a. Nguyên tắc
Dựa vào đặc điểm cấu trúc của các Nucleic acid: tích điện âm đồng đều trên khắp bề mặt của một điện trường nên sẽ di chuyển về cực dương của điện trường.
Tính linh động của phân tử khi di chuyển trong điện trường phụ thuộc vào khối lượng phân tử và nồng độ của gel.
b. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất
Thiết bị và dụng cụ
o Cân phân tích 324S, Sartorius, Đức
o Hệ thống chụp ảnh điện di Bioprint, máy tính và máy in Viber Lourmat, Pháp
o Máy điện di Apelex PS 304 minipac II
o Đầu típ các loại
o Micropipette các loại
o Bao tay
o Lò vi sống
Hóa chất dùng cho điện di
o Đệm TBE 10X
o Agarose
o Thuốc nhuộm ethidium bromide
c. Cách tiến hành
Chuẩn bị thạch agarose
- Chuẩn bị khuôn đổ thạch, gắn lược vào khuôn.
- Pha 110 ml gel agarose 1,5%: cân 1,65g agarose cho vào bình thủy tinh và thêm đệm TBE 1X vừa đủ 110ml, sau đó đun dưới lò vi sóng khoảng 3 đến 5 phút cho agarose tan hoàn toàn.
- Khi dung dịch gel agarose xuống khoảng 500C cho thêm 8 l thuốc nhuộm ethidium bromide.
- Gài lược tạo giếng sau đó tiến hành đổ gel. Trong quá trình đổ tránh tạo bọt khí.
- Sau khi gel đông hoàn toàn (khoảng 30 phút sau khi đổ gel) thì rút lược và cho TBE 1X vào để bảo quản gel sau đó chạy điện di.
Nạp mẫu vào
- Chuẩn bị DNA Marker (100bp, Promega)
- Hút 10 l mẫu đã chạy PCR cho vào các giếng theo thứ tự: đối chứng (-), Marker, đối chứng (+) và mẫu từ 1 đến 50.
- Chạy điện di ở 110v trong thời gian khoảng 30 đến 45 phút. - Đọc kết quả bằng máy đọc và chụp ảnh gel.