Nguồn: Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia Giống vi khuẩn: E.coli;
Thạch máu
Giống nhỏ: BHI, TPB
Giống sản xuất: BHI; TPB
Lên men sục khí: TPB
Vô hoạt bằng formol 0,5%
Trộn KN E. coli + keo phèn 20%
Ra chai, dán nhãn Thành phẩm
Kiểm tra thuần khiết Kiểm tra thuần khiết
Đếm số và kiểm tra thuần khiết Kiểm tra vô trùng
Kiểm tra thuần khiết
Đối với mỗi lô vaccine: Chọn 10 chuột nhắt trắng khỏe mạnh, chia làm 2 lô, mỗi lô 5 con. Theo dõi cả 2 lô chuột thí nghiệm trong vòng 7 ngày. Đánh giá kết quả: vaccine an toàn 100% khi tất cả 15 chuột ở lô thí nghiệm và lô đối chứng sau thời gian theo dõi 7 ngày chuột sống khỏe mạnh, không con nào có biểu hiện phản ứng bất thường sau khi tiêm.
b. Kiểm tra an toàn vaccine trên lợn
Đối với mỗi lô vaccine: Dùng 5 lợn sau cai sữa, khoẻ mạnh. Mỗi lợn tiêm 4 ml vaccine (2 liều vaccine), tiêm dưới da sau hốc tai. Theo dõi lợn 7 ngày sau khi tiêm vaccine.
Kết quả đánh giá: Vaccine an toàn 100% khi tất cả lợn được tiêm vaccine đều sống khỏe mạnh, không con nào có biểu hiện phản ứng bất thường sau khi tiêm.
* Kiểm tra hiệu lực bảo hộ của vaccine bằng phương pháp trọng tài
Để đánh giá hiệu lực của vaccine trên lợn, chúng tôi đã tiến hành thí nghiệm như sau:
+ Lô thí nghiệm gồm 15 lợn con 21 ngày tuổi thuộc 3 đàn khác nhau được tiêm vaccine E. coli với liều 1 ml/con vào dưới da gốc tai. Theo dõi các phản ứng cục bộ và toàn thân.
+ Lô đối chứng gồm 5 lợn 21 ngày tuổi không được tiêm vaccine.
Các lợn được nuôi trong các ô chuồng có điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng giống nhau. Sau 21 ngày, tiến hành công cường độc bằng hỗn hợp các chủng vi khuẩn đã dùng sản xuất vaccine. Theo dõi trong 10 ngày.
* Kiểm tra hiệu lực bảo hộ của vaccine trên chuột nhắt trắng.
Phương pháp thay thế (dùng chuột): mỗi lô vaccine chọn 10 chuột khoẻ, mỗi con tiêm 0,2 ml vaccine vào dưới da. Sau 21 ngày, chuột tiêm miễn dịch cùng với 5 chuột đối chứng đem thử thách với chủng cường độc với liều 10 LD50 cho 1 chuột. Toàn bộ chuột được theo dõi 10 ngày. Phải có 70-90% số chuột được bảo hộ. Trong khi đó các chuột đối chứng sau khi công cường độc đều chết 100% trong vòng 24- 48 giờ và đều phân lập được vi khuẩn E. coli từ máu tim các chuột chết.
3.6. PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 3.6.1. Phân tích một số chỉ tiêu theo dõi
Số liệu thu được trong các thí nghiệm được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học với sự hỗ trợ của phần mềm Excel…
- Tỷ lệ % khỏi bệnh = (Số con sống : Tổng số con điều trị) x 100 - Tỷ lệ % bảo hộ = (Số con sống : Tổng số con thí nghiệm) 100 - Công thức tính LD50 theo Reed & Muench (1938):
LgLD50 =LgA+(a-50)×d
a-b
Trong đó:
A: Nồng độ pha loãng gây chết sát trên 50% chuột. a: Tỷ lệ chuột chết do liều A gây ra (%).
b: Tỷ lệ chuột chết do liều B gây ra (%) (cộng dồn) với B là nồng độ pha loãng gây chết sát dưới 50% chuột.
d: Lg của nồng độ pha loãng.
- Số lượng vi khuẩn trong 1ml canh khuẩn được tính theo công thức dưới đây với đơn vị tính là CFU: X = a x N x 10
Trong đó:
X: Số lượng tế bào vi khuẩn trung bình trong 1ml canh khuẩn N: Hệ số pha loãng.
a: Số khuẩn lạc trung bình có trong 0,1ml canh khuẩn pha loãng. 3.6.2. Xử lý số liệu
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.KẾT QUẢ KIỂM ĐỊNH GIỐNG E. COLI SẢN XUẤT VACCINE
Chúng tôi đã tiến hành xác định được sự ổn định các đặc tính sinh vật hoá học, cấu trúc kháng nguyên và các yếu tố độc lực của các chủng vi khuẩn
E. coli đã được lựa chọn. Các chủng vi khuẩn có độc lực cao, cấu trúc kháng nguyên ổn định và mang một số yếu tố gây bệnh để sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn.
4.1.1. Kết quả kiểm tra một số đặc tính nuôi cấy
Kết quả kiểm tra một số đặc tính nuôi cấy của các chủng E. coli được lựa chọn để chế tạo vaccine phòng bệnh Phù đầu cho lợn đã bảo quản ở thạch lỏng glycerin và đông khô được thể hiện tại bảng 4.1.
Bảng 4.1 . Một số đặc tính nuôi cấy của các chủng vi khuẩn E. coli
Chỉ tiêu kiểm tra Số
chủng Đặc điểm
Kết quả (+)
Tỷ lệ (%)
Nước thịt thường 6 Mọc tốt, đục đều, lắng cặn
màu tro nhạt ở dưới đáy. 6 100,0
Thạch máu 6 Khuẩn lạc to, ướt lồi, viền
không gọn, màu xám nhạt. 6 100,0
Thạch thường 6
Khuẩn lạc tròn ướt, bóng láng không trong suốt, màu tro trắng nhạt hơi lồi.
6 100,0
Thạch macConkey 6
Khuẩn lạc có màu hồng cánh sen, tròn nhỏ, hơi lồi, không nhầy, rìa gọn, không làm chuyển màu môi trường.
6 100,0
Thạch simmon citrat 6 Khuẩn lạc không màu trên
nền xanh lục 6 100,0
Thạch endo 6 Khuẩn lạc màu đỏ 6 100,0
Thạch SS 6 Khuẩn lạc có màu đỏ 6 100,0