dạng trứng giống trái xoài 4.2.3. Một số biến đổi bệnh lý vi thể của gà mặc bệnh IB
Cùng với việc chẩn đoán bệnh dựa vào đặc điểm bệnh tích đại thể, các khí quan của gà nghi mắc bệnh IB cũng được thu thập và tiến hành làm tiêu bản để xác định một số đặc điểm bệnh tích vi thể. Từ những mẫu bệnh phẩm có các biến đổi đại thể được lấy mẫu ngâm trong formol 10% để làm tiêu bản vi thể. Xác định bệnh tích vi thể chủ yếu của bệnh. Phương pháp làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm đúc bằng parafin, nhuộm Haematoxilin – Eosin (HE). Các biểu hiện vi thể có thể quan sát được tập trung ở đường hô hấp gồm: sự thấm nước phù ở hạ nêm mạc khí quản; phổi xuất huyết , hồng cầu tràn ngập phế nang. Bệnh tích ở thận cũng ở mức độ nặng và rõ nét gồm xuất huyết kẽ thận và các tế bào ống thận thoái hóa không bào.
Hình 4.15. Phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập trong các phế nang (10X)
Hình 4.16. Thấm nước phù ở hạ niêm mạc khí quản (10X)
Hình 4.17. Xuất huyết kẽ thận (14X) Hình 4.18. Tế bào ống thận thoái hóa không bào (40X)
Các nghiên cứu trước đây khẳng định rằng biểu mô đường hô hấp, thận và cơ quan sinh dục là nơi xâm nhập đầu tiên của IBV. Tại đó, virus ký sinh và nhân lên nhanh chóng thoái hóa và làm chết tế bào. Virus có khả năng phá hủy thành mạch làm tăng tiết dịch thẩm xuất và thâm nhiễm tế bào lympho (Cavanagh, 2003). Một số bệnh tích phổ biến ở gà mắc IBV quan sát được thường bao gồm phù lớp màng nhầy khí quản, tế bào biểu mô co tròn. Sau khoảng một tuần nhiễm bệnh, các tế bào lympho và tế bào mầm có biểu hiện tăng sinh, xoang khí phù tích nước, viêm kẽ thận. Virus có khả năng gây thoái hóa hạt và hình thành các hốc nhỏ và bong tróc (Riddell, 1987; Siller, 1981).
Một số chủng IBV có khả năng gây bệnh tích ở thận và gây viêm thận. IBV thể viêm thận ở gà được báo cáo ở nhiều nước trên thế giới như Úc, Italia, Mỹ, Bỉ, Pháp và một số nước khác. Ở Châu Âu, chủng virus gây viêm thận ở gà trở nên phổ biến hơn hẳn. Các chủng virus này có thể gây ra tỷ lệ chết biến động từ 5-80% trong các thí nghiệm gây nhiễm đối với gà SPF (specific pathogenic free) (Meulemous et al., 1987; Wang và et al., 1996). Để giải thích cơ chế sinh bệnh này, một số nghiên cứu cho rằng, virus có khả năng thâm nhập và gây ảnh hưởng tới tế bào biểu mô thận (epithelial cells) gây cản trở quá trình hấp thu và thải trừ nước và chất điện giải, hậu quả là gây ra suy thận và gây chết ở gà (Chen and Itakura, 1996). Đối với những bệnh tích ở đường hô hấp, các nghiên cứu trước đây khi gây nhiễm IBV trên gà cũng thể hiện rằng, có
hiện tượng bong tróc và phù biểu mô đường hô hấp và gây kích ứng tế bào hình cầu (Cavanagh and Naqi, 2003).
Các chủng IBV gây ra bệnh lý ở thận thường được phát hiện trên gà hướng thịt giai đoạn xuất truồng và có thể gây ra tỷ lệ chết rất cao, đặc biệt làm giảm khả năng tăng trọng (Ambali and Jones, 1987; Casais et al., 2003). Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy rằng các biến đổi bệnh lý đại thể và vi thể đều rất phù hợp với những đặc điểm bệnh lý gây ra do các chủng IBV gây ra trên thế giới. Đặc biệt hơn, các chủng IBV ở Việt Nam có khả năng gây ra bệnh tích viêm kẽ thận, và tế bào ống thận thoái hóa không bào ở gà đẻ, thay vì thường thấy ở gà nuôi hướng thịt giai đoạn xuất truồng.
4.3. ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR CHẨN ĐOÁN GÀ MẮC IBV
Dựa vào triệu chứng lâm sàng đặc trưng mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm từ những gà có bệnh tích điển hình, tiến hành phản ứng RT-PCR. Từ đó làm cơ sở để xác định gà bệnh trong chẩn đoán dịch tễ học.
Trước khi sử dụng phản ứng RT-PCR để xác định sự có mặt của IBV trong các mẫu bệnh phẩm, chúng tôi đã tiến hành tối ưu hóa và xác định độ đặc hiệu của cặp mồi sử dụng trong nghiên cứu này (Feng et al., 2012)
Để khẳng định gà nhiễm IBV, chúng tôi tiến hành lấy mẫu bệnh phẩm của gà đẻ nghi mắc IB của một số cơ sở chăn nuôi công nghiệp thuộc công ty DABACO và 3 xã thuộc huyện Yên Thế , Bắc Giang với số lượng mẫu tương ứng là 80 mẫu và 65 mẫu. Sau đó, tiến hành phản ững RT-PCR với cặp mồi có sẵn. Kết quả được trình bày tại bảng 4.9 và hình 4.18.
Bảng 4.9. Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR chấn đoán gà mắc bệnh IB tại
Phương thức chăn nuôi Số mẫu xét nghiệm Số mẫu dương tính Tỷ lệ (%) Công nghiệp 80 37 44,05 Thả đồi 65 23 35,38 Tổng 145 60 41,30
Hình 4.19. Kết quả xác định IBV bằng xét nghiệm RT-PCR
Kết quả kiểm tra giám định bằng phản ứng RT-PCR cho thấy, tỷ lệ mẫu dương tính với IBV theo phương thức chăn nuôi công nghiệp (44,05%) cao hơn phương thức chăn nuôi thả đồi (35,38%) (bảng 4.9 và hình 4.20).
Các phương pháp được sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán xác định IBV chủ yếu là phân lập qua phôi trứng hoặc các phản ứng huyết thanh học như ELISA, phản ứng miễn dịch huỳnh quang. Phản ứng RT-PCR đã được sử dụng để chẩn đoán sự có mặt của IBV trong các mẫu tách chiết từ dịch khí quản hoặc dịch niệu nang phôi gà. Các kỹ thuật này đều kết quả có mức độ tin cậy cao và được áp dụng rộng rãi để chẩn đoán chính xác và định type IBV (Cavanagh, 2003; Cavanagh, 2005). Các nghiên cứu trước đây đã xác định tỷ lệ mẫu dương tính với IBV bằng kỹ thuật RT-PCR, tỷ lệ này ở gà thịt thương phẩm là 36,36% (Jahantigh et al., 2013). Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng, có 4/91 chủng gây bệnh thuộc serotype Massachusetts.
Hình 4.20. Kết quả phản ứng RT-PCR xác định sự có mặt của IBV trong
mẫu bệnh phẩm bằng cặp mồi đặc hiệu (P: đối chứng dương IBV; M: thang
DNA chuẩn 1kb (Fermentas))
Ở một nghiên cứu khác, tỷ lệ mẫu dương tính từ gà nghi nhiễm với IBV được ghi nhận từ năm 2002-2006 ở Tây Âu là 59%, trong đó nổi bật vẫn là serotype Massachusetts. Kết quả chẩn đoán cho thấy các mẫu bệnh phẩm nghi mắc bệnh IB cho kết quả dương tính với IB, sản phẩm thu được có kích thước 403 bps, hoàn toàn đúng với kích thước đã công bố (Feng et al., 2012). Kết quả thể hiện ở hình 3.5 cho thấy, các mẫu dương tính thể hiện sản phẩm PCR thu được đều có kích thước 403 bps ở các giếng số 1,2, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 14, 15, 17 và 18.
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
5.1. KẾT LUẬN
Từ những kết quả nghiên cứu đã được trình bày ở trên, chúng tôi rút ra một số kết luận sau:
1. Tỷ lệ mắc và tỷ lệ tử vong ở gà đẻ do bệnh IB theo phương thức chăn nuôi công nghiệp cao hơn so với chăn nuôi thả đồi. Trong đó: tỷ lệ gà mắc IB theo phương thức chăn nuôi công nghiệp và thả đồi tương ứng là 15,46% và 10,40%; tỷ lệ tử vong do bệnh IB là 14,72% và 9,71% tương ứng với phương thức chăn nuôi công nghiệp và chăn nuôi thả đồi.
2. Gà đẻ mắc bệnh IB tỷ lệ cao nhất vào các tháng 10-12 và 1-3 trong năm. Gà đẻ mắc IB ở hầu hết các lứa tuổi của gà nhưng gà từ 19-23 tuần tuổi có tỷ lệ mắc và tỷ lệ chết cao nhất.
3. Tỷ lệ mẫu dương tính với cặp mồi đặc hiệu của IBV được xác định bằng phản ứng RT-PCR trung bình là 41,30% (60/145 mẫu).
4. Một số đặc điểm triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh IB gồm gồm: sốt, ủ rũ và ăn kém; hô hấp khó khăn; sưng đầu; viêm kết mạc; báng nước xoang bụng và tiêu chảy phân nhiều nước.
5. Một số đặc điểm bệnh lý đại thể và vi thể quan sát được của gà mắc bệnh IB gồm phổ biến là thận sưng, tiếp đến là các bệnh tích ghi nhận trên đường hô hấp như xuất huyết khí quản, phổi tụ huyết hoặc xuất huyết và viêm túi khí và viêm xoang mũi. Phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập trong các phế nang, thấm nước phù ở hạ niêm mạc khí quản, xuất huyết kẽ thận và tế bào ống thận thoái hóa không bào là các bệnh tích vi thể phổ biến quan sát được ở gà mắc bệnh IB.
5.2. ĐỀ NGHỊ
Trong những năm gần đây, tình hình chăn nuôi gà đẻ ngày càng phát triển trên cả nước nói chung và đặc biệt ở địa bàn nghiên cứu nói riêng. Mặc dù đã sử dụng vacxin phòng bệnh, bệnh IB gây ra do IBV vẫn thường xuyên xảy ra và gây ra những hậu quả nghiêm trọng thể hiện qua tỷ lệ nhiễm và tỷ lệ tử vong và ảnh hưởng tới khả năng sinh sản của gà mắc bệnh. Chính vì vậy, công tác thú y và
tiêm phòng vacxin ngày càng phải được quan tâm và trú trọng hơn nữa đề phòng tránh những bệnh do virus gây ra, đặc biệt là bệnh IB. Cần có những nghiên cứu chuyên sâu hơn về bệnh IB cũng như IBV trên gà đẻ. Nghiên cứu chế tạo vacxin phòng bệnh từ những chủng virus gây bệnh trên thực địa sẽ cho hiệu quả phòng bệnh cao hơn các loại vacxin nhập ngoại.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt:
1. Bùi Trần Anh Đào (1999). Kiểm soát sự cảm nhiễm virus gây bệnh Newcastle, Gumboro và viêm phế quản truyền nhiễm trên gà thịt. Hiệu quả phòng bệnh và hiệu quả kinh tế của chương trình vaccin phòng 3 bệnh trên tại thành phố Hồ Chí Minh. Luận văn thạc sĩ, Đại học nông lâm TPHCM.
2. Nguyễn Bá Hiên và Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2013). Bệnh truyền nhiễm của động vật nuôi và biện pháp khống chế, NXB Nông nghiệp, tr-379.
3. Võ Thị Trà An (2012). Phân lập, định serotype virus viêm phế quản truyền nhiễm từ gà thịt. Tạp chí Khoa học và Kỹ thuật Thú y, tập 19, số 3.
4. Trần Thanh Vân (1996). Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của các biến chủng gây bệnh viêm phế quản truyền nhiễm trên tỉ lệ chết và sản xuất trứng ở đàn gà bố mẹ giống thịt Hubbard High – Yield. Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Nông lâm TPHCM
Tiếng Anh:
5. Ambali, A.G., Jones, R.C., (1990). Early pathogenesis in chicks of infection with an enterotropic strain of infectious bronchitis virus. Avian Dis 34, 809-817. 6. Beaudette, F. R., and Hudson, C. D (1936). Cultivation of the virus of infectious
bronchitis J. Am. Vet. Med. Assoc 90:51-58.
7. Broadfoot, D. I., Pomeroy, B.S. and Smith, W.M. (1956). Effects of infectious bronchitis in baby chicks. Poultry Science 35: 757-762.
8. Callison, S.A., Jackwood, M.W., Hilt, D.A., (2001). Molecular characterization of infectious bronchitis virus isolates foreign to the United States and comparison with United States isolates. Avian Dis 45, 492-499.
9. Casais, R., Dove, B., Cavanagh, D., Britton, P., (2003). Recombinant avian infectious bronchitis virus expressing a heterologous spike gene demonstrates that the spike protein is a determinant of cell tropism. J Virol 77, 9084-9089.
10. Casler, J.G., Cook, J.R., 1999. Cognitive performance in space and analogous environments. Int J Cogn Ergon 3, 351 -372.
11. Cavanagh, D., Naqi, S.A., (2003). Infectious bronchitis. Iowa State University Press, Iowa.
12. Cavanagh, D. Coronavirus avian infectious bronchitis virus. Vet. Res. 38:281- 297. 2007.
13. Coria, M.R (1969). Stabilizing Effect of Magnesium Sulfate on Avian Infectious Bronchitis Virus Propagated in Chicken Embryo Kidney Cells
14. Cook, J.K.A (1984). The classification of new serotypes of infectious bronchitis virus isolated from poultry flocks in Britain between 1981 and 1983. Avian Pathol., 13, 733–741.
15. Crinion, R. A. P., Ball, R.A. and Hofstad, M. S. (1971). Abnormalities in laying chickens following exposure to infectious bronchitis virus at one day old. Avian Diseases 15: 42-48.
16. Cumming, R.B. (1963). Infectious avian nephrosis (uraemia) in Australia. Australian Veterinary Journal 39: 145-147.
17. Darbyshire, J.H., Cook, J.K.A & Peter, R.W (1978). Growth comparisons of avian infectious bronchitis virus strains in organ cultures of chicken tissues. Arch. Virol., 56, 317–325.
18. Da Silva Martins, N. R., Mockett, A. P. A., Barrett, A. D. T., and Cook, J. K. A (1991). IgM responses in chicken serum to live and inactivated infectious bronchitis virus vaccines. Avian Dis. 35:470-475.
19. Gillette, K. G. (1973). Plaque formation by infectious bronchitis virus in chicken embryo kidney cell cultures. Avian Diseases, 1 7: 370-378.
20. Guo, X., A. J. M. Rosa, D. G. Chen, and X. Wang. Molecular mechanisms of primary and secondary mucosal immunity using avian infectious bronchitis virus as a model system. Vet. Immunol. Immunopathol. 121:332-343. 2008.
21. Gonzalez, J.M., Gomez-Puertas, P., Cavanagh, D., Gorbalenya, A.E. & Enjuanes, L. (2003). A comparative sequence analysis to revise the current taxonomy of the family Coronaviridae. Arch Virol 148(11), 2207-35.
22. Hogue, B. & Machamer, C. (2008). Coronavirus structural proteins and virus assembly. In: S. Perlman, et al. (Eds.) Nidoviruses. Washington, D.C.: ASM Press. pp 179-200.
23. Jordan, F. T. W. and Nassar, T.J. (1973). The survival of infectious bronchitis (IB) virus in water. Avian Pathology, 2: 91-101.
24. Jungherr, E. L., T. W. Chomiak, and R. E. Luginbuhl (1956). Immunologic differences in strains of infectious bronchitis virus. In: Proc. 60th Ann. Meet. U.S. Livestk. Sanit. Ass. pp 203-209.
25. Jahantigh M, Salari S, and Hedayati M (2013). Detection of infectious bronchitis virus serotypes by reverse transcription polymerase chain reaction in broiler chickens. Springerplus 2 (1): 36.
26. Julian, R.J. and Willis, N.G. (1969). The nephrosis-nephritis syndrome in chickens caused by Holte strain of infectious bronchitis virus. Canadian Veterinary Journal, 10: 18-2
27. Lai, M.M., (1987). Molecular biology of coronavirus 1986. Adv Exp Med Biol 218, 7-13.
28. Loomis, L. N., Cunningham, C. H., Gray, M. L. and Thorp. F (1950). Pathology of the chicken embryo infected with infectious bronchitis virus. Am. J. Vet. Res. 11:245-251.
29. Mo, M., Huang, B., Wei, P., Wei, T., Chen, Q., Wang, X., Li, M. & Fan, W. (2012). Complete genome sequences of two chinese virulent avian coronavirus infectious bronchitis virus variants. J Virol 86(19), 10903-4.
30. Otsuki K and Tsubokura M (1981). Plaque formation by avian infectious bronchitis virus in primary chick embryo fibroblast cells in the presence of trypsin. Arch Virol. 70(4):315-20.
31. Raj, G. D., and Jones, R. C. (1997). Infectious bronchitis virus: immunopathogenesis of infection in the chicken. Avian Pathol. 26:677-706. 32. Riddell, C. (1987). Avian Histopathology. Kennett Square, PA: American
33. van Roeckel, H., Bullis, K. L., Flint, O. S and Clarke, M. K (1942). Poultry disease control service Massachusetts Agricultural Experiment Station, MA. Annual Report. Bulletin. 388:99-103.
34. Sevoian, M. and Levine, P. P. (1957). Effects of infectious bronchitis on the reproductive tracts, egg production, and egg quality of laying chickens. Avian Diseases 1: 136-164.
35. Siller, W.G. (1981). Renal pathology of the fowl-A review. Avian Pathology, 10, 187-262.
36. Sjaak de Wit, J.J., Cook, J.K. & van der Heijden, H.M. (2011). Infectious bronchitis virus variants: a review of the history, current situation and control measures. Avian Pathol 40(3), 223-35.
37. Yachida, S ., Aoyama, A., Takahashi N , Iritani Y., Katagiri, K. (1979). Effects on biological properties of embryo‐adapted beaudette strain of infectious bronchitis virus of passage through chick embryo trachea organ culture. Avian Pathology, 8: 313-324.
38. You, J.H., Reed, M.L. & Hiscox, J.A. (2007). Trafficking motifs in the SARScoronavirus nucleocapsid protein. Biochem Biophys Res Commun 358(4), 1015-20.
39. de Wit, J.J. (2000). Detection of infectious bronchitis virus. Avian Pathol 29(2), 71 -93.