin Cancer, volume 2011, doi: 10.1155/2011/541405.
15. Gary S.Stein, Martin Montecino, Andre' J.van Wijnen, Janet L.Stein, and Jane B.Lian, (2000), "Nuclear Structure-Gene Expression Interrelationships: Implications for Aberrant Gene Expression in Cancer", Cancer Research,
Vol 60, p. 2067 - 2076.
16. Hideya Ando, Yoko Niki, Massaki Ito, Kaoru Akiyama, Mary S. Matsui, Daniel B. Yarosh, and Masamitsu Ichihashi, (2012), "Melanosomes Are Transferred from Melanocytes to Keratinocytes through the Processes of Packaging, Release, Uptake, and Dispersion", Journal of Investigative Dermatology, Vol 132, p. 1222 - 1229.
17. Ichiro Yajima, Mayuko Y. Kumasaka, Nguyen Dinh Thang, Yuji Goto, Kozue Takeda, Osamu Yamanoshita, Machiko Iida, Nobutaka Ohgami, Haruka Tamura, Yoshiyuki Kawamoto, and Masashi Kato, (2012), "RAS/RAF/MEK/ERK and PI3K/PTEN/AKT Signaling in Malignant Melanoma Progression and Therapy", Dermatology Research and Practice, Vol 2012, doi: 10.1155/2012/354191.
18. J. T´ım´ar, T. Barbai, B. Gy˝orffy, and E. R´as´o, (2013), "Understanding Melanoma Progression by Gene Expression Signatures",Cancer Genomics
Molecular classification, Prognosis and Response Prediction, Chapter 2, p.
47 - 78.
19. Janetta Bensouilah, Philippa Buck, (2006), "Skin Structure and Function",
Aromadermatology, Chapter 1, p.1 - 11.
20. Jin Boo Jeong, Se Chul Hong, Jin Suk Koo, Hyung Jin Jeong, (2011), "Induction of Apoptosis and Acetylation of Histone H3 and H4 by Arctigenin in the Human Melanoma Cell Line SK-MEL-28", Scientific Research, Vol 2, p. 128 - 132.
21. K Frauenstein, U Sydlik, J Tigges, M Majora, C Wiek, H Hanenberg, J Able, C Esser, E Fritsche, J Krutmann, and T Haarmann-Stemmann, (2013), "Evidence for a novel anti-apoptotic pathway in human keratinocytes involving the aryl hydrocarbon receptor, E2F1, and checkpoint kinase 1",
Cell Death and Diffirentation, Vol 20, p. 1425 - 1434.
22. Katie A. Matatall, Olga A. Agapova, Michael D. Onken, Lori A. Worley, Anne M. Bowcock, and J. William Harbour, (2013), "BAP1 deficiency cause loss of melanocytic cell identity in uveal melanoma", BMC Cancer,
Vol 13, p. 371 - 383.
23. Kenji Matsuno, Mikiko Ito, Kazuya Hori, Fumiyasu Miyashita, Satoshi Suzuki, Noriyuki Kishi, Spyros Artavanis-Tsakonas, and Hideyuki Okano, (2002). "Involvement of a proline-rich motif and RING-H2 finger of Deltex in the regulation of Notch signaling", Development, Vol 129, p. 1049 -
1059.
24. Kunihiko Takeyama, Ricardo C. T. Aguiar, Liqun Gu, Chunyan He, Gordon J. Freeman, Jeffery L. Kutok, Jon C. Aster, and Margaret A. Shipp, (2003), "The BAL-binding Protein BBAP and Related Deltex Family Members Exhibit Ubiquitin-Protein Isopeptide Ligase Activity", The Journal of Biological Chemistry, Vol 278 (24), p. 21930 - 21937.
25. Lin H-P, Lin C-Y, Hsiao P-H, Wang H-D, Sheng Jiang S, et al., (2013), "Difference in Protein Expression Profile and Chemotherapy Drugs Response of Different Progression Stages of LNCaP Sublines and Other Human Prostate Cancer Cells", PLoS ONE, Vol 8 (12), doi:
10.1371/journal.pone.0082625
26. Linli Zhou, Kun Yang, Thomas Andl, R, Randall Wickett, Yuhang Zhang, (2015), "Perspective of Targeting Cancer-Associated Fibroblasts in Melanoma", Journal of Cancer, Vol 6, p. 717 - 726.
27. Marcus Muă hlbauer, Nicole Langenbach, Wilhelm Stolz, Ruediger Hein, M. Landthaler, Reinhard Buettner, and Anja-Katrin Bosserhoff, (1999). "Detection of Melanoma Cells in the Blood of Melanoma Patients by Melanoma-inhibitory Activity (MIA) Reverse Transcription - PCR", Clin Cancer Res, Vol 5, p. 1099 - 1105.
28. Nguyen Dinh Thang, Ichiro Yajima, Mayuko Y.K, Machiko I., Tamio S., Masashi Kato, (2015), "Deltex-3-like (DTX3L) stimulates metastasis of melanoma through FAK/PI3K/AKT but not MEK/ERK pathway",
Oncotarget, Vol 6, No.16, p.14290 - 14299.
29. Nguyen Dinh Thang, Phan Tuan Nghia, Mayuko Y Kumasaka, Ichiro Yajima, Masashi Kato, (2015), "Treatment of Vemurafenib-Resistant SKMEL28 Melanoma Cells with Paclitaxel", Asian Pac J Cancer Prev, Vol 16, p.699 - 705.
30. Olivier Meurette, Spyros Stylianou, Rebecca Rock, Giovanna M. Collu, Andrew P. Gilmore, and Keith Brennan, (2009), "Notch Activation Induces Akt Signaling via an Autocrine Loop to Prevent Apoptosis in Breast Epithelial Cells", American Association for Cancer Research Journals, Vol 69:(12), p.5015 - 5023.
31. Przemyslaw Juszczynski, Jeffery L.K, Cheng Li, Joydeep M., Ricardo C.T. Aguiar, and Margaret A.Shipp, (2006), "BAL1 and BBAP Are Regulated by a Gamma Interferon-Responsive Bidirectional Promoter and Are
Overexpressed in Diffuse Large B-Cell Lymphomas with a Prominent Inflammatory Infiltrate", MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Vol
26, No. 14, p. 5348 - 5359.
32. Qingsheng Yan, Shilpee Dutt, Rong Xu, Katherine Graves, Przemyslaw Juszczynski, John P.Manis, and Margaret A.Shipp, (2009), "BBAP Monoubiquitylates Histone H4 at Lysine 91 and Selectively Modulates the DNA Damage Response", Mol Cell, Vol 36 (1), p.110 - 120.
33. Rudi Bao, Denise C.Connolly, Maureen Murphy, Jeffrey Green, Jillian K. Weinstein, Debra A.Pisarcik, Thomas C.Hamilton, (2002), "Activation of Cancer-Specific Gene Expression by the Survivin Promoter", Journal of the National Cancer Institute, Vol 94, No.7, p.522 - 528.
34. Samia B.Bachmann, Sandra C.Frommel, Rosalba Camicia, Hans C.Winkler, Raffaella Santoro, and Paul O Hassa, (2014), "DTX3L and ARTD9 inhibit IRF1 expression and mediate in cooperation with ARTD8 survival and proliferation of metastatic prostate cancer cells", Molecular Cancer,
(13:125), doi: 10.1186/1476 - 4598 - 13 - 125.
35. Samia B.Bachmann, Sandra C.Frommel, Rosalba Camicia, Hans C.Winkler, Raffaella Santoro, and Paul O Hassa, (2014), "DTX3L and ARTD9 inhibit IRF1 expression and mediate in cooperation with ARTD8 survival and proliferation of metastatic prostate cancer cells", Molecular Cancer, Vol 13, doi: 10.1186/1476-4598-13-125.
36. Scott E. Woodman, Alexander J. Lazar, Kenneth D. Aldape, and Michael A. Davies, (2012), "New Strategies in Melanoma: Molecular Testing in Advanced Disease", Clin Cancer Res, Vol 18(5), p. 1195 - 1200.
37. Sophie E. Polo, and Stephen P.Jackson, (2011), "Dynamics of DNA damage response proteins at DNA breaks: a focus on protein modifications", Gene and Development, Vol 25, p. 409 - 433.
38. The Cancer Genome Atlas Network, (2015), "Genomic Classification of Cutaneous Melanoma", Cell, Vol 161, p.1681 - 1696.
39. Thomas L. Hocker, Meena K. Singh, and Hensin Tsao, (2008), "Melanoma Genetics and Therapeutic Approaches in the 21st Century: Moving from the Benchside to the Bedside", Journal of Investigative Dermatology, Vol 128, p. 2575 - 2595.
40. V. Beral and N.Robinson, (1981), "The Relationship of Maglinant Melanoma, Basal and Squamous Skin Cancers to indoor to outdoor work",
Br.J.Cancer, Vol 44, p. 886 - 891.
41. V. J. Hearing and S. P. L. Leong, (2006), "Melanocyte Distribution and Function in Skin", From Melanocytes to Melanoma: The Progression to Malignancy,Chapter 6, p. 101 - 115.
42. Wolfgang G. Dippold, Kenneth O. Lloyd, Lucy T. C. Li, Hisami Ikeda, Herbert F. Oettgen, and Lloyd J. Old, (1980), "Cell surface antigens of human malignant melanoma: Definition of six antigenic systems with mouse monoclonal antibodies", Immunology,Vol 77, p. 6114 - 6118.
43. Xiao D, Ohlendorf J, Chen Y, Taylor DD, Rai SN, et al., (2012), "Identifying mRNA, MicroRNA and Protein Profiles of Melanoma Exosomes", PLoS ONE, Vol 7(10), doi: 10.1371/journal.pone.0046874.
44. Ying Chen, Debora L Kramer, Fengzhi Li, and Carl W Porter, (2003), "Loss of inhibitor of apoptosis proteins as a determinant of polyamine analog- induced apoptosis in human melanoma cells", Oncogene, Vol 22, doi:10.1038/sj.onc.1206725.
45. Zhongqiu Zhang, Ruisheng Yao, Jie Li, Yian Wang, Charles W.Boone, Ronald A.Lubet, and Ming You, (2005), "Induction of Invasive Mouse Skin Carcinomas in Transgenic Mice with Mutations in Both H-ras and
p53", Mol Cancer Res, Vol 3(10), p. 563 - 574.
Trang Web
46. http://atlasgeneticsoncology.org/Genes/NOTCH1ID30ch9q34.html 47. http://cancerlink.ru/enmelbiology.html
49. http://familydoctor.org/familydoctor/en/diseases-conditions/skin-cancer.html 50. http://voer.edu.vn/m/cac-phuong-phap-chuyen-gen/ 51. https://www.bioscience.org/1998/v3/d/meier/d1010.htm 52. https://www.cancer.ca/en/cancer-information/cancer-type/skin- melanoma/melanoma/malignant-tumours 53. http://www.cancer.gov/types/skin/hp/skin-genetics-pdq 54. http://www.dieutri.vn/bgdalieu/19-8-2013/S4489/Bai-giang-mo-hoc-da-trong- da-lieu.htm 55. http://www.intechopen.com/books/recent-advances-in-the-biology-therapy- and-management-of-melanoma. 56. http://www.mmmp.org/MMMP/import.mmmp 57. http://www.webmd.com/skin-problems-and-treatments/picture-of-the-skin 58. http://www.who.int/uv/faq/skincancer/en 59. http://yhoccongdong.com/thongtin/ung-thu-da/