Nhóm nghiên cứu n Hàm lượng MDA (mol/g protein)
± SD Tỷ lệ % so với đối chứng ĐC 11 44,6 ± 11,5 100 TN1 9 68,7 ± 16,8 154 TN2 12 46,7 ± 5,4 105 TN3 8 43,1 ± 11,6 97 TN4 7 43,7 ± 15,4 98 TN5 8 41,9 ± 10,5 94
n: Số cá thể thí nghiệm; : giá trị trung bình, SD: sai số.
Hình 3.13. Sự thay đổi hàm lượng MDA trong gan dưới tác động của -mangostin.
Hàm lượng MDA trong gan ở nhóm uống CCl4 tăng rõ rệt, tăng 54% so với nhóm đối chứng. Điều này cho thấy phản ứng peroxy hóa lipid trong tế bào gan do tác động của CCl4 ở nhóm chuột bị nhiễm độc diễn ra khá mạnh mẽ. Ở nhóm TN2, nhóm chuột nhiễm độc CCl4 được điều trị bằng -mangostin liều 0,1 mg/10 g thể trọng, hàm lượng MDA giảm xuống gần bằng nhóm đối chứng (Hình 3.13, Bảng 3.5). Nguyên nhân có thể là do tác dụng ngăn cản q trình peroxy hóa lipid bởi CCl4 của hoạt chất -mangostin. Thêm vào đó, ở nhóm TN5 chỉ uống
0 40 80 120 160 200 ĐC TN1 TN2 TN3 TN4 TN5 Nhóm nghiên cứu Hàm lư ợng MDA tương đối (%)
nhóm đối chứng, giảm 60% so với nhóm nhiễm độc CCl4.
Kết quả nghiên cứu cho thấy cho thấy -mangostin khơng chỉ có tác dụng bảo
vệ gan khỏi bị nhiễm độc ngoại sinh mà còn bảo vệ gan khỏi các gốc oxi hóa nội sinh. Khả năng bảo vệ các phân tử có bản chất lipid khỏi sự tấn cơng của các gốc tự do, và các tác nhân oxi hóa của -mangostin khơng chỉ xảy ra ở điều kiện in vivo
mà còn xảy ra trong điều kiện in vitro. Trong nghiên cứu của Williams và cộng sự (1995) đã chứng minh rằng mangostin có khả năng bảo vệ các phân tử hàm lượng thấp có bản chất là lipoprotein (LDL) tránh khỏi sự oxi hóa của các ion kim loại (Cu2+) ở nồng độ 100 mM ở thời điểm 4 giờ, ở điều kiện in vitro [44]. Tương tự,
Mahabusarakam và cộng sự (2000) đã chứng minh rằng -mangostin và các dẫn
xuất tổng hợp của nó có thể ngăn chặn sự oxi hóa phân tử LDL. Sự thay đổi cấu trúc -mangostin, thay C3 và C4 bằng các dẫn xuất aminoethyl làm tăng cường hoạt hoạt động chống oxi hóa, trong khi thay bằng các gốc methyl và acetate làm giảm hoạt động chống oxi hóa [24].
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
1. Hoạt chất -mangostin tinh sạch được tách chiết từ bột vỏ quả măng cụt
chiếm 0,13% khối lượng ngun liệu thơ ban đầu có độ sạch 98,5%, với các thơng số kĩ thuật như sau: dung môi chiết là ethanol, tỷ lệ dung môi : nguyên liệu là 3:1, ở 60C, trong 4 giờ.
2. Hoạt chất -mangostin có khả năng kháng lại một số vi khuẩn và nấm gây
bệnh ở người như S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans. Diệt được 100% vi khuẩn
S. aureus ở nồng độ 15 g/ml; ức chế được 70% sự phát triển của P. aeruginosa ở
nồng độ 1000 g/ml, được 50% sự phát triển của nấm C. albicans ở nồng
độ 1500 g/ml.
3. Hoạt chất -mangostin có khả năng chống oxi hóa, bảo vệ gan khỏi sự tấn
cơng của chất độc có tính oxi hóa mạnh là CCl4. Thể hiện bằng tác dụng làm tăng hoạt độ peroxidase và làm giảm hàm lượng MDA ở gan chuột ở các nhóm nghiên cứu, đặc biệt ở hai nhóm nghiên cứu: nhóm chuột uống -mangostin liều
0,1 mg/10 g thể trọng, hoạt độ peroxidase trong gan tăng 45% so với nhóm đối chứng, 57% so với nhóm nhiễm độc CCl4; và nhóm chuột uống -mangostin liều
0,2 mg/10 g thể trọng, hàm lượng MDA trong gan chuột giảm 6% so với nhóm đối chứng, giảm 60% so với nhóm nhiễm độc CCl4.
KIẾN NGHỊ
1. Thử nghiệm hoạt tính chống ung thư của -mangostin trên một số dòng tế bào ung thư từ chuột.
2. Sản xuất -mangostin trên qui mô pilot để làm thuốc hỗ trợ phòng chống và
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
1. Trương Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên (2004), "Đặc tính kháng khuẩn của các hợp chất phenolic ở một số loài cây thuộc chi Garcinia L. " Tạp chí Sinh học 26(4): pp. 59-62.
2. Đào Hùng Cường, Đỗ Thị Thuý Vân (2010), "Nghiên cứu chiết tách và xác định xanthone từ vỏ quả Măng cụt (Garcinia mangostin L)", Tạp chí Khoa
học và công nghệ, Đại học Đà nẵng, 5(40): pp. 167-173.
3. Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đỗ Thị Hồng Cẩm (1997), "Hoạt độ peroxidase ở một số tổ chức thực vật", Tạp chí Y học Việt Nam, 6: pp. 39-43.
4. Hoàng Văn Huấn (1998), "Nghiên cứu sự biến đổi hệ thống enzyme
cytochrome P450 và một vài thơng số hóa sinh có liên quan nhiễm độc thực nghiệm nhiên liệu lỏng tên lửa", Luận văn thạc sỹ y học, Học viện Quân Y,
Bộ Giáo dục và Đào tạo - Bộ Quốc Phòng.
5. Đỗ Tất Lợi (2000), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. NXB Y học Hà
Nội. 567-568.
6. Hồng Cơng Minh (2001), "Nghiên cứu ảnh hưởng của hỗn hợp
dichlorodiethyl sulfide với chlorovinyl dichlorarsine lên một số chỉ tiêu độc học, hóa sinh, huyết học trên động vật thực nghiệm và tác dụng của thuốc điều trị", Luận án tiến sỹ y học, Học viện Quân y, Bộ Giáo dục và Đào tạo -
Bộ Quốc phòng.
7. Nguyễn Mai Phương, Nguyễn Thị Thịnh, Nguyễn Diệu Linh, Phan Tuấn Nghĩa (2010), "Thu nhận và tìm hiểu tác dụng sinh học của chế phẩm chứa xanthone từ vỏ quả măng cụt (Garcinia Mangostin L.)", Tạp chí cơng nghệ sinh học, 8: pp. 717-735.
8. Nguyễn Thị Mai Phương, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đỗ Ngọc Liên (2004), "Thành phần polyphenol vỏ quả măng cụt (Garcinia
mangostana L) và tác dụng ức chế sự sinh axit của vi khuẩn sâu răng Streptococcus mutans", Tạp chí Dược học, 44: pp. 18-21.
9. Đỗ Thị Tuyên , Nguyễn Thu Thùy , Nguyễn Ngo ̣c Ha ̣nh , Nguyễn Thi ̣ Ánh Tuyết, Phùng Văn Trung , Quyền Đình Thi , Nguyễn Thi ̣ Mai Phương , Nguyễn Thi ̣ Ngo ̣c Dao (2010), "Nghiên cứu quy trình tách chiết và hoạt tính kháng khuẩn của alpha-mangostin từ vỏ quả Măng cụt Garcinia mangostana. L", Hội nghị Khoa học kỉ niệm 35 năm viện Công nghệ và Khoa học Việt
Nam, pp. 136-143.
Tiếng Anh
10. Anderson, J. B. (2005), "Evolution of antifungal-drug resistance: mechanisms and pathogen fitness", Nat Rev Microbiol, 3(7): pp. 547-556. 11. Balaram, P. (2011), "Cancer: human mortality and cellular immortality",
12. Bumrungpert, K., Kalpravidh, R. W., Chia-Chi Chuang, C. C., Overman, A., Martinez, K., Kennedy, A., McIntosh, M. (2010), "Xanthones from
Mangosteen inhibit inflammation in human macrophages and in human
adipocytes exposed to macrophage-conditioned media", J Nutr, 140: pp.
842–847.
13. Cohen, R. J., Shannon, B. A., McNeal, J. E., Shannon, T., Garrett, K. L. (2005), "Propionibacterium acnes associated with inflammation in radical prostatectomy specimens: a possible link to cancer evolution", J Urol,
173(6): pp. 1969-1974.
14. Daniel, M. B., Michael, D. R., Stuart, J. E. (1996), Protein methods, ed. 2.
Wiley-Liss, New York.
15. Devi Sampath, P., Vijayaraghavan, K. (2007), "Cardioprotective effect of alpha-mangostin, a xanthone derivative from mangosteen on tissue defense system against isoproterenol-induced myocardial infarction in rats", J Biochem Mol Toxicol, 21(6): pp. 336-339.
16. Ee, G. C., Daud, S., Taufiq-Yap, Y. H., Ismail, N. H., Rahmani, M. (2006), "Xanthones from Garcinia mangostana (Guttiferae)", Nat Prod Res, 20(12): pp. 1067-1073.
17. Favari, L., Perez-Alvarez, V. (1997), "Comparative effects of colchicine and silymarin on CCl4-chronic liver damage in rats", Arch Med Res, 28(1): pp.
11-17.
18. Gopalakrishnan, G., Banumathi, B., Suresh, G. (1997), "Evaluation of the antifungal activity of natural xanthones from Garcinia mangostana and their
synthetic derivatives", J Nat Prod, 60(5): pp. 519-524.
19. Iinuma, M., Tosa, H., Tanaka, T., Asai, F., Kobayashi, Y., Shimano, R., Miyauchi, K. (1996), "Antibacterial activity of xanthones from guttiferaeous plants against methicillin-resistant Staphylococcus aureus", J Pharm Pharmacol, 48(8): pp. 861-865.
20. Jakab, E., Zbinden, R., Gubler, J., Ruef, C., von Graevenitz, A., Krause, M. (1996), "Severe infections caused by Propionibacterium acnes: an
underestimated pathogen in late postoperative infections", Yale J Biol Med,
69(6): pp. 477-482.
21. Josephy, P. D., Eling, T., Mason, R. P. (1982), "The horseradish-peroxidase catalyzed oxidation of 3,5,3'5'-tetramethylbenzidine. Free radical and charge- transfer complex intermediates", J Biol Chem, 257: pp. 3669-3675.
22. Jung, H. A., Su, B. N., Keller, W. J., Mehta, R. G., Kinghorn, A. D. (2006), "Antioxidant xanthones from the pericarp of Garcinia mangostana
(Mangosteen)", J Agric Food Chem, 54(6): pp. 2077-2082.
23. Kaomongkolgit, R., Jamdee, K., Chaisomboon, N. (2009), "Antifungal activity of alpha-mangostin against Candida albicans", J Oral Sci, 51(3): pp. 401-406.
24. Mahabusarakam, W., Proudfoot, J., Taylor, W., Croft, K. (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin",
Free Radic Res, 33(5): pp. 643-659.
25. Matsumoto, K., Akao, Y., Yi, H., Ohguchi, K., Ito, T., Tanaka, T., Kobayashi, E., Iinuma, M., Nozawa, Y. (2004), "Preferential target is mitochondria in alpha-mangostin-induced apoptosis in human leukemia HL60 cells", Bioorg Med Chem, 12(22): pp. 5799-5806.
26. McAlester, G., O'Gara, F., Morrissey, J. P. (2008), "Signal-mediated interactions between Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans", J Med Microbiol, 57(5): pp. 563-569.
27. Misra, H., Dwivedi, B. K., Mehta, D., Mehta, B. K., Jain, D. C. (2009 ), "Development and validation of high performance thin-layer chromatographic method for fetermination of α-mangostin in fruit pericarp of mangosteen plant (Garcinia mangostana L.) using ultraviolet visible detection ", Rec Nat Prod, 3(4): pp. 178-186.
28. Molero, G., Diez-Orejas, R., Navarro-Garcia, F., Monteoliva, L., Pla, J., Gil, C., Sanchez-Perez, M., Nombela, C. (1998), "Candida albicans: genetics, dimorphism and pathogenicity", Int Microbiol, 1(2): pp. 95-106.
29. Nakagawa, Y., Iinuma, M., Naoe, T., Nozawa, Y., Akao, Y. (2007), "Characterized mechanism of alpha-mangostin-induced cell death: caspase- independent apoptosis with release of endonuclease-G from mitochondria and increased miR-143 expression in human colorectal cancer DLD-1 cells",
Bioorg Med Chem, 15(16): pp. 5620-5628.
30. Nakatani, K., Atsumi, M., Arakawa, T., Oosawa, K., Shimura, S., Nakahata, N., Ohizumi, Y. (2002), "Inhibitions of histamine release and prostaglandin E2 synthesis by mangosteen, a Thai medicinal plant", Biol Pharm Bull,
25(9): pp. 1137-1141.
31. Ohkawa, H., Ohishi, N., Yagi, K. (1979), "Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction", Anal Biochem, 95(2): pp.
351-358.
32. Pedraza-Chaverri, J., Cardenas-Rodriguez, N., Orozco-Ibarra, M., Perez- Rojas, J. M. (2008), "Medicinal properties of Mangosteen (Garcinia mangostana)", Food Chem Toxicol, 46(10): pp. 3227-3239.
33. Peres, V., Nagem, T. J., de Oliveira, F. F. (2000), "Tetraoxygenated naturally occurring xanthones", Phytochemistry, 55(7): pp. 683-710.
34. Pothitirat, W., Chomnawang, T. M., Gritsanapan, W. (2009), "Anti-acne inducing bacteria activity and alpha-mangostin content of Garcinia mangostana fruit rind extracts from different provenience", Songklanakarin J Sci Technol, 31(1): pp. 41-47.
35. Pothitirat, W., Gritsanapan, W. (2008), "Quantitative analysis of total mangostins in Garcinia mangostana fruit rind", J Health Res, 22(4): pp. 161- 166.
36. Rachel, J. G., Franklin, D. L. (2008), "Pathogenesis of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus infection", Clin Infect Dis, 46(5): pp. 350-359.
37. Sakagami, Y., Iinuma, M., Piyasena, K. G., Dharmaratne, H. R. (2005), "Antibacterial activity of alpha-mangostin against vancomycin resistant
Enterococci (VRE) and synergism with antibiotics", Phytomedicine, 12(3):
pp. 203-208.
38. Sen, K. A., Sarkar, K. K., Mazumder, C. P., Banerji, N., Uusvuori, R., Hase, T. A. (1980), "A xanthone from Garcinia mangostana", Phytochemistry,
14(10): pp. 2223-2225.
39. Shankaranarayan, D., Gopalakrishnan, C., Kameswaran, L. (1979), "Pharmacological profile of mangostin and its derivatives", Arch Int Pharmacodyn Ther, 239(2): pp. 257-269.
40. Shibata, M. A., Iinuma, M., Morimoto, J., Kurose, H., Akamatsu, K., Okuno, Y., Akao, Y., Otsuki, Y. (2011), "alpha-Mangostin extracted from the pericarp of the mangosteen (Garcinia mangostana Linn) reduces tumor growth and lymph node metastasis in an immunocompetent xenograft model of metastatic mammary cancer carrying a p53 mutation", BMC Med, 9: pp.
69.
41. Steinberg, D. (1997), "Low density lipoprotein oxidation and its pathobiological significance", J Biol Chem, 272(34): pp. 20963-20966.
42. Sun, D., Zhang, S., Wei, Y., Yin, L. (2009), "Antioxidant activity of mangostin in cell-free system and its effect on K562 leukemia cell line in photodynamic therapy", Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 41(12): pp.
1033-1043.
43. Szymonik-Lesiuk, S., Czechowska, G., Stryjecka-Zimmer, M., Slomka, M., Madro, A., Celinski, K., Wielosz, M. (2003), "Catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbon tetrachloride intoxication", J Hepatobiliary Pancreat Surg, 10(4): pp. 309-315.
44. Williams, P., Ongsakul, M., Proudfoot, J., Croft, K., Beilin, L. (1995), "Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lipoprotein", Free Radic Res, 23(2): pp. 175-184.
45. Yates, P., Stout, G. H. (1958), "The structure of mangostin", J Am Chem Soc, 80: pp. 1691-1700.
46. Yu, L., Zhao, M., Yang, B., Qiangzhong, Z., Jiang, Y. (2007), "Phenolics from hull of Garcinia mangostana fruit and their antioxidant activities", Food Chemistry, 104: pp. 176-181.
PHỤ LỤC
Bảng P.1. Ảnh hưởng của dung môi chiết lên khối lượng cao chiết.
Dung môi chiết Khối lượng cao chiết (g)
Lần 1 Lần 2 TB
EP 0,105 0,065 0,085 0,028
EtOAC 0,46 0,425 0,4425 0,025
EtOH 0,81 0,78 0,795 0,021
MeOH 1,11 1,09 1,1 0,014
Bảng P.2. Ảnh hưởng của thời gian chiết lên khối lượng cao chiết.
Thời gian chiết (giờ) Khối lượng cao chiết (g)
Lần 1 Lần 2 TB
1 0,084 0,082 0,083 0,001
2 0,096 0,084 0,09 0,008
4 0,094 0,092 0,093 0,001
6 0,092 0,086 0,089 0,004
Bảng P.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ chiết lên khối lượng cao chiết.
Nhiệt độ chiết (C) Khối lượng cao chiết (g)
Lần 1 Lần 2 TB
30 0,054 0,056 0,055 0,001
40 0,054 0,052 0,053 0,001
50 0,068 0,07 0,069 0,001
60 0,07 0,072 0,071 0,001
Bảng P.4. Ảnh hưởng của tỷ lệ dung môi : nguyên liệu lên khối lượng cao chiết.
Tỷ lệ dung môi : nguyên liệu
Khối lượng cao chiết (g)
Lần 1 Lần 2 TB
2 0,186 0,166 0,176 0,014
3 0,264 0,234 0,249 0,021
Bảng P.5. Khả năng ức chế nấm S. aureus của -mangostin.
Nồng độ -mangostin (g/ml) Số khuẩn lạc mọc ( x 106 khuẩn lạc) % ức chế
Lần 1 Lần 2 TB 0 592 604 598 8 0 2 332 400 366 48 39 5 79 53 66 18 89 7,5 19 0 10 13 98 10 7 0 4 5 99 15 0 2 1 1 100 20 0 0 0 0 100
Bảng P.6. Khả năng ức chế P. aeruginosa của -mangostin.
Nồng độ -mangostin (g/ml) Số khuẩn lạc mọc ( x 106 khuẩn lạc) % ức chế Lần 1 Lần 2 TB 0 345 301 323 31 0 100 317 287 302 21 6,5 200 205 279 242 52 25,1 300 182 170 176 8 45,5 400 160 180 170 14 47,4 500 164 158 161 4 50,2 600 150 146 148 3 54,2 700 116 132 124 11 61,6 800 125 135 130 7 59,8 900 107 115 111 6 65,6 1000 100 94 97 4 70,0
Bảng P.7. Khả năng ức chế nấm C. albicans của -mangostin.
Nồng độ -mangostin (g/ml) Số khuẩn lạc mọc ( x 106 khuẩn lạc) % ức chế
Lần 1 Lần 2 TB 0 48 49 49 0,71 0 1000 31 29 30 1,41 38,1 1500 23 24 24 0,71 51,5 2000 23 38 31 10,61 37,1 2500 20 40 30 14,14 38,1 3000 23 40 32 12,02 35,1
Bảng P.8. Ảnh hưởng của -mangostin lên hoạt độ peroxidase trong gan chuột.
TT Hoạt độ peroxidase trong gan (IU/mg protein)
Lô ĐC Lô TN1 Lô TN2 Lô TN3 Lô TN4 Lô TN5
1 0,00674 0,00370 0,00745 0,00968 0,00710 0,00549 2 0,00299 0,00570 0,01016 0,00886 0,00697 0,00674 3 0,00263 0,00809 0,00939 0,01053 0,00808 0,00625 4 0,00307 0,00788 0,00503 0,00584 0,00760 0,00610 5 0,00678 0,00267 0,00338 0,00590 0,00484 0,00526 6 0,00699 0,00717 0,00124 0,00764 0,00388 0,00540 7 0,00849 0,00618 0,00426 0,00880 0,00459 0,00492 8 0,00760 0,00501 0,01145 0,00813 0,00533 0,00574 9 0,00847 0,00463 0,01333 0,00443 10 0,00363 0,01130 11 0,00192 0,00763 12 0,00621 0,00607 TB +SD 0,00597 0,0024 0,00523 0,0022 0,00672 0,0036 0,00888 0,0025 0,00605 0,0017 0,00559 0,0006 % so với đối chứng 100 88 124 145 101 94
Bảng P.9. Ảnh hưởng của -mangostin lên hàm lượng MDA trong gan chuột.
TT Hàm lượng MDA trong gan (mol/g protein)
Nhóm Đc Nhóm TN1 Nhóm TN2 Nhóm TN3 Nhóm TN4 Nhóm TN5 1 48,6 70,7 48,7 64,98 49,28 28,85 2 21,0 86,7 51,4 36,94 53,21 51,76 3 49,2 64,9 41,0 43,03 32,93 31,33 4 35,2 81,7 32,7 55,77 72,28 33,33 5 42,7 35,3 38,1 35,02 32,37 41,59 6 51,1 56,3 87,7 32,53 31,25 39,58 7 53,3 86,1 53,8 42,71 34,46 56,25 8 50,1 77,6 55,4 33,81 52,40 9 53,3 58,8 52,7 10 62,0 27,1 11 24,2 27,1 12 86,2 TBSD 44,611,5 68,716,8 46,75,4 43,111,6 43,715,4 41,910,5 % so với đối chứng 100 154 105 97 98 94
Hình P.1. Hình ảnh chuột trước khi nghiên cứu.