Lô gà Số con/lô Liều vắc xin và đƣờng dùng Phƣơng pháp đánh giá
Lô I:
Đối chứng 5 Không dùng vắc xin HI Lô II:
An toàn 10
2 liều vắc xin ghi trên nhãn/gà, tiêm bắp
Theo dõi 14 ngày tất cả gà phải sống
Lô III:
Hiệu lực 20
01 liều vắc xin ghi trên nhãn/gà,
tiêm bắp HI
b. Phương pháp tiến hành
Trước khi chủng vắc xin, lấy máu toàn đàn gà thí nghiệm. Mỗi con lấy 0,5 - 1 ml máu ở tĩnh mạch, chiết lấy huyết thanh dùng để xét nghiệm. Sau khi xét nghiệm chọn lựa gà có kết quả âm tính tiến hành sử dụng vắc xin trên đàn gà thử nghiệm.
Đàn gà được theo dõi liên tục 21 ngày sau khi tiêm vắc xin, mỗi ngày quan sát 2 lần.
Lấy máu gà sau miễn dịch: lấy 45 mẫu máu lô miễn dịch và 20 mẫu lô đối chứng tại các thời điểm 14 ngày và 21 ngày, 28 ngày sau khi gây miễn dịch.
Phương pháp đánh giá kết quả: Phương pháp HI.
3.3.12. Phƣơng pháp tiêm vắc xin và thu thập huyết thanh
Gà được lựa chọn làm thí nghiệm là gà 4-6 tuần tuổi được kiểm tra kháng thể kháng vi rút EDS bằng phương pháp HI. Gà đạt tiêu chuẩn thí nghiệm không có kháng thể kháng vi rút EDS.
Bƣớc 1: Tiêm vắc xin
liều 0.5ml/con, lô vắc xin 30 con. Lô đối chứng 10 con được tiêm 0.5ml nhũ dầu.
Bƣớc 2: Lấy mẫu định kỳ 7, 14, 21 và 28 ngày
Máu được lấy ở tĩnh mạch cánh của gà.
Mẫu máu được bảo quản trong ống Eppendorf 1.5 ml.
Bƣớc 3: Xử lí mẫu
Mẫu mang về phòng thí nghiệm để trong tủ ấm 370
C trong 2 - 3 giờ, sau đó để 40C trong vòng 2 giờ để ra huyết thanh.
Bƣớc 4: Ly tâm chắt huyết thanh.
Li tâm 5000 vòng/phút trong 5 phút ở 40C. Thu huyết thanh.
Mẫu huyết thanh được bất hoạt nhiệt ở 560C trong 30 phút trước khi tiến hành HI
Bƣớc 5: Bảo quản mẫu.
Mẫu huyết thanh chờ làm thí nghiệm được bảo quản trong 40C. Mẫu huyết thanh dùng để lưu mẫu được bảo quản trong -300C.
3.3.13. Phƣơng pháp thu thập số liệu, xử lý thống kê sinh học
Phương pháp vận chuyển, bảo quản, sử dụng vắc xin và kỹ thuật chủng vắc xin thực hiện theo quy trình quy định sẵn.
Xác định hiệu giá kháng thể và độ dài miễn dịch của gà được chủng vắc xin EDS’76 bằng phản ứng HI.
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Để có vắc xin phòng bệnh cho đàn gà góp phần vào công tác phòng chống dịch bệnh trên gia súc, gia cầm. Quy trình sản xuất vắc xin trên phôi vịt 10-11 ngày tuổi từ vi rút phòng hội chứng giảm đẻ vô hoạt chủng EDS’76 được thực hiên qua các bước sau:
1. Kiểm định và bảo quản giống - Giống gốc
- Giống sản xuất 2. Chuẩn bị trứng
3. Chuẩn bị dụng cụ, hoá chất 4. Cấy vi rút sản xuất vắc xin
5. Thu hoạch, xử lý và kiểm tra vô trùng 6. Bất hoạt vi rút
7. Sản xuất vắc xin thành phẩm
8. Kiểm nghiệm thành phẩm theo tiêu chuẩn TCVN 8685-4:2011
Ở mỗi khâu sản xuất đều yêu cầu kỹ thuật chặt chẽ từ nguyên liệu môi trường, thao tác kỹ thuật,... Chỉ cần một khâu bị sai sót là có thể làm ảnh hưởng đến toàn bộ quả trình sản xuất vắc xin gây nhiều thiệt hại về kinh tế. Vì vậy, chúng tôi hết sức chú trọng trong quá trình này.
Bên cạnh đó, theo quy định, bất cứ loại vắc xin nào trước khi xuất xưởng bắt buộc phải kiểm tra đủ 3 chỉ tiêu: vô trùng, an toàn và hiệu lực. Đây là những chỉ tiêu chính và cũng là những chỉ tiêu quan trọng không thể thiếu trong quá trình kiểm nghiệm đối với mỗi loại vắc xin.
4.1. NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VẮC XIN VÔ HOẠT NHŨ DẦU PHÒNG HỘI CHỨNG GIẢM ĐẺ EDS’76 HỘI CHỨNG GIẢM ĐẺ EDS’76
4.1.1. Xác định liều gây nhiễm vi rút EDS trên phôi trứng vịt 10-11 ngày và thời gian thu vi rút trên phôi trứng vịt thời gian thu vi rút trên phôi trứng vịt
Chúng tôi thực hiện sản xuất huyễn dịch vi rút từ giống vi rút EDS’76 (có hiệu giá vi rút giống ban đầu HA=11 log2) để thực hiện sản xuất vắc xin. Lượng vi rút thu được trong quá trình sản xuất liên quan chặt chẽ đến nồng độ vi rút gây nhiễm và thời gian thu hoạch vi rút.
Để xác định liều gây nhiễm thích hợp và thời gian thu hoạch tốt nhất chúng tôi đã tiến hành gây nhiễm vi rút phôi vịt 11 ngày tuổi. Với liều gây
nhiễm chúng tôi thực hiện 3 nồng độ pha loãng 200 EID50, 500 EID50, 1000 EID50/trứng, với mỗi nồng độ 20 phôi vịt 11 ngày tuổi.
Trứng sau khi tiêm sẽ được tiếp tục ấp và thu hoạch tại các thời điểm 72h, 84h và 96h, 120h sau gây nhiễm mỗi nồng độ 5 phôi vịt. Mẫu được đánh giá hiệu giá HA là mẫu gộp của mỗi 5 trứng thu hoạch. Chúng tôi tiến hành thí nghiệm lặp lại 3 lần. Kết quả thí nghiệm được trình bày tại bảng 4.1 sau: