Nấm Trichoderma được nuôi cấy giữ nguồn trên môi trường PDA
Bào tử nấm Trichoderma được tách khỏi bề mặt PDA và cấy vào môi trường nhân
sinh khối sau khi hấp để nguội
Lắc nhẹ túi nilon để đảo trộn, đảm bảo các bào tử nấm được phân bố đều trong môi trường nhân sinh khối và túi nilon để hở
Nấm Trichoderma được nuôi cấy trong điều kiện nhiệt độ phòng, và được đảo trộn sau 3 ngày, sau 10 ngày nuôi cấy. Thời gian nuôi
cấy là 15 ngày.
Chế phẩm sẽ được phơi trong bóng râm cho đến khi khơ
Chế phẩm sẽ được đóng gói trong túi nilon, được hút chân không và bảo quản trong
điều kiện nhiệt độ 280 C
Môi trường nhân sinh khối thóc, gạo hoặc ngơ được cho vào túi nilon và bổ sung nước
với lượng thích hợp sau đó được hấp khử trùng trong 45 phút ở 1210C
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận
1. Sau một thời gian nghiên cứu đề tài đã tuyển chọn được 2 dòng
Trichoderma (Tr-tv và Tr-H) có hoạt độ enzyme Cellulase, Chitinase, β-Glucanase
cao, có hiệu quả đối kháng cao (85,8 - 95,3%) với nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca cao trong điều kiện phịng thí nghiệm.
2. Nấm Trichoderma sp. tuyển chọn được phát triển thích hợp nhất trên mơi trường PDA, sau 3 ngày đường kính đạt 8,0 – 8,3 cm, nhiệt độ thích hợp từ 25 - 300C, tốc độ tăng trưởng đạt 2,3 – 2,9 cm/ngày.đêm, mật độ bào tử cao nhất (34 - 48 x 108 bào tử/ ml).
3. Điều kiện ánh sáng xen tối là thuận lợi nhất cho nấm Trichoderma
sinh trưởng và phát triển, pH thích hợp từ 5 – 6. Trên cả 4 loại môi trường là gạo, thóc, bột ngơ, gạo trộn bột ngơ cả 2 dịng nấm Trichoderma (Tr-tv và Tr-H) đều
phát triển tốt. Tùy theo mục đích sử dụng để chọn mơi trường nhân ni thích hợp. 4. Điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dịng là: Mơi trường gạo với lượng 250g gạo + 150ml nước cho mật độ bào tử cao nhất (40 - 44 x 108 bào tử/g), trên môi trường bột ngô với lượng 250g bột ngô + 150 ml nước, nấm phát triển tốt và cho lượng bào tử cao nhất (18 – 19 x 108 bào tử/g). Trên mơi trường thóc với lượng 200g thóc + 250ml nước, đạt mật độ bào tử cao nhất (54 x 108 bào tử/g) và bào tử nấm đều xuất hiện sau 3 - 4 ngày nuôi cấy. Nấm Trichoderma sp. phát triển tốt trong điều kiện sử dụng túi nilon buộc nút hở + Đảo trộn cấp khí 2 lần, sau 3 ngày và 10 ngày và ánh sáng cần 12 giờ sáng + 12 giờ tối, cho mật độ bào tử đạt cao nhất (54 – 58 x 108 bào tử/g). Chế phẩm nấm Trichoderma sp.được bảo quản trong điều kiện mát (280C) và đóng trong túi nilon được hút chân khơng.
Việc ứng dụng chế phẩm sinh học vào phòng trừ bệnh hại trên cây trồng vừa góp phần nâng cao năng suất cây trồng đồng thời bảo vệ môi trường.
Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu, thử nghiệm và đánh giá chế phẩm trên đồng ruộng để đưa ra kết luận chắc chắn hơn góp phần giảm thiểu sự gây hại của bệnh thối đen quả ca cao và hoàn thiện hệ thống quản lý bệnh hại tổng hợp cho ca cao.
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. ACRI, 1997. Ca cao cây trồng có triển vọng trong phát triển nông nghiệp bền
vững ở Việt Nam. 38 trang.
2. Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn, 1999. Đầu tư dự án phát triển giống
ca cao (giai đoạn 1999 - 2000). Số 5685 QĐ/BNN - XDCB. Ngày
30/12/1999.
3. Dương Minh, Tô Huỳnh Như, Trần Thị Cẩm Nhụy và Nguyễn Hoàng Phúc (2011), “Khảo sát khả năng tiết Cellulase của các chủng nấm Trichoderma thu thập tại đồng bằng sông Cửu Long”, Trường đại học Cần Thơ, Tạp chí khoa học 2011 (17a), 282-285
4. Hoàng Thị Hoài (2011), Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm sinh học từ
một số vi sinh vật đối kháng, phòng trừ nấm gây bệnh trên cây trồng. Khóa
luận tốt nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, ngành bảo vệ thực vật.
5. Hồng Châu (2009), Ứng dụng chế phẩm Trichoderma, Trạm khuyến nông Tân Trụ, trang 1.
6. Ngô Vĩnh Viễn, Phạm Ngọc Dung, Nguyễn Thị Ly, Lê Thu Hiền và cộng sự (2007), “Phương pháp phân lập nấm Phytophthora từ đất, rễ và bộ phận cây bị bệnh”, Tuyển tập kết quả Khoa học và Công nghệ nông nghiệp 2006 – 2007, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Nhà xuất bản Nông nghiệp, p.
236 – 249.
7. Nguyễn Hồng Tuyên, Phạm Thị Ngọc Dung và cộng sự (2012 – 2013),
Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen quả ca cao và các giải pháp khoa học công nghệ trong phòng trừ bệnh, mã số ĐTĐL.2011-G/63 Viện Bảo vệ Thực
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
8. Nguyễn Minh Châu (2009), Sử dụng nấm Trichoderma để phòng trừ sâu bệnh
cho vườn cây ăn quả, Viện cây ăn quả Miền Nam, nguồn tin thông tấn xã, tr.2.
9. Nguyễn Thị Chắt, Đào Thị Lam Hương (1995), “ Kết quả một số thí nghiệm và thực nghiệm về nhân giống vơ tính cây ca cao”, Kỷ yếu kết quả 10 năm nghiên cứu khoa học (1983 - 1993), Viện Nghiên cứu Cà phê.
Trang 598 - 610.
10. Nguyễn Văn Tuất và Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất chế biến và sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc và sinh học, Nhà xuất bản nông nghiệp, 56tr.
11. Nguyễn Văn Tuất và Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất chế biến và sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc và sinh học, Nhà xuất bản nông nghiệp, 56tr.
12. Nguyễn Văn Uyển, 1999. Hướng dẫn kỹ thuật trồng cây ca cao. Nhà Xuất bản Nơng nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 110 trang.
13. Nguyễn Văn Uyển, Nguyễn Tài Sum, 1996. Cây ca cao trên thế giới và triển
vọng ở Việt Nam. Nhà xuất bản nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 183 trang.
14. Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú, Bùi Văn Công (2012), “Nghiên cứu sản xuất và sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ một số bệnh nấm hại vùng rễ cây Khoai Tây, Lạc, Đậu Tương” , Tạp chí khoa học
và phát triển, Tập 10, số 1, tr.95 - 102
15. Phạm Hồng Đức Phước (2003). Kỹ thuật trồng ca cao ở Việt Nam. Nhà Xuất bản Nơng nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 73 trang.
16. Phạm Hồng Đức Phước, 2005. Báo cáo kết quả khảo nghiệm các dòng ca cao
nhập nội tại các tỉnh phía Nam, 28 trang.
17. Phạm Hồng Đức Phước, Nguyễn Thị Mỹ Nguyệt, 1999. Nhân giống vơ tính cho cây cacao bằng phương pháp ghép. Tập san KHKT Nông Lâm Trường
Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh. Số tháng 9/1999, trang 48 - 50. 18. Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Lê Đình Thao, Hà Giang, Trần Thị Như
Hoa, Nguyễn Hồng Tuyên, Nguyễn Thúy Hạnh (2012), “Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng Trichoderma asperellum trong phòng trừ nấm Phytophthora
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
spp. gây bệnh trên cây cao su”. Tạp chí bảo vệ thực vật, Bộ Nơng nghiệp và Phát triển nông thôn, số 12
19. Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Nguyễn Văn Tuất (2009), “Phân tích chuỗi Internal Transcribed Spacer (ITS) của nấm Phytophthora tropicalis gây bệnh chết nhanh hồ tiêu tại Việt Nam ”, Tạp chí Nơng nghiệp và phát triển nông thôn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, số 4, p. 17 – 21.
20. Phạm Ngọc Dung, Lê Đình Thao, Nguyễn Hồng Tuyên, Đoàn Thị Thanh, Nguyễn Văn Liêm, Nguyễn Thúy Hạnh (2011), “Cải tiến môi trường phân lập nấm Phytophthora spp. gây bệnh trên cây ca cao”, Tạp chí bảo vệ thực vật, số 2. 21. Phạm Ngọc Dung, Ngô Vĩnh Viễn, Nguyễn Văn Tuất, Nguyễn Thị Ly, Trần
Ngọc Khánh, Hồ Gấm, Nguyễn Quang Tuấn (2008), “ Một số kết quả phòng trừ bệnh chết nhanh gây hại hồ tiêu tại Đăk Nơng”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, ISSN: 0868-2801, số 3, p. 17 - 23. 22. Trần Kim Loang, Lê Đình Đơn, Tạ Thanh Nam, Ngô Thị Xuân Thịnh,
Nguyễn Thị Tiến Sĩ, Trần Thị Xê (2008), “Phòng trừ bệnh do nấm
Phytophthora trên cây hồ tiêu bằng chế phẩm sinh học Trichoderma (Tricho- VTN) tại Tây Nguyên”, Kết quả nghiên cứu khoa học năm 2008, Viện Khoa
học Nông nghiệp Việt Nam, Nhà xuất bản Nông nghiệp, tr. 307-315.
23. Trần Kim Loang, Vũ Văn Tố, Hà Thị Mão (2001), Điều tra xác định thành phần sâu bệnh hại cây ca cao tại tỉnh Đăk Lăk, Kết quả nghiên cứu khoa học
năm 2000 - 2001. Buôn Ma Thuột, trang 144 - 155.
24. Trần Thị Thuần, Nguyễn Thị Ly, Phạm Ngọc Dung (2004), “Nghiên cứu và sử dụng nấm đối kháng Trichoderma để phịng trừ nhóm nấm tồn tại trong đất gây hại cây trồng”, Tạp chí bảo vệ thực vật.
25. Trần Thu Hà, Phạm Thanh Hòa (2012), “Khả năng đối kháng của nấm Trichoderma với nấm bệnh hại cây trồng Scleroitum rolfsii trong điều kiện invitro”, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, tập 75A, số 6, (2012), tr. 49 – 55. 26. Trịnh Đức Minh và cộng sự (2000), Kết quả nhân giống vơ tính cây ca cao
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
Trồng trọt và Bảo vệ thực vật. Hội đồng Khoa học Công nghệ Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn. Tháng 9/2000.
27. Trịnh Đức Minh, Nguyễn Thị Chắt và cộng sự (1998), “Kết quả chọn đầu dòng và nhân vơ tính ca cao tại Viện Nghiên cứu Cà phê”, Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ
và Quản lý kinh tế, Nông nghiệp và Công nghiệp thực phẩm, số 6, trang 237 - 240.
28. Viện Qui hoạch và Thiết kế nông nghiệp, 1998. Tổng quan về phát triển cây
ca cao Việt Nam.
TIẾNG ANH
29. Anandaraj M. and Sarma Y. R. (2003), The potential of PGPRS in disease management of spice crops, International PGPR Workshop, Calicut, India.
30. Aravind, R., Kumar, A., Eapen, S.J., Ramana, K.V. (2009), Endophytic bacterial flora in root and stem tissues of black pepper (Piper nigrum L.) genotype: isolation, identification and evaluation against Phytophthora capsici, Indian Institute of Spices Research, Calicut, Kerala, India, p.1.
31. Aryantha, I.P., Cross, R. and Guest, D.I. (2000), “Suppression of
Phytophthora cinnamomi in potting mixes amended with uncomposted and composted animal manures”, Phytopathology, 90: p. 775 - 782.
32. Bekele F., End M. J and Eskes A. B.(2003). Proceeding of the international workshop on cocoa Breeding for improved production systems. 198 p.
33. Broadley, R.H. (1992), Protect your avocados, Brisbane, Australia,
Queensland Department of Primary Industries.
34. Cohen,Y. and Coffey, M.D.(1986), “Systemic fungicides and the control of
Oomycetes”, Annual Review of Phytopathology, 24, 311 - 338.
35. Diby, P. and Sarma, Y.R. (2006), “Antagonistic effects of metabolites of
Pseudomonas fluorescens strains on the different growth phases of Phytophthora capsici, foot rot pathogen of black pepper (Piper nigrum L.)”,
Arch. Phytopathol. Plant. Protect., 39, p. 113–118.
36. Diby, P., Saju, K.A., Jisha, P.J., Sarma, Y.R., Kumar, A. and Anandajai, M. (2003), “Mycolytic enzymes produced by Pseudomonas fluorescens and
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
Trichoderma spp against Phytophthora capsici, the foot rot pathogen of black pepper (Piper nigrum Linn.)”, Soil Biology and Biochemistry.
37. Diby, P., Sarma, Y.R., Sinivasan, V. and Anandaraj, M. (2005b), “Pseudomonas fluorescens mediated vigour in black pepper (Piper nigrum L.)
under green house cultivation”. Ann. Microbiol., 55, p. 171–174.
38. Drenth, A. and Guest, D.I. (2004), Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia, Australian Centre for International
Agricultural Research Canberra, 235 pp.
39. Drenth, A. and Sendall, B. (2004), “Isolation of Phytophthora from infected
Plant Tisue and soil, and Principles of Species Identification”. In “Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia”, Australian Centre for
International Agricultural Research Canberra, pp. 94 – 102.
40. Duncan, J., and Cooke, D. (2002). Identifying, diagnosing and detecting Phytophthora by molecular methods. Mycologist, Vol.16, Part 2: 59-66.
41. Dutta, P. and Das, B.C. (1999), “Control of Rhizoctonia solani in soybean ( Glycine max) by farmyard manure culture of Trichoderma harzianum”. Indian
Journal of Agricultural Sciences, p.596-598.
42. Ebon, A.H., Lu, A.T.T. and Tiong, R.H.C. (1978), Early growth result of cocoa on some Sarawak soil. Proc. Int. Conf. Cocoa Coconuts, Kuala Lumpur,
pp: 224 – 242.
43. Erwin, D.C. and Riberrio O.K (1996), “Phytophthora diseases worldwide”, St Paul, Minnessota, USA, American Phytopathological Society Press, 562 pp. 44. Freeman, G.H. (1964), Present nursery and establishment methods for cocoa
in Western Nigeria. Ann. Rep. W. Afr. Cocoa. Res. Inst. (Nigeria), pp. 13 -14.
45. Fulton, R.H. (1989), The cacao disease trilogy: black pod, Monilia pod rot and witch broom. Plant Dis, 73: 601 – 603.
46. Galindo, J.J. (1992), “Prospects for biological control of cacao”, In: Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australasia, Rome, FAO Plant Production and Protection, p. 112.
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
diseases of tree crops using trunk-injected phosphonates”, Horticultural
Reviews, 17, p. 299 - 330.
48. Jackson, G.V.H. and Newhook, F.J. (1978), Sources of Phytophthora
palmivora inoculum in Solomon Island cocoa plantations.
Trans.Br.Mycol.Soc. 71: 239 – 249.
49. Jollès và Muzzarelli (1999), Chitin and chitinases, Basel, Boston, Berlin,
Birkhauser. Switzerland, p.38 - 68.
50. Keane, P.J (1992), Disease of pest and cocoa: an overview. In: Keane, P.J. and Putter, C.A., ed., Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australia, Rome, Italya, Food and Agriculture Organization of the United
Nations, FAO Plant Production and Protection Paper No.112.
51. Konam, J.K. and Guest, D.I. (2004), “Role of Flying beetles (Coleoptera: Scolytidae and Nitidulae) in the spread of Phytophthora pod rot of cocoa in Papua New Guinea”, Australasian Plant Pathology, in press.
52. Kyung Seok Park, et al. (2007), “Induced systemic Resistance by Bacillus vallismortis EXTN-1 suppressed bacterial wilt in tomato caused by Ralstonia solanacearum”, Plant Pathology, J.23 (1), 2007.
53. Lee, B.S and Lum, K.Y. (2004), Phytophthora Diseases in Malaysia,
Malaysian Agricultural Research and Development Institute, GPO Box 12301, 50774 Kuala Lumpur, Malaysia.
54. Lutz, A., Menge, L.A. and Bender,G. (1989), “Phytophthora root rot in
citrus: can it be controlled by manipulation of irrigation practices”, California
Grower, 13, p. 8 - 10.
55. Medeiros, A.G. (1976), Sporulation of Phytophthora palmivora (Butl.) Butl. In relation to epidemiology and chemical control of black pod disease. PhD
thesis, University of California, Riverside, California, USA. Cited in Pereira. 56. Morris, P.F. and Gow, N.A.R. (1993), “Mechanism of electrotaxis of zoospore
of phytopathogenic fungi”, Phytopathology, 83, p. 877-882
57. Pokou, N.D., N’Goran, J.A.K., Kebe, I., Eskes, A., Tahi, M. and Sangare, A. (2008), Levels of resistance to Phytophthora pod rot in cocoa accessions
Luận văn Thạc sỹ Trần Thị Thúy – KHMTK19
selected on-farm in Côte d’Ivoire. Centre National de Recherche
Agronomique (CNRA), 01 BP 1740 Abidjan 01, Côte-d’Ivoire, 27 :302 – 309. 58. Purwantara, A (1987), Penyebab penyakit Phytophthora pada tanaman kakao
di Jawa. In: Proceedings of the Indonesia Plant Pathology Society Conference
1987, Surabaya, 283 – 290.
59. Purwantara, A (2003), Eoidemiology and control of Phytophthora diseases of
cocoa in Java, Indonesia. Paper presented at International Congress of Plant
Pathology, at Christchurch, New Zealand. Paper number 28.1
60. Tan, K.S.R. (2000), “Effect of fertiliser on the susceptibility of durian and papaya
towards Phytophthora palmivora”. BSc (Honours) thesis, School of Botany.
61. Tran Ha, Ficke, A., Asiimwe, T., Hoăfte, M. and Raaijmakers, J.M. (2007), “Role of cyclic lipopeptide massetolide A in biological control of
Phytophthora infestans and in colonization of tomato plants by Pseudomonas fluoresens”, New Phytol., 175, p. 731–742.