Chƣơng II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
2.2. PHƢƠNG PHÁP
2.2.3. Tách chiết ADN hệ gen của virus từ mẫu tôm nhiễm WSSV
Do trong dung dịch virus thu được từ mẫu nghiền tôm chứa rất nhiều các tạp chất nên nếu sử dụng các bộ kít tách chiết có màng lọc silica, các tạp chất này thường tích tụ lại trên màng lọc, dẫn đến tắc cột và không thể thu được ADN. Do vậy, để giải quyết khó khăn này, bộ kit Virus Magnet Nano sử dụng hạt nano từ bọc silica được chọn để tách chiết ADN từ virus. Quy trình tách ADN hệ gen virus bằng bộ kit Virus Magnet Nano gồm cá c bước sau:
250 µl dịch virus đƣợc bổ sung 25µl proteinase. Tiếp đó, 500 μl đệm ly giải đƣợc bổ sung vào hỗn hợp phản ứng rồi trô ̣n đều 3-4 lần bằng pipet. Hỗn hợp phản ứng đƣợc ủ ở 650C trong 15 phút. Ở bƣớc tiếp theo 200 l isopropanol và 150 l hạt Mag – Si nano đƣợc thêm vào, ống đƣợc trộn 3-4 lần bằng pipet và ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút. Sau đó ống đƣợc đặt lên nam châm để tập trung hạt từ 2-3 phút hoặc cho tới khi dịch trở nên trong. Dịch trong đƣợc loại bỏ hoàn toàn rồi thêm tiếp 500 l đệm rửa 1. Hỗn hợp đƣợc trộn đều 3-4 lần để hịa tan hồn tồn hạt Mag – Si nano. Tiếp theo, ống lại tiếp đƣợc đặt lên nam châm để tập trung hạt và loại bỏ dịch trong. Hạt Mag – Si nano thu đƣợc lại tiếp tục đƣợc rửa hai lần bằng đệm rửa 2. Bƣớc tiếp theo, sau khi đệm rửa 2 đã đƣợc loại bỏ hoàn toàn, ống đƣợc đặt ở 650C trong 15 phút để loại bỏ isopropanol. Cuối cùng, 50-100 μl đệm chiết đẩy đƣợc bổ sung vào để hòa tan lại hạt Mag – Si nano. Hỗn hợp đƣợc đặt ở 650C trong 10 phút rồi sau đó dịch trong chứa ADN đƣợc thu lại nhờ nam châm. Dịch thu đƣợc đƣợc bảo quản ở -200
C.