1.4. THƢ VIỆN KHÁNG THỂ BỘC LỘ TRÊN THỰC KHUẨN THẾ
1.4.2.3. Vector tách dòng phagemid
Thực khuẩn thể M13 có 2 dạng DNA. Một là dạng sợi đơn (ssDNA), dạng này dễ dàng thu đƣợc từ thực khuẩn thể và đƣợc sử dụng để xác định trình tự. Dạng thứ hai là dạng sợi kép (dsDNA – dạng sao chép giống plasmid), dạng này có thể đƣợc phân lập từ vi khuẩn chủ bị xâm nhiễm và đƣợc sử dụng để tách dịng mảnh gen đích. Phagemid – một loại vector phổ biến dùng trong kỹ thuật phage display là một dạng lai của thực khuẩn thể (phage) và plasmid. Các phagemid đƣợc thiết kế có chứa thêm vùng khởi đầu sao chép cho cả thực khuẩn thể M13 và E.coli, tích hợp với vị trí tách dịng đa điểm cắt và có thêm cả gen kháng kháng sinh [32]. Tuy nhiên, chúng thiếu tất cả các gen cấu trúc và phi cấu trúc khác mà cần thiết cho quá trình tạo phage hồn
chỉnh. Phagemid có thể đƣợc tăng trƣởng nhƣ phagemid hay đƣợc đóng gói nhƣ một phage M13 tái tổ hợp với sự trợ giúp của thực khuẩn thể trợ giúp (helper phage). Helper phage chứa vùng khởi đầu sao chép không đầy đủ (nhƣ M13K07 hoặc VCSM13) khi đƣợc bổ sung vào canh trƣờng nuôi cấy vi khuẩn sẽ tổng hợp tất cả các protein cấu trúc của phage để tạo ra phage hồn chỉnh. Q trình này đƣợc gọi là q trình giải thốt phage. Kết quả là các tiểu phần phage có thể kết hợp với pIII từ helper phage hoặc protein dung hợp polypeptide – pIII đƣợc mã hóa bởi phagemid. Tỉ lệ protein dung hợp polypeptide – pIII: pIII kiểu dại nằm trong khoảng từ 1:9 đến 1:1000 phụ thuộc vào kiểu phagemid, điều kiện sinh trƣởng, bản chất của đoạn polypeptid dung hợp với pIII và vị trí phân cắt của protein dung hợp kháng thể - pIII.
Hệ thống vector phagemid có khả năng gắn với các gen mã hóa cho các peptid hoặc mảnh kháng thể. Mặc dù, hệ thống này có một vài hạn chế nhƣ mất gen và khơng ổn định nhƣng nó đã đƣợc sử dụng thành cơng trong việc phân lập những mảnh kháng thể kháng lại một dải rộng các protein, DNA, chỉ thị bề mặt tế bào, virus. Vector phagemid cũng cho phép bộc lộ mảnh kháng thể trên bề mặt phage hoặc tiết mảnh kháng thể ra khoảng gian bào của vi khuẩn chủ E.coli theo một dạng dễ dàng
đƣợc xác định nhƣ khi sử dụng kỹ thuật ELISA.