Tiến hành cấy tăng sinh trên môi trường BHB. Mỗi chủng được cấy trong một ống nghiệm chứa 10ml môi trường. Sau đó nuôi trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng.
Sau 24 giờ lấy ra và đem đi xác định hoạt độ enzyme (tham khảo ở phụ lục 1).
Hình 3.8: Hoạt độ chung của phytase của 3 chủng Bacillus nuôi cấy trong môi trường lỏng, cơ chất cảm ứng là sodium phytase.
Nhận xét:
Qua việc xác định hoạt độ phytase của Bacillus trên môi trường lỏng thì
trong số các chủng Bacillus mà ta khảo sát được thì các chủng Bacillus đều có khả năng sinh tổng hợp phytase. Hoạt độ của các chủng này có biên độ dao động khá rộng, trên 0 đến dưới 40 đvhđ/ml. Trong đó, chủng B7 có hoạt độ cao nhất 40,67 ± 0,53 đvhđ/ml, chủng B2 có hoạt độ thấp nhất 0,15 ± 0,004 đvhđ/ml, chủng B3 có hoạt độ khá cao 31,30 ± 2,37 đvhđ/ml, chủng B1 có hoạt độ là 18,03 ± 3,09 đvhđ/ml. Sự chênh lệch về hoạt độ của phytase ở từng chủng Bacillus có thể do
nhiều yếu tố tác động, trong đó có tác động của môi trường nuôi cấy, đặc tính sinh lý của từng chủng nuôi cấy.
Kết quả thí nghiệm trên, chúng tôi đã chọn chủng B7, chủng có hoạt độ phytase cao nhất để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.
3.5.3. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến enzyme phytase sinh ra
B7 được nuôi cấy trên môi trường đã được chuẩn bị sẵn. Hoạt độ phytase đươc tiến hành khảo sát tại các thời điểm nuôi cấy: 12 giờ, 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ, 60 giờ và 72 giờ.
Sau đó đi tiến hành xác định hoạt độ phytase. Kết quả khảo sát hoạt độ phytase của B7 theo thời gian nuôi cấy được trình bày trong phụ lục 2.
Đường biểu diễn sự biến thiên hoạt độ phytase theo thời gian nuôi cấy được thể hiện ở Hình 3.9.
Hình 3.9: Đường biến thiên hoạt độ phytase của B7 theo thời gian nuôi cấy
Nhận xét:
Qua việc khảo sát ảnh hưởng của thời gian lên hoạt độ phytase của vi khuẩn B7 ở môi trường lỏng thì hoạt độ cao nhất tại thời điểm 24 giờ sau khi cấy. Tại thời điểm này thì hoạt độ chung của phytase là 46,21 ± 4,22 đvhđ/ml. Khoảng thời gian nuôi cấy từ 12 đến 36 giờ , B7 sinh tổng hợp phytase với hoạt độ cao nhất. Sau 48
giờ nuôi cấy, thì hoạt độ của phytase sẽ giảm đáng kể. Khi nuôi cấy đến 72 giờ thì hoạt độ đạt thấp nhất là 5,79 ± 0,65 đvhđ/ml.
Vì vậy, qua kết quả nghiên cứu, chúng tôi xác định thời gian nuôi cấy B7 trên môi trường lỏng là 24 giờ, thời gian này được sử dụng để tiếp tục ở thí nghiệm tiếp theo.