Đối tƣợng: Chủng nấm Phytophthora sp. đƣợc cung cấp từ viện bảo vệ thực vật.
Sử dụng chủng nấm bệnh Phytophthora sp. làm đối tƣợng thử nghiệm trong phịng thí nghiệm in vitro. Kiểm tra hình thái của số lƣợng bằng kính hiển vi quang học và điện tử. Sử dụng môi trƣờng đặc trƣng cho mỗi loại nấm nghiên cứu có bổ sung các loại hạt nano kim loại ở các nồng độ khác nhau, trên đĩa petry Ø 9 cm. Đánh giá khả năng ức chế sinh trƣởng và phát triển của nấm bệnh của nồng độ hợp kim đƣợc phân thành 4 cấp. Đo đƣờng kính tản nấm của nấm gây bệnh sau 12 ngày (cm) nuôi cấy để tính % ức chế và đánh giá hiệu quả. Tính hiệu quả ức chế theo công thức Abort nhƣ sau:
HQ (%) = 1 -
T
x100% C
HQ: Hiệu quả PTN invitro
T: Đƣờng kính tản nấm ở cơng thức thí nghiệm C: Đƣờng kính tán nấm ở cơng thức đối chứng Hoạt lực cao (+++): ức chế ≥60%. Hoạt lực trung bình (++): ức chế ≥40-59. Hoạt lực yếu (+): ức chế nấm ≤40-20. Khơng có hoạt lực (-): ức chế ≤19.
Vật liệu sử dụng: ZnO với các nồng độ khác nhau từ 100 đến 3000ppm. Thí nghiệm đƣợc tiến hành theo các bƣớc sau:
Các dụng cụ thí nghiệm (bình tam giác, đĩa petri, ống nghiệm...) đƣợc sấy khử trùng ở 170oC trong 3 giờ. Môi trƣờng pha theo hƣớng dẫn của nhà sản xuất, hấp khử trùng 121oC trong 20 phút.
Bƣớc 1: Chuẩn bị môi trƣờng PDA, khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 20 phút. Đổ ra đĩa petri đƣợc khử trùng.
Bƣớc 2: Cấy Phytophthora sp. từ các đĩa gốc lên môi trƣờng thạch đã chuẩn bị. Ủ ở nhiệt độ 270C. Sau 5 – 7 ngày sẽ đƣợc sử dụng trong thí nghiệm
Bƣớc 3: Chuẩn bị các bình tam giác chứa mơi trƣờng PDA + Vật liệu môi trƣờng PDA thƣờng (đối chứng) theo tỉ lệ để đạt đƣợc nồng độ vật liệu từ 100 – 3000 ppm.
Bƣớc 4: Đổi môi trƣờng PDA (đối chứng) và môi trƣờng PDA chứa vật liệu vào các đĩa petri đã đƣợc khử trùng.
Bƣớc 5: Dùng dụng cụ cắt các miếng nấm nuôi trên môi trƣờng thạch PDA. Mỗi miếng có đƣờng kính 5mm. Cấy nấm lên trung tâm các đĩa thạch đã chuẩn bị.
Bƣớc 6: Ủ ở nhiệt độ 270C.
Bƣớc 7: Sau 48 ± 2 giờ, bắt đầu đo đƣờng kính nấm phát triển trên các đĩa thạch. Đƣờng kính nấm đƣợc đo liên tục mỗi 24 giờ đến khi nấm trên đĩa đối chứng phát triển đến đƣờng kính 90 mm.
Theo dõi thời gian hình thành hạch nấm trên đĩa petry cấy. Tính số hạch nấm tạo thành trên thí nghiệm và ở đĩa đối chứng. Thí nghiệm đƣợc bố trí với 3 lần nhắc lại. Số liệu đƣợc xử lý bằng ANOVA (Tukey test) bằng phần mềm thống kê SPSS 13.0.