CHƯƠNG 3 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2 Phương pháp nghiên cứu
3.2.1 Thu và xử lý mẫu
Hoa Sài đất ba thùy: được thu hái ở Thành phố Cần Thơ vào tháng 10/2021. Sau khi thu mẫu, loại bỏ những hoa bị sâu, hư hỏng. Tiến hành phơi khơ dưới bóng râm đến khi khô.
Kén tằm: kén tằm giống Bombyx mori M45 được thu thập từ xã Phương Định, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định.
3.2.2 Xác định độ ẩm dược liệu
Ðộ ẩm là lượng nước chứa trong 100 g dược liệu. Dược liệu tươi thường chứa một lượng nước rất lớn: lá chứa khoảng 60-80% nước, thân và cành chứa khoảng 40-50% nước. Khơng có một dược liệu nào đạt độ khơ tuyệt đối (độ ẩm 0%), nhưng đối với mỗi dược liệu đều được quy định một độ ẩm an tồn.
Ngun tắc: Dùng sức nóng làm bay hơi hết lượng nước trong dược liệu khô. Cân trọng lượng trước và sau khi sấy khơ, từ đó tính ra được phần trăm nước có trong dược liệu khơ [157].
Thí nghiệm được tiến hành theo Dược điển Việt Nam V: Sử dụng phương pháp sấy để xác định độ ẩm của dược liệu: dược liệu là lá, rễ, thân cần được chia nhỏ trước khi xác định độ ẩm. Dược liệu là nụ hoa, hạt nhỏ có thể tiến hành xác định trực tiếp mà không cần chia nhỏ.
Độ ẩm của bột dược liệu được xác định bằng máy đo độ ẩm (Kern Dab).
3.2.3 Điều chế cao chiết
Cao chiết được điều chế bằng phương pháp ngâm dầm kết hợp siêu âm. Khi cho dung môi chiết vào, dung môi sẽ thấm qua màng tế bào của cây, các chất trong tế bào sẽ hòa tan vào trong dung mơi. Khi đó sẽ xuất hiện một q trình thẩm thấu giữa chất trong thành tế bào và dung mơi bên ngồi. Q trình thẩm thấu này kết thúc khi có sự cân bằng nồng độ hợp chất của dung dịch bên trong và bên ngoài thành tế bào. Dưới tác dụng của siêu âm, dung môi ở các hốc nhỏ của dược liệu bị sủi bọt, đẩy các hợp chất ra khỏi dược liệu, chất tan vào trong dung môi.
Do phương pháp này dễ thực hiện, sử dụng thiết bị đơn giản, dễ dàng thao tác với một lượng vừa phải mẫu cây nên được sử dụng trong nghiên cứu này. Quy tắc chiết là chiết nhiều lần, mỗi lần với một ít lượng dung mơi [33]. Quy trình điều chế các cao Sài đất ba thùy từ các dung môi khác nhau được thể hiện trong Hình 3.1.
Cách tiến hành:
Hoa Sài đất ba thùy khô (112 g) loại bỏ phần hư, phơi khơ trong điều kiện nhiệt độ phịng thí nghiệm. Sau đó xay nhỏ được 96 g bột mịn. Đề tài đã sử dụng cách chiết ngâm dầm kết hợp siêu âm để điều chế cao tổng. Bột nguyên liệu hoa Sài đất ba thùy được ngâm dầm với các dung môi với tỷ lệ khối lượng bột dược liệu:dung môi là 1:60 (w/v). Sau mỗi 24 giờ đem đánh siêu âm ở 50℃ và thu dịch chiết, lặp lại 3 lần với tỷ lệ dược liệu:dung môi tương ứng, dịch chiết được lọc qua giấy lọc, thu gom dịch chiết 3 lần đem cô quay thu hồi dung môi. Sau khi cô quay ta được dịch chiết cao tổng. Cơng thức tính hiệu suất điều chế cao (3.1) từ bột nguyên liệu ban đầu:
𝐻(%) = mcao
mbột khô𝑥100