CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận 4.1. Kết luận
1. Đã xây dựng đƣợc quy trình nhân giống in vitro cây Địa hoàng. Vật liệu vào mẫu ban đầu là củ Địa hoàng lựa chọn ở những cây mẹ ƣu việt, sinh trƣởng phát triển tốt, sạch bệnh.
Môi trƣờng nuôi cấy khởi động là MS + 30 g/l Sucrose + 7 g/l Agar cho số mẫu nảy chồi chiếm 56% và số chồi trung bình/mẫu là 5,02 chồi.
Môi trƣờng nhân nhanh là: MS + 1,0 g/l PVP + 1,0 mg/l BAP + 0,2 mg/l IAA + 30 g/l Sucrose + 7 g/l Agar cho hệ số nhân chồi 4,74 lần, chiều cao chồi trung bình là 5,12 cm.
Môi trƣờng ra rễ là 1/2MS + 1,0 g/l PVP + 0,5 mg/l IAA + 30 g/l Sucrose + 7 g/l Agar cho tỷ lệ cây ra rễ là 100%, số rễ trung bình/cây là 26,78 rễ, chiều dài rễ 1,76 cm và chiều cao cây là 4,06 cm.
Giá thể ra cây thích hợp là: Phân hữu cơ vi sinh : Đá perlite = 9:1 cho tỷ lệ cây sống đạt 88%, số lá trung bình/cây là 7 lá, chiều cao cây là 8,26 cm và độ dài lá là 3,32 cm, cây khỏe mạnh, cứng cáp.
2. Cây Địa hoàng nuôi cấy mô có đặc điểm về hình thái thân, lá, củ và khả năng sinh trƣởng tƣơng đƣơng với cây địa hoàng trồng từ củ.
4.2. Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu các khâu trong công tác huấn luyện cây con để đạt tỷ lệ cây sống cao hơn. Tiếp tục đánh giá tính thích ứng của cây nuôi cấy mô trên điều kiện canh tác thực địa ở các vụ tiếp theo.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Phạm Văn Hiển (1994), Nghiên cứu một số biện pháp nâng cao chất lƣợng và số lƣợng giống cây Địa hoàng (Rehmannia glutinosa Libosch.) ở dồng bằng và trung du Bắc bộ. Luận án Phó tiến sĩ, Trường Đại học Nông nghiệp I.
2. Mai Đăng Hùng (2015), Nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây thuốc Địa hoàng (Rehmannia glutinosa L.). Khóa luận tốt nghiệp, Học Viện Khoa học Việt Nam.
3. Nguyễn Trần Hy và cs (2001), Viện Dược liệu - Công trình nghiên cứu khoa học 1987 - 2000, NXB Khoa học và kỹ thuật, 223:227.
4. Vũ Tuấn Minh (2009), Cây dược liệu, Trƣờng Đại học Nông Lâm Huế. 5. Nguyễn Phƣơng Quý, Phạm Thị Kim Hạnh, Lê Quỳnh Mai, Lê Khả
Tƣờng (2017), Nhân giống vô tính giống Gừng trâu (Zingiber officinale
(Willd.) Roscoe) bằng nuôi cấy cắt lát tế bào in vitro, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 33, Số 2S 127-133. 6. Nguyễn Xuân Tụ, Phạm Văn Hiển, Nguyễn Văn Đàn (1997), Thăm dò
khả năng áp dụng phƣơng pháp nuôi cấy thực vật in vitro vào công tác dƣợc liệu, Tạp chí Dược học, số 2: 9-13.
7. Kha Nữ Tú Uyên, Nguyễn Thị Hồng Tú, Vƣơng Thị Hồng Loan, Nguyễn Thị Điệp, Phạm Đình Dũng (2015), Khảo sát khả năng phát sinh protocorm like bodies trực tiếp từ phát hoa cây lan renanthera sp., Tạp chí khoa học ĐHSP TP HCM, số 12 (78): 161-169.
8. Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (2007), Sinh lý học thực vật, Nxb. Giáo dục, Hà Nội.
Tiếng Anh
(2013), Influence of Medium and Auxin Concentration on In vitro
Rooting of Rehmannia glutinosa L., Life Science Journal ;10(3): 685-688. 10.Aye Aye Thwe, Hyun Ho Kim, Haeng Hoon Kim and Sang Un Park (2015), Enhancement of in Vitro Rooting By Gelling Agents and Activated Charcoal in Rehmannia Glutinosa L., OnLine Journal of Biological Sciences, 15 (2): 49.52.
11.Bajai YPS (1988), “Biotecnology in Agriculture and Forestry 4, Medicinal and Aromatic plants I”, Springer-Verlag Berlin Heidelberg: 501-511.
12.Ewelina P, Izabela GK (2014), “Micropopagation of Rehmannia glutinosa Libosch.: production of phenolics and flavonoids and evaluation of antioxidant activity”, Acta Physiol Plant, 36: 1693-1702.
13.Ewelina P, Lukasz K, Przemyslaw S, Halina W (2015), Shoot organogenesis, molecular analysis and secondary metabolite production of micropropagated Rehmannia glutinosa Libosch., Plant Cell Tiss Organ Cult, 120:539–549.
14.George E.F. and P.D. Sherrington (1984), Plant Propagation by Tissue Culture. Exegetics Ltd., Eversley, England, pp. 324-366.
15.Mao WY, Li XG, Zhu BM (1983), “Studies on the meristern culture of
Rehmannia glutinosa”,Chin Bull Bot, 1: 44-46.
16.Miller C (1961), Kinetin related compounds in plant growth,
Annu.Rev.Plant physiol, 12: 395-408.
17.Murashige T (1974), Plant propagation through tissue cultures, Annu. Rev. Plant Physiol., 25:135-166.
18.Paek KY, Yu KJ, Park SI, Sung NS, Park CH (1995a, Field performance test of micropropagated Rehmannia glutinosa and virus detection. Acta Hort. (ISHS) 390: 121-126.
of Rehmannia glutinosa as medicinal plant by shoot tip and root segment culture. Acta Hort. (ISHS) 390: 113-120.
20.Park CH, Seong NS, Kim SK, Paek KY (1999), Characteristics in tissue cultured plants of Chinese foxglove (Rehmannia glutinosa Libosch.). Kor. J. Plant Tissue Cult. 26: 205-210
21.Sang Un Park, Yong Kyoung Kim and Sook Young Lee (2009), Improved invitro plant regeneration and micro propagation of Rehmannia glutinosa L., Journal of Medicinal Plants Research, Vol. 3(1): 031-034. 22.Shoyama Y, Nagano M, Nishioka I (1983), Clonal multiplication of R.
glutinosa. Planta Med, 48:124–128
23.Xu and Davey (1983), Shoot Regeneration from Mesophyll Protoplasts and Leaf Explants of Rehmannia glutinosa, Plant Cell Rep, 2: 55-57. 24.Xue J.P. et al, (2002), Microtuber induction in vitro from Rehmannia
glutinosa. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 27(11):824-7.
25.Xue T, Guo L, Xue JP, Song YX, Lu HD, Zhang AM et al (2012), “Study of the system of tuberous root induction in vitro from Rehmannia glutinosa. African Journal of Biotechnology”, 11(28): 7202-7207.
PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần môi trƣờng cơ bản TT Thành phần (Nồng độ mg/l) MS Knudson VW 1 NH4NO3 1650 - - 2 (NH4)2SO4 - 500 500 3 MgSO4.7H2O 370,6 250 122 4 KNO3 1900 - 525 5 KCl - 250 - 6 CaCl2. 2H2O 440 - - 7 Ca(NO3)2.4H2O - 1000 - 8 Ca3(PO4)2 - - 200 9 KH2PO4 170 250 250 10 NaH2PO4 85 - - 11 ZnSO4.7H2O 8,6 0,331 - 12 H3BO3 6,2 0,056 - 13 MnSO4.2H2O 22,3 7,5 5,68 14 Na2MoO4.2H2O 0,25 - - 15 CuSO4.2H2O 0,025 0,0624 - 16 CoCl2.2H2O 0,025 - - 17 KI 0,83 - - 18 FeSO4.7H2O 27,8 2,5 - 19 Fe2(C4H4O6)3 - - 23,13 20 Na2EDTA 37,26 - - 21 Nicotinic acid 0,5 - -
22 Pyridoxine (B6) 0,5 - -
23 Thiamin-HCl (B1) 0,1 - -
24 Glycine 2 - -
Phụ lục 2: Phân tích phƣơng sai thí nghiệm vào mẫu
BALANCED ANOVA FOR VARIATE SMNC FILE VAO MAU 25/ 7/19 14:24
--- :PAGE 1 VARIATE V003 SMNC
LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 2 414.889 207.444 373.40 0.000 2 * RESIDUAL 6 3.33333 .555555 --- * TOTAL (CORRECTED) 8 418.222 52.2778 --- BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE VAO MAU 25/ 7/19 14:24
--- :PAGE 2 VARIATE V004 SC
LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 2 2.74042 1.37021 99.53 0.000 2 * RESIDUAL 6 .826000E-01 .137667E-01
--- * TOTAL (CORRECTED) 8 2.82302 .352878
--- BALANCED ANOVA FOR VARIATE SML FILE VAO MAU 25/ 7/19 14:24
--- :PAGE 3 VARIATE V005 SML LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 2 414.889 207.444 373.40 0.000 2 * RESIDUAL 6 3.33333 .555555 --- * TOTAL (CORRECTED) 8 418.222 52.2778 --- TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VAO MAU 25/ 7/19 14:24
--- :PAGE 4 MEANS FOR EFFECT CT$
--- CT$ NOS SMNC SC SMHong
CT1 3 28.0000 5.01667 22.0000 CT2 3 15.3333 4.11667 34.6667 CT3 3 12.3333 3.69333 37.6667
SE(N= 3) 0.430331 0.677413E-01 0.430331 5%LSD 6DF 1.48858 0.234328 1.48858
--- ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VAO MAU 25/ 7/19 14:24
--- :PAGE 5
F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - 1
VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 9) --- SD/MEAN | | NO. BASED ON BASED ON % | | OBS. TOTAL SS RESID SS | | SMNC 9 18.556 7.2303 0.74536 4.0 0.0000 SC 9 4.2756 0.59404 0.11733 2.7 0.0001 SMHong 9 31.444 7.2303 0.74536 2.4 0.0000
Phụ lục 3. Phân tích phƣơng sai thí nghiệm nhân chồi 1
BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE NHANCH 1 26/ 9/19 15:22
--- :PAGE 1 VARIATE V003 HSNC
LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 8 2.51573 .314467 202.64 0.000 2 * RESIDUAL 18 .279335E-01 .155186E-02
--- * TOTAL (CORRECTED) 26 2.54367 .978333E-01
--- BALANCED ANOVA FOR VARIATE CAOC FILE NHANCH 1 26/ 9/19 15:22
--- :PAGE 2 VARIATE V004 CAOC
LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 8 4.78270 .597837 161.09 0.000 2 * RESIDUAL 18 .667999E-01 .371111E-02
--- * TOTAL (CORRECTED) 26 4.84950 .186519
---