2.2 .Thiết bị, dụng cụ, hóa chất
2.4. Phương pháp xác định chỉ số hóa lý cơ bản của tinh dầu hạt tiêu tỉnh Bình
Định, Việt Nam
2.4.1. Xác định chỉ số khúc xạ tinh dầu hạt tiêu đen theo TCVN 8445:2010
Chỉ số khúc xạ được xác định theo phương pháp đo góc giới hạn bằng khúc xạ kế kiểu Abbe ở 20oC bằng cách cho dòng nước chảy qua máy để duy trì máy ở 20oC.
Đầu tiên điều chỉnh máy nhằm tiêu diệt hiện tượng tán sắc ánh sáng để có thể thấy rõ ranh giới giữa miền tối, sáng của thị trường. Sau đó chuẩn lại để thấy rõ nét vạch chuẩn chữ thập giữa thị trường.
Mở hộp lăng kính, dùng bông tẩm axeton lau kỹ lăng kính và thấm khô bằng vải mềm. Nhỏ 2 - 3 giọt tinh dầu lên mặt lăng kính mờ phía dưới và áp vào lăng kính bên trên.
Khi nhiệt kế của khúc xạ kế chỉ 20oC, nhìn vào thị kính, chỉnh hiện tượng tán sắc nếu có rồi từ từ xoay bộ lăng kính đưa ranh giới giữa hai miền sáng và tối cắt đúng giao điểm của vạch chuẩn.
Đọc chỉ số khúc xạ ở ngang vạch chuẩn. Xác định lại vị trí và đọc chỉ số ba lần. Chú ý chỉ đọc chỉ số khi nhiệt kế đã ổn định.
Kết quả là trung bình cộng của 3 giá trị đọc được và làm tròn tới số thập phân thứ tư. Khi đo chỉ số khúc xạ của tinh dầu ở nhiệt độ khác nhau và cần chuyển về chỉ số khúc xạ ở nhiệt độ nhất định.
Chỉ số khúc xạ được tính theo công thức sau: NtD = Nt’
D + 0,0004.(t’– t) Trong đó NtD: Chỉ số đọc được ở nhiệt độ t
t: Nhiệt độ cần tính chuyển
2.4.2. Xác định tỷ trọng tinh dầu hạt tiêu đen ở 25°C theo TCVN 8444:2010
Tỷ trọng của tinh dầu là tỷ số của khối lượng tinh dầu ở 25oC với khối lượng của cùng một thể tích nước cất cũng ở 25oC.
24
Bình tỷ trọng được rửa sạch bằng hỗn hợp sunfocromic, tráng kỹ bằng nước cất và xúc sạch bằng axeton hoặc ethanol, làm khô bằng cách thổi vào bình một luồng khí khô, nóng hoặc sấy nhẹ ở nhiệt độ 70 - 80oC tới khối lượng không đổi. Cân khối lượng của bình và nút chính xác tới 0,0002 g.
Rót nhẹ nước cất vào bình cao hơn bình định mức một chút, tránh không tạo bọt khi rót. Ngâm bình vào môi trường điều nhiệt đã duy trì ở 25 ± 0,5oC ngập tới cổ lọ trong 30 phút tới khi nhiệt độ của nước trong bình đạt 25 ± 0,5oC. Dùng các giấy thấm hút bớt nước trong bình tới đúng vạch định mức và thấm khô các giọt nước bám ở thành trong cổ bình, lau khô cổ bình và đậy nút. Lấy bình ra khỏi môi trường điều nhiệt, cân nhanh chính xác đến 0,0002g. Sau đó đổ nước vào và làm khô như trên. Rót nhẹ tinh dầu vào bình và chú ý không tạo bọt khi rót và tiến hành giống như làm với nước cất. Xác định được khối lượng của bình và tinh dầu ở 25 ± 0,5oC.
Tỷ trọng của tinh dầu ở 25oC được tính theo công thức sau : d2525 = m2-m/m1-m
Trong đó m: Khối lượng bình tỷ trọng, g
m1: Khối lượng bình tỷ trọng và nước ở 25oC, g m2: Khối lượng bình tỷ trọng và tinh dầu ở 25oC, g
2.4.3. Xác định chỉ số acid của tinh dầu hạt tiêu đen theo TCVN 8450:2010
Chỉ số acid là số mg KOH cần dùng để trung hòa acid tự do có trong 1 gam tinh dầu.
Nguyên tắc của phương pháp này là dựa trên sự trung hòa acid tự do có trong tinh dầu bằng dung dịch kiềm chuẩn theo phản ứng:
RCOOH + KOH → RCOOK + H2O. Tiến hành:
Cân 2g tinh dầu (chính xác đến 0,005g) vào bình cầu xà phòng hóa. Thêm vào đó 10 mL ethanol (ethanol 95% thể tích ở 20oC, đã được trung hòa bằng KOH 0,1N trong ethanol) và vài giọt chất chỉ thị màu phenolphtalein (0,2% trong ethanol).
Chuẩn độ bằng dung dịch KOH 0,1N trong ethanol (chuẩn bị trước 24h) đến khi xuất hiện màu hồng bền vững trong vòng 30 giây. Ghi số mL KOH tiêu tốn.
25
A= 5,61.V/m
Trong đó V: Lượng dung dịch KOH 0,1N đã dùng để chuẩn độ, mL m: Khối lượng tinh dầu, g
5,61: Lượng KOH có trong 1mL dung dịch KOH 0,1N, mg
2.4.4. Xác định chỉ số este tinh dầu hạt tiêu đen theo TCVN 8451:2010
Nguyên tắc: Xà phòng hóa este bằng dung dịch KOH trong ethanol theo phản ứng:
RCOOR’ + KOH → RCOOK + R’OH. Tiến hành:
Dùng buret cho 20 mL dung dịch KOH 0,5N vào bình cầu để xà phòng hóa có chứa lượng mẫu đã xác định chỉ số acid, lắp ống sinh hàn khí và đun sôi nhẹ trong 1 giờ.
Cùng một lúc trong bình cầu khác kiểm tra song song một mẫu trắng gồm 10 mL ethanol và 20 mL dung dịch KOH 0,5N trong cồn. Đun xong để nguội cho vào cả 2 bình, mỗi bình 5 giọt chỉ thị màu phenolphtalein 2%. Chuẩn độ bằng dung dịch H2SO4 hoặc HCl 0,5N.
Chỉ số este (X3) được tính theo công thức:
X3= (V-V1).28,05/m Trong đó: X3: Chỉ số este của tinh dầu, mg KOH/g
V: Lượng dung dịch H2S04 hay HCl 0,5N để chuẩn độ mẫu trắng, mL
V1: Lượng dung dịch H2S04 hay HCl 0,5N để chuẩn độ mẫu thử,mL m: khối lượng mẫu,g