1.4.Tách chiết, phân lập alkaloid từ cây C harringtonia
3.1. Thu hoạch và xử lý mẫu thực vật C harringtonia
Cây C. harringtonia phân bố ở nhiều quốc gia, tuy nhiên cho tới nay chƣa có nghiên cứu nào ở Việt Nam về loài này. Nghiên cứu này lựa chọn đối tƣợng là cây
C. harringtonia đƣợc thu thập tại Nhật Bản, đây là quốc gia đƣợc cho là nơi xuất
xứ của loài này [26]. Nguyên liệu thực vật C. harringtonia đƣợc thu hái vào tháng 01 năm 2013 tại Vƣờn sinh vật học Đại học Tokyo, Nhật Bản và đã đƣợc GS. Yoshiaki Kitaya (trƣờng Đại học Phủ Osaka) thẩm định. Thông thƣờng, mẫu thực vật thu hái vào mùa đơng có hàm lƣợng alkaloid cao nhất do sự thốt hơi nƣớc và quá trình trao đổi chất bị chậm lại trong khoảng thời gian này. Mẫu nguyên liệu thực vật gồm có lá và cành nh . Lá cây chứa nhiều lipid và hợp chất khác, gây khó khăn trong q trình tách chiết alkaloid. Điều này có thể cải thiện nếu mẫu nguyên liệu thực vật là rễ, thân hoặc cành đã rụng lá [22].
Nguyên liệu thực vật đƣợc làm khô ở điều kiện nhiệt độ phịng vì các alkaloid trong C. harringtonia có thể bị phân hủy ở nhiệt độ cao. Nguyên liệu khô
đƣợc nghiền thành bột mịn để làm tăng hiệu quả của quá trình ngâm chiết với dung mơi. Để nghiền nguyên liệu dễ dàng, lá và cành cây đƣợc cắt nh . Sau khi nghiền, bột mịn đƣợc tiếp tục sấy ở nhiệt độ thƣờng dƣới áp suất thấp đến khối lƣợng không đổi. Theo tài liệu [22], q trình ngâm chiết alkaloid thƣờng địi h i khối lƣợng nguyên liệu thực vật lớn, từ hàng chục kilogram trở lên. Tuy nhiên, do sự hạn chế về nguyên liệu nên nghiên cứu này đã sử dụng 500 gam bột nguyên liệu khô và chia nh thành nhiều phần để phục vụ quá trình nghiên cứu, với mục đích khảo sát xây dựng phƣơng pháp và tìm điều kiện tối ƣu tách chiết và phân lập cephalotaxine và homoharringtonine.