4.1.2. Hợp chất IE2: (12E,20Z)-8-hydroxyvariabilin
Hình 4.7. Cấu trúc hóa họcvà các tương tác HMBC chính của hợp chất IE2
Hợp chất IE2 được phân lập dưới dạng chất dầu không màu. Phổ 1H-NMR của hợp chất IE2 cho thấy các tín hiệu: năm proton olefin tại δH 5.17 (t, J = 7.0 Hz),
5.29 (d, J = 10.0 Hz), 6.31 (br s), 7.28 (br s) và 7.39 (br s); bốn nhóm methyl tại δH 1.08 (d, J = 6.5 Hz), 1.15 (s), 1.60 (s) và 1.76 (s).
Phổ 13C-NMR và DEPT của hợp chất IE2 xuất hiện tín hiệu của 25 cacbon gồm: bảy cacbon không liên kết trực tiếp với hydro (δC 73.23, 98.50, 126.37, 135.74, 145.20, 165.00, 173.60), sáu nhóm methine (δC 31.79, 111.89, 115.61, 126.02, 140.08, 143.90), tám nhóm methylene (δC 23.51, 25.60, 26.19, 26.78, 37.62, 40.41, 42.17 và 42.62) và bốn nhóm methyl (δC 6.09, 15.81, 21.06 và 26.87). So sánh các tín hiệu trên phổ 1H và 13C-NMR của IE2 với IE1 nhận thấy: trên phổ 1H- NMR của IE2 vắng mặt một proton olefin (vùng trường thấp δH> 5.00) trong khi trên phổ 13C-NMR của IE2 vắng mặt hai tín hiệu của cacbon olefin (vùng δC>100.00) thay vào đó là sự xuất hiện thêm tín hiệu của cacbon ở δC 73.23 và một cacbon khác ở vùng δC 42.17. Trong đó tín hiệu tại δC 73.23 gợi ý cho sự có mặt thêm một nhóm hydroxyl trong cấu trúc của IE2 so với IE1.
Tiếp đó, các tương tác HMBC bao gồm: tương tác từ H-5 (δH 2.43) đến C-2 (δC 111.89)/C-3 (δC 126.37)/C-4 (δC 140.08)/C-6 (δC 25.60)/C-7 (δC 42.17) và tương tác từ H-9 (δ 1.15) đến C-7 (δ 42.17)/C-8 (δ 73.23)/C-10 (δ 42.62) cho phép
Bảng 4.2. Số liệu phổ 1H- và 13C-NMR của IE2 và hợp chất tham khảo C δC# δCb δCa δHa (mult., J = Hz) C δC# δCb δCa δHa (mult., J = Hz) 1 142.7 142.76 143.90 7.39 (br s) 2 110.9 110.91 111.89 6.31 (br s) 3 124.8 124.87 126.37 - 4 138.8 138.87 140.08 7.28 (br s) 5 25.1 25.18 26.19 2.43 (t, 7.5) 6 24.4 24.42 25.60 1.63 (m) 7 41.2 41.32 42.17 1.49 (m) 8 73.9 73.93 73.23 - 9 26.5 26.61 26.87 1.15 (s) 10 41.2 41.20 42.62 1.43 (m) 11 22.5 22.58 23.51 2.00 (m) 12 124.3 124.35 126.02 5.17 (t, 7.0) 13 135.6 135.71 135.74 - 14 15.9 16.01 15.81 1.60 (s) 15 39.3 39.24 40.41 2.00 (m) 16 25.5 25.57 26.78 1.40 (m) 17 36.5 36.52 37.62 1.40 (m) 18 30.7 30.73 31.79 2.76 (m) 19 20.5 20.62 21.06 1.08 (d, 6.5) 20 115.7 115.59 115.61 5.29 (d, 10.0) 21 142.0 143.10 145.20 - 22 162.3 n.d 165.00 - 23 99.2 99.31 98.50 - 24 172.1 n.d 173.60 - 25 6.2 6.21 6.09 1.76 (s) a)
đo trong CD3OD,b)đo trong CDCl3, #C của 8-hydroxy-12E,20Z-variabilin đo trong CDCl3[5],
n.d:tín hiệu khơng quan sát được trên phổ13C-NMR.
xác định vịng furan bị thế tại vị trí C-3, và vị trí nhóm hydroxy tại C-8. Cũng giống như IE1, tương tác HMBC từ H-14 (δH 1.60) tới C-12 (δC 126.02)/C-13 (δC 135.74)/C-15 (δC 40.41) cho phép khẳng định vị trí của liên kết đơi tại C-12/C-13. Vị trí của liên kết đôi ở C-20/C-21 được khẳng định bởi các tín hiệu tương tác HMBC từ H-19 (δH 1.08) tới C-17 (δC 37.62)/C-18 (δC 31.79)/C-20 (δC 115.61) và từ H-20 (δH 5.29) tới C-21 (δC 145.20)/C-22 (δC 165.00). Tương tác HMBC giữa H- 25 (δH 1.76) và C-22 (δC 165.00)/C-23 (δC 98.50)/C-24 (δC 173.60) cho phép xác
Hơn nữa, khi so sánh số liệu phổ của IE2 với hợp chất 8-hydroxyvariabilin trong cùng dung môi đo NMR (CDCl3) cho thấy sự giống nhau giữa các vị trí tương
ứng [5] cho phép khẳng định IE2 chính là (12E,20Z)-8-hydroxyvariabilin, furanosesterterpene đã được phân lập từ loài hải miên giống Ircinia sp.[27].
Hình 4.8.Phổ 1H-NMR của hợp chất IE2
Hình 4.12.Phổ HMBC của hợp chất IE2 4.1.3. Hợp chất IE3: 8-hydroxyisovariabilin 4.1.3. Hợp chất IE3: 8-hydroxyisovariabilin
Hợp chất IE3 thu được dưới dạng dầu không mầu và công thức phân tử được xác định là C25H36O5 dựa trên phổ HR-ESI-MS m/z 415.2483 [M‒H]– (tính tốn theo lý thuyết cho công thức [C25H35O5]–, 415.2490).
Phổ 1H-NMR của hợp chất IE3 cho thấy các tín hiệu: năm proton olefin [δH
5.07 (d, J = 10.5 Hz), 5.13 (t, J = 6.5 Hz), 6.32 (br s), 7.28 (br s) và 7.39 (br s)]
trong đó ba proton (δH 6.32, 7.28 và 7.39) đặc trưng cho vịng furan-3-yl, bốn nhóm methyl δH 1.02 (d, J = 6.5 Hz), 1.15 (s), 1.59 (s) và 1.63 (s).
Phổ 13C-NMR và DEPT của hợp chất IE3 xuất hiện tín hiệu của 25 cacbon gồm: bảy cacbon không liên kết trực tiếp với hydro, sáu nhóm methine, tám nhóm methylene và bốn nhóm methyl. Trong đó, bốn tín hiệu cộng hưởng tại δC 111.90 (CH), 126.39 (C), 140.99 (CH) và 143.90 (CH) được quy kết cho vòng furan. Bảy tín hiệu xuất hiện ở vùng trường thấp [δC 93.32 (C), 117.96 (CH), 125.66 (CH), 136.12 (C), 148.75 (C), 178.50 (C) và 180.04 (C)] cho thấy sự có mặt của ba liên kết đơi và một nhóm carbonyl. Tín hiệu tại δC 73.24 (C) đặc trưng cho một nguyên tử cacbon bậc ba liên kết trực tiếp với oxy. Phân tích số liệu phổ 1H-và 13C-NMR của của hợp chất IE3 cho thấy các số liệu phổ của IE3 giống hợp chất 8- hydroxyvariabilin (IE2). Sự khác nhau giữa IE3 và IE2 nằm ở vùng tín hiệu của vịng lacton (từ C-20 đến C-25).
Vị trí các nhóm thế tiếp đó được xác định dựa trên phân tích phổ hai chiều HMBC. Các tương tác HMBC từ H-5 (δH 2.43) đến C-2 (δC 111.90)/C-3 (δC 126.39)/C-4 (δC 140.99)/C-6 (δC 25.61)/C-7 (δC 42.16) và tương tác HMBC từ H-9 (δH 1.15) đến C-7 (δC 42.16)/C-8 (δC 73.24)/C-10 (δC 42.71) cho phép xác định vị trí của vịng furan bị thế tại C-3, và nhóm hydroxy tại C-8. Tương tác HMBC từ H-14 (δH 1.59) tới C-12 (δC 125.66)/C-13 (δC 136.12)/C-15 (δC 40.74) cho phép khẳng định vị trí của liên kết đôi tại C-12/C-13. Vị trí của liên kết đơi thứ hai được xác định ở C-20/C-21 bởi tương tác HMBC từ H-19 (δH 1.02) tới C-17 (δC 38.71)/C-18 (δC 29.77)/C-20 (δC 117.96) và từ H-20 (δH 5.07) tới C-21 (δC 148.75)/C-22 (δC 180.04). Ngồi ra, độ chuyển dịch hóa học 13C-NMR ở vùng trường thấp của C-22
chất tham khảo 24-O-methyl-7E,12E,20Z-variabillin(IE3a) (C-22: δC 183.8) [5]. Vị
trí của liên kết đơi cịn lại tại C-23/C-24 được xác định bởi tương tác HMBC giữa H-25 (δH 1.63) và C-22 (δC 180.04)/C-23 (δC 93.32)/C-24 (δC 178.50). Tiếp đó, cấu
hình của liên kết đơi C-12/C-13 và C-20/C-21 được xác định tương ứng là 12E và 20Z bởi so sánh giá trị độ chuyển dịch hóa học của C-14 (δC 15.86) và C-20 (δC
117.96) với các giá trị tương ứng trên các hợp chất đã công bố(C-20: 20Z δC 117.0, 20E δC 121.0)[5],(C-14: 12EδC ~ 16.0, 12Z δC ~ 23)[4].Từ các dẫn chứng trên, cấu trúc hóa học của IE3 được xác định là một đồng phân mới của (12E,20Z)-8-
hydroxyvariabilin (IE2) và được đặt tên là 8-hydroxyisovariabilin.
Bảng 4.3. Số liệu phổ 1H- và 13C-NMR của hợp chất IE3 và hợp chất tham khảo
C δCa,# δC@ δCa δHa (mult., J= Hz) 1 143.90 142.5 143.90 7.39 (br s) 2 111.89 111.1 111.90 6.32 (br s) 3 126.37 125.0 126.39 - 4 140.08 138.8 140.99 7.28 (br s) 5 26.19 25.0 26.19 2.43 (t, 7.0) 6 25.60 28.5 25.61 1.62 (m) 7 42.17 123.8 42.16 1.50 (m) 8 73.23 135.7 73.24 - 9 26.87 16.0 26.85 1.15 (s) 10 42.62 39.5 42.71 1.48 (m) 11 23.51 26.6 23.52 2.00 (m) 12 126.02 124.5 125.66 5.13 (t, 6.5) 13 135.74 134.7 136.12 - 14 15.81 15.8 15.86 1.59 (s) 15 40.41 39.7 40.74 2.00 (m) 16 26.78 25.7 26.85 1.45 (m) 17 37.62 36.3 38.71 1.34 (m)/1.23 (m) 18 31.79 30.8 29.77 3.68 (m) 19 21.06 20.3 22.12 1.02 (d, 6.5) 20 115.61 119.5 117.96 5.07 (d, 10.5) 21 145.20 146.7 148.75 - 22 165.00 183.8 180.07 - 23 98.50 90.1 93.32 - 24 173.60 175.6 178.50 - 25 6.09 4.0 5.84 1.63 (s) OMe 56.4 a
Hình 4.14. Các tương tác HMBC chính của hợp chất IE3