Nồng độ glyphosate 200 mg/l 400 mg/l 600 mg/l 200 mg/l
Lá của cây đối chứng + + + +
Lá của cây chuyển gen - - + +
Ghi chú: (+) Vết bôi trên lá ngả màu vàng
Kết quả trên bảng 3.3 cho thấy: Trong khoảng thời gian từ 6 – 10 ngày, trên lá của cây đối chứng, vết bôi đã ngả sang màu vàng ở nồng độ glyphosate 200 mg/l. Trong khi đó, lá của cây chuyển gen có biểu hiện ngả vàng tại vị trí vết bơi glyphosate có nồng độ 600 mg/l. Ở nồng độ 200 – 400 mg/l lá của cây mang gen vẫn cịn màu xanh. Do đó, chúng tơi sử dụng nồng độ glyphosate 200 mg/l là nồng độ phù hợp cho đánh giá khả năng kháng thuốc trừ cỏ glyphosate của các dịng ngơ chuyển gen EPSPS.
Lá cây chuyển gen sau khi bôi thuốc trừ cỏ glyphosate ở các nồng độ 200 mg/l (số 1),
400 mg/l (số 2), 600 mg/l (số 3) và 1200 mg/l (số 4).
Lá cây đối chứng sau khi bôi thuốc trừ cỏ glyphosate ở các nồng độ 200 mg/l (số 1), 400 mg/l (số 2), 600 mg/l (số 3) và 1200
mg/l (số 4).
Hình 3.4. Khảo sát nồng độ glyphosate xử lí trên bề mặt lá ngơ chuyển gen và mẫu
đối chứng (lá cây ngô không chuyển gen)
3.3. Kết quả phân tích PCR sự có mặt của gen kháng thuốc trừ cỏ EPSPS của các dịng ngơ chuyển gen thế hệ T0
Tách chiết ADN tổng số từ lá của các dịng ngơ chuyển gen EPSPS thế hệ T0
Chúng tôi đã tiến hành tách chiết 65 mẫu ADN tổng số từ lá của các dịng ngơ chuyển gen EPSPS thế hệ T0 nhận đƣợc từ các thí nghiệm biến nạp vụ Đơng Xuân và Hè Thu. Mẫu ADN sau khi tách chiết bằng phƣơng pháp CTAB [49] có cải tiến đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp điện di trên gel agarose 0,8% và đo bằng máy Nanodrop để đánh giá mức độ tinh sạch, nguyên vẹn và nồng độ của ADN
Hình 3.5. Kết quả điện di kiểm tra mẫu ADN tổng số trên gel agarose 0,8%
Kết quả điện di cho thấy: Chất lƣợng ADN tổng số tách từ các mẫu tƣơng đối tốt. ADN đạt độ tinh sạch và không bị đứt gãy. Mặt khác không thấy xuất hiện các vệt sáng ARN phía dƣới, điều đó chứng tỏ ARN đã đƣợc loại bỏ hoàn toàn khỏi dịch chiết ADN. Dựa trên giá trị OD260 đo đƣợc cho thấy hàm lƣợng ADN thu đƣợc khá cao. Sản phẩm ADN tổng số của các dịng ngơ chuyển gen đƣợc chúng tơi sử dụng để tiến hành các phân tích tiếp theo.