CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.2 Quá trình phân lập các chất từ dịch chiết n-hexane cây Trâu cổ
3.2.1 Khảo sát thành phần định tính và lựa chọn dung môi
+ Triển khai sắc ký lớp mỏng: Lấy một lượng nhỏ cặn dịch chiết n- Hexane của lá cây Trâu cổ hòa tan trong hỗn hợp CH2Cl2 - n-Hexane. Pha hệ dung môi (2 mL) rồi đổ vào bình triển khai sắc ký. Sử dụng bản mỏng với kích thước 15 mm x 40 mm. Đưa chất lên lớp mỏng bằng ống mao quản, cách đáy bản mỏng 6 mm và cách đều hai bên mép bản, để dung môi bay hết rồi đưa vào bình triển khai. Khi dung môi chạy lên cách mép trên của bản khoảng 3 mm thì lấy bản mỏng ra, sấy để dung môi bay hết.
+ Lập sắc ký đồ: Tiến hành lập sắc ký đồ trong các điều kiện sau: Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng = 254 nm và 366 nm. Phun thuốc thử Ce(SO4)2, sấy bản mỏng, quan sát dưới ánh sáng thường.
Mỗi vết tách ra trên bản mỏng có một giá trị Rf khác nhau. Dựa trên sắc ký đồ, phân tích sơ bộ thành phần chiết để biết: Số lượng chất có trong cặn chiết, đánh giá sơ bộ khả năng phân tách chất của dung môi trên silica gel.
+ Kết quả sắc ký đồ:
Hệ các dung môi được triển khai gồm:
(I): CH2Cl2/n-Hexane (1:4) (II): CH2Cl2/n-Hexane (1:9)
(III): CH2Cl2/n-Hexane (1:3) (IV):CH2Cl2/n-Hexane (1:1)
(V):CH2Cl2/n-Hexane (3:1) (VI): EtOAc /n-Hexane (1:9)
(VII): EtOAc /n-Hexane (1:3) (VIII): EtOAc /CH2Cl2 (1:9) Các bản mỏng sau khi được triển khai sắc ký, hiện màu bằng đèn tử ngoại sau đó phun thuốc thử Ce(SO4)2 thu được kết quả tương ứng như sau (Hình 3.10):
(I) (II) (III) (IV)
(V) (VI) (VII) (VIII)
Kết quả so sánh cho thấy các chất được khai triển tốt nhất ở hệ dung môi
(IV),(V),(VI),(VII) và (VIII). Các vệt chất đều hiện màu ở đèn tử ngoại với bước sóng =366 nm (một số vệt chất hiện màu ở cả bước sóng 254nm) và thuốc thử Ce(SO4)2.
Ce(SO4)2 UV,= 366 nm
Hình 3.11. TLC cặn n-hexane lá cây Trâu cổ với hệ dung môi (V)
Các giá trị Rf của các vệt chất với hệ dung môi CH2Cl2 /Hexane 75% được trình bày trong bảng 3.1
Bảng 3.1. Giá trị Rf và màu sắc các vệt chất trên bản mỏng
STT Rf Ce(SO4)2
UV
254 nm 366 nm
1 0,100 Xanh đen Nâu Hồng
2 0,325 Xanh đen Nâu (-)
3 0,613 Xanh đen (-) Trắng xanh
4 0,844 Xanh đen Nâu (-)
5 0,969 Xanh đen Nâu Vàng
(-): không hiện
Do đó, lựa chọn hệ dung môi CH2Cl2 /Hexane với độ phân cực tăng dần làm dung môi rửa giải cho cột tổng cặn n-Hexane của cây Trâu cổ.