CHƢƠNG III : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phân lập nấm Penicilium và Colletotrichum gây bệnh trên cam Hàm Yê n-
Tuyên Quang
3.1.1. Phân lập nấm Penicillium
Trên các mẫu quả cam thu thập tại Tuyên Quang, triệu chứng ban đầu của nấm mốc xanh là sự xuất hiện của những vết mềm từ 1 ÷ 2 cm và bị mất màu. Vết bệnh nhanh chóng lan rộng tỏa trịn, có đường kính 3 ÷ 5 cm sau 1 đến 2 ngày. Khi hệ sợi nấm trên bề mặt quả đạt kích thước 2 ÷ 3 cm, bắt đầu xuất hiện các bào tử màu xanh. Các ngày tiếp theo, toàn bộ bề mặt trái cây nhanh chóng được bao phủ bởi các bào tử màu xanh lá (Hình 2a).
Từ mẫu quả bệnh điển hình, đã phân lập và thuần khiết được chủng nấm N11. Khuẩn lạc nấm N11 phát triển trên mơi trường Czapek khá nhanh, đường kính đạt 4 ÷ 5 cm/ 7 ngày ở nhiệt độ 24 ÷ 26°C. Mặt khuẩn lạc bằng phẳng, dạng nhung, vùng mép dị thường. Hệ sợi nấm thường mờ, thành mỏng, ráp nhẹ. Mặt trái màu vàng nhạt đến nâu, không sinh giọt tiết và sắc tố (Hình 2c).
Cơ quan sinh bào tử được sinh ra từ bề mặt hoặc từ hệ sợi khí sinh. Dưới kính hiển vi quang học có độ phóng đại 400 lần, quan sát được cuống kích thước 70,0 ÷ 150,0 x 5,0 ÷ 7,0 μm, với thành mỏng và nhẵn, mang các chổi khi phát triển tốt nhất là ba vòng thể bình, nhưng thường là hai vịng hoặc dị thường. Nhánh 20,0 ÷ 30,0 x 5,0 ÷ 6,0 μm, nhẵn; metulae thường có 2 ÷ 3 cái, kích thước 15,0 ÷ 25,0 x 5,0 ÷ 6,0 μm; thể bình trên một vịng thường 3 ÷ 5 cái, hình trụ trịn đầu, kích thước 10,0 ÷ 20,0 x 4,0 ÷ 5,0 μm; bào tử trần hình elip đến trụ trịn, 6,0 ÷ 15,0 x 2,5 ÷ 6,0 μm, nhẵn, tạo thành chuỗi dài đặc trưng cho các đặc điểm của nấm Penicillium digitatum (Hình 2d).
Dựa trên các triệu chứng, mơ tả hình thái học của nấm, chủng N11 được xác
a b
c d
Hình 2. Quả cam bị bệnh mốc xanh (a), hình thái nấm N11 trên mơi trường
Hansen (b), Czapek (c) và cấu trúc sinh sản và bào tử nấm N11 (độ phóng đại 400 lần) (d)
3.1.2. Phân lập nấm Colletotrichum
Triệu chứng bệnh thán thư trên cam do nấm Colletotrichum gây ra là những đốm nhỏ hình trịn, màu vàng nhạt cho đến nâu đậm trên vỏ, vết bệnh hơi lõm vào phía trong của vỏ. Tại vết bệnh, vỏ bị khô sần sùi, bệnh càng nặng vết bệnh càng lan rộng (Hình 3). Từ quả cam bệnh đã được làm sạch bề mặt, cắt một phần mô bệnh đặt trên môi trường PDA để phân lập nấm và thu nhận được chủng N8.
a b
Hình 4. Hình thái khuẩn lạc nấm N8 ni cấy trên đĩa môi trường PDA sau
a) 3 ngày; b) 2 tuần
Thể bình sinh ra từ các mơ mềm của đĩa giá, kích thước đến 30 µm dài; bào tử đơn độc, hình trụ trịn đầu, khơng ngăn vách, khơng màu, nhẵn, kích thước 10,0 ÷ 21,0 x 4,0 ữ 5,0 àm (Hỡnh 5 b v 5c). Đối chiếu các kết quả về đặc điểm hình thái, nhận định sơ bộ chủng N8 thuộc loài Colletotrichum gloeosporioides.
a
b c
Hình 5. Khuẩn lạc nấm N8 trên mơi trường Czapek (a); cơ quan sinh bào tử
Như vậy, từ nguồn mẫu là các quả bệnh thu nhận tại vườn cam Tuyên Quang, bằng phương pháp phân lập nấm bệnh và xác định sợ bộ bằng hình thái, bước đầu nhận định hai lồi nấm gây bệnh điển hình trên cam Hàm Yên - Tuyên Quang là Penicillium digitatum N11 và Colletotrichum gloeosporioides N8. Tuy
nhiên để định danh chính xác hai lồi nấm này, cần kết hợp với phân tích trình tự gen vùng ITS.