Mẫu Hải miên I. echinata(10.0 kg)được chiết bằng methanol (310 lít) trên
thiết bị chiết siêu âmElmasonic S 120H (50oC, 3 h). Dịch chiết được lọc qua giấy lọc, gom lại và loại bỏ dung môi thu được 230 g dịch chiết methanol. Dịch chiết này được phân bố vào 3 lít nước cất và tiến hành chiết phân bố vớidichloromethane (3 lần ×3 lít), sau đó cất loại bỏ dung môi lần lượt thu được các phân đoạn dichloromethane (IED, 90 g)và nước (IEW, 140g). Kiểm tra sơ bộ cho thấy các chất chủ yếu tập trung ở phân đoạn IED. Phân đoạn IEW chứa nhiều muối, các chất kéo vệt và mờ trên bản mỏng vì thế khơng được tiến hành các nghiên cứu.
Phần cặn dichloromethane (IED, 90.0 g) được hòa tan với một lượng tối thiểu dichloromethane sau đó tẩm với 225.0 g silica gel, cất quay cho đến khi bột tơi khô. Tiến hành phân đoạn hóa hỗn hợp này trên cột silica gel, rửa giải gradient bằng hệ
dung môi n-hexane/acetone với độ phân cực tăng dần (n-hexane/acetone, 100/1
IED4 (19.2 g) và IED5 (13.1 g). Phân đoạn IED2 (19.3 g) được phân tách trên cột
silica gel, rửa giải bằng hỗn hợp n-hexane/acetone (6/1, v/v) thu được 5 phân đoạn
IED2A (1.8 g), IED2B (3.7 g) và IED2C (1.3 g), IED2D (2.7 g) và IED2E (0.8 g). Phân đoạn IED2A (1.8 g)tiếp tục phân tách bằng cột silica gel, rửa giải bằng hỗn
hợp n-hexane/ethyl acetate (5/1, v/v) thu được các hợp chất IE5 (16.0 mg)vàIE6
(12.0 mg). Hợp chất IE2 (11.1 mg) và IE3 (21.0 mg)thu được từ phân đoạn IED2D
(2.7 g) sử dụng cột silica gel với hệ dung môin-hexane/acetone (2.5/1, v/v). Phân đoạn IED3(12.6 g)được phân tách bằng cột silica gel với hệ dung môi n-
hexane/acetone (6/1, v/v), thu được bốn phân đoạn nhỏ hơn IED3A (1.7 g), IED3B (1.2 g), IED3C (2.8 g) và IED3D (2.4 g). Phân đoạn IED3A (1.7 g)được tiếp tục phân tách trên cột RP-18, rửa giải bằng methanol/nước (5/1, v/v) thu được hợp chất IE1(30.0 mg).Hợp chất IE4 (16.0 mg)và IE7 (6.0 mg) thu được từ phân đoạn IED3C (2.8 g) sau khi sử dụng cột RP-18 với hỗn hợp dung môi acetone/nước (2.5/1, v/v). Hợp chất IE8 (20.0 mg) thu được từ phân đoạn IED5 (13.1 g) sau khi