CHƢƠNG 2 : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Quy trình xử lý mẫu
2.3.1 Mẫu thịt gà
Thịt gà là một trong những thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao. Thành phần hóa học của thịt gà gồm 65,6 % nước; protein chứa 20,3 %; lipit chứa 13,1 %; các loại vitamin; khoáng chất và các nguyên tố vi lượng khác. Các chất này (đặc biệt protein, lipit) gây nhiễu nền và ảnh hưởng nhiều đến việc xác định tín hiệu cường độ dòng pic của AO. Bởi vậy, trước khi đo phải tiến hành xử lý mẫu nhằm loại bỏ thành phần gây cản trở đến chất phân tích. [7]
Dựa trên cơ sở các quy trình xử lý mẫu xác định Auramine O bằng phương pháp LC - MS, quang phổ… ở mục 1.2 đã sử dụng dung môi Aceton, ACN, etanol, metanol để loại bỏ protein, lipit ra khỏi mẫu thịt. Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu và bằng thực nghiệm đã tiến hành lựa chọn dung môi ACN, etanol để tối ưu được quy trình xử lý mẫu thịt gà trên HMDE, GCE.
Mẫu trắng: mẫu thịt gà nuôi tại nhà cho ăn lúa, ngô, không chứa Auramine O Chuẩn bị mẫu thịt gà: thịt gà sau khi được tách bỏ xương, nội tạng thì tiến hành đồng nhất mẫu, chia mẫu thành các túi nhỏ khoảng 1,5 ÷ 2,0 g và bảo quản ngay ở nhiệt độ - 80 oC. Trước khi phân tích lấy mẫu thịt gà ra để rã đơng ở nhiệt độ phịng.
2.3.1.1. Quy trình xử lý mẫu thịt gà đo trên điện cực HMDE
Hàm lượng Auramine O trong thịt gà được tính theo cơng thức:
Trong đó: + x: hàm lượng của Auramine O trong thịt gà (µg/g).
+ a: khối lượng thịt gà đem xử lý (g). + C: nồng độ mol/l của dung dịch đo.
2.3.1.2. Quy trình xử lý thịt gà đo trên điện cực GCE
Cân khoảng a (g) thịt gà ống ly tâm
Thu được dịch chiết
Lấy 1 ml dịch chiết + 10 ml đệm B - R
Tiến hành đo
thêm 4 ml dung dịch ACN : H2O = 1:1
lắc vortex 10 phút và quay ly tâm 15 phút
lọc qua màng lọc 0,45 µm Định mức bằng nước cất Cân khoảng a (g) thịt gà Ống ly tâm Tách lấy dịch chiết Lấy 3 ml dịch chiết + 10 ml đệm B - R Tiến hành đo
Thêm 4 ml dung dịch etanol : H2O = 1:1
Rung siêu âm 15 phút và quay ly tâm 15 phút
Ngâm trong nước nóng 20 phút lọc qua màng lọc 0,45 µm
Định mức bằng nước cất
Thu được 12 ml dịch chiết
Hàm lượng Auramine O trong thịt gà được tính theo cơng thức:
mAuramine O = (µg.g-1)
Trong đó : mAuramine O : là khối lượng Auramine O trong 1 (g) thịt gà C : Nồng độ Auramine O của dung dịch đo (M)
a: khối lượng thịt gà đem xử lý (g).
2.3.2. Mẫu nước dưa
Dưa chua là món ăn có ngun liệu chính là một hay nhiều loại thực vật (rau, củ, quả được trộn với muối và một số gia vị khác, để lên men vi sinh tạo chua Thành phần hóa học của dưa gồm nước, men, muối clorua, axit lactic, gluxit, đường, lợi khuẩn probiotic, ion kim loại…[7]
Các chất này gây ảnh hưởng nhiều đến việc phát hiện tín hiệu cường độ dịng nên không thể đo trực tiếp mẫu dưa. Bởi vậy, chúng tôi đã tiến hánh xác định Auramine O trong nước dưa.
2.3.2.1 Quy trình xử lý mẫu nước dưa
Quy trình xử lý mẫu nước dưa: hút chính xác 2 ml nước dưa cùng 10ml đệm pH (đã tối ưu hóa) vào bình định mức 25 ml. Sau đó đem lọc qua màng lọc 0,45 µm để loại bỏ kết tủa. Thu lấy dịch chiết và thêm Auramine O rồi định mức bằng nước, rồi tiến hành đo.
Hàm lượng Auramine O trong 2 ml mẫu nước dưa là : mAuramine O = (g/l)
Trong đó : mAuramine O : là khối lượng Auramine O trong 2 ml dưa. C : Nồng độ Auramine O của dung dịch đo (M)