Quan sát những mẫu hạt bị nhiễm nấm Fusarium spp. dưới kính hiển vi soi nổi cho thấy nấm phát triển trên hạt như sau:
Trên bề mặt hạt phủ một lớp nấm trắng như bông gòn bao phủ. Cành bào tử dạng sợi, ngăn vách. Bào tử nhỏ hình oval có 0-1 vách ngăn. Hình thành dạng chuỗi trên cành đơn. Bào tử lớn dài và mảnh hình trăng khuyết hoặc thẳng, có vách dày, có 3-5 vách ngăn.
d)Đặc điểm hình thái một số loài nấm khác hại hạt
Hình 4.20. Đặc điểm hình thái nấm Curvularia spp. trên hạt giống đậu tương
e) Đặc điểm hình thái một số loài nấm phổ biến trên các hạt giống ngô, đậu
tương, lạc thu thập vùng Hà Nội và vùng phụ cận năm 2019
Bảng 4.10. Kết quả xác định các loài nấm trên mẫu hại hạt giống ngô ở vùng Hà Nội và phụ cận
STT Tên khoa học Đặc điểm bào tử Đặc điểm cấu trúc của nấm
1 Aspergillus flavus
Bào tử phân sinh tròn hoặc hơi tròn, sần sùi, màu xanh vàng. Bề mặt cuống hơi xù xì giống gai.
Trên bề mặt hạt phủ một lớp màu xanh đến xanh vàng. Các cụm bào tử tròn hình đầu mầu trắng khi còn non và có màu kem đến xanh lá cây khi trưởng thành.
2 Aspergillus
niger Bào tử phân sinh hình cầu khi trưởng thành, có gai, màu nâu tối đến đen.
Trên bề mặt hạt phủ một lớp màu đen hoặc nâu. Các đầu cành của bào tử phân sinh hình cầu đến hình tỏa xòe dạng cột đường.
3 Fusarium
spp.
Cành bào tử dạng sợi, ngăn vách. Bào tử nhỏ hình Oval có 0- 1 vách ngăn. Hình thành dạng chuỗi trên cành đơn. Bào tử lớn dài và mảnh hình trăng khuyết hoặc thẳng, có vách dày, có 3-5 vách ngăn.
Trên bề mặt hạt phủ một lớp nấm trắng như bông gòn bao phủ.
4 Penicillium
spp.
Sợi nấm có vách ngăn. Bào tử phân sinh hình cầu hoặc gần cầu, hình trứng elip đôi khi hình trụ. Khi riêng rẽ các bào tử trần không màu hoặc màu nhạt. Khi tụ lại thành đám thường có màu lục, vàng lục, lục xanh, xám.
Nấm mọc từng phần hoặc toàn bộ bề mặt hạt, tản màu xanh lá cây hoặc xanh xám.
5 Bipolaris
spp.
Bào tử phân sinh nhẵn, cong, có vách ngăn, màu nâu nhạt đến nâu xám
Trên bề mặt hạt phủ một lớp màu trắng xốp rồi xám nâu đen
6 Curvularia
spp. Cành bào tử phân nhánh, có vách ngăn. Bào tử hình gù vai trâu, có 4 vách ngăn, thường chụm thành từng đám 2-5 bào tử ở đầu cành.
Trên bề mặt nấm có màu nâu đen đến đen, xốp.
4.3. KHẢO SÁT HIỆU LỰC ỨC CHẾ CỦA NẤM ĐỐI KHÁNG ĐỖI VỚI MỘT SỐ LOÀI NẤM HẠI HẠT GIỐNG TRÊN MÔI TRƯỜNG PGA
Sử dụng nấm Trichoderma viride trên môi trường PGA được cấy trên 4 công thức thí nghiệm.
Các isolate nấm gây bệnh trên một số loại hạt:
- Isolate nấm Fusarium spp. được phân lập và nuôi cấy từ mẫu đậu tương DT12 thu thập tại Phú Thị, kí hiệu là Fu-DT12-PT
- Isolate nấm Aspergillus niger được phân lập và nuôi cấy từ mẫu đậu tương DT12 thu thập tại Phú Thị, kí hiệu là A. niger-DT12-PT
- Isolate nấm Aspergillus niger được phân lập và nuôi cấy từ mẫu lạc L14 thu thập tại Phú Thị, kí hiệu là A. niger-L14-PT
- Isolate nấm Aspergillus flavus được phân lập và nuôi cấy từ mẫu đậu tương DT12 thu thập tại Phú Thị, kí hiệu là A. flavus-DT12-PT
- Isolate nấm Aspergillus flavus được phân lập và nuôi cấy từ mẫu lạc L14 thu thập tại Phú Thị; kí hiệu là A. flavus-L14-PT.
4.3.1. Khảo sát hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm Fu-DT12-PT trên môi trường PGA
Kết quả nghiên cứu hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride
đến sự phát triển của nấm Fu-DT12-PT thể hiện ở Bảng 4.11, Hình 4.21 và Đồ thị 4.1.
Công thức 1: nấm Fu-DT12-PT phát triển khá nhanh sau 4 ngày nuôi cấy, đã biểu hiện được hoàn toàn về màu sắc và sợi nấm trên đĩa Petri.
Công thức 2: nấm Trichoderma viride được cấy trước 24 giờ đã cho thấy quá trình ức chế được thể hiện rõ nhất. Nấm Trichoderma viride bao phủ toàn bộ bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-G với 59.29% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 51.34%. không thấy sự phát triển của nấm Fusarium spp..
Đối với công thức 3: cả 2 nấm được cấy đồng thời, sau 24 giờ 2 nấm vẫn phát triển. Tuy nhiên, sau đó nấm Fu-DT12-PT phát triển chậm lại do tốc độ
phát triển nhanh của nấm Trichoderma viride chiếm hết bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 42.60% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 37.14%.
Bảng 4.11. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate
nấm Fu-DT12-PT trên môi trường PGA Isolate nấm
Trichoderma viride
Công thức
Hiệu lực ức chế (%) sau thí nghiệm (ngày)
1 2 3 4 TV-G CT2 41.08 48.83 59.29 CT3 14.63 28.60 34.88 38.07 CT4 19.66 29.09 36.29 TV-1 CT2 42.85 48.22 58.02 CT3 17.12 26.78 34.10 40.18 CT4 21.42 28.24 36.59 TV-2 CT2 38.19 47.61 58.26 CT3 12.45 27.28 34.54 42.60 CT4 18.17 28.57 39.99 TV-3 CT2 37.75 44.60 51.34 CT3 14.31 20.77 32.53 37.14 CT4 11.22 26.53 28.32
Ghi chú: + CT1: Đối chứng: cấy isolate nấm Fu-DT12-PT;
+ CT2: Cấy nấm T. viride trước, sau 24 giờ cấy isolate nấm Fu-DT12-PT; + CT3: Cấy đồng thời isolate nấm Fu-DT12-PT và nấm T. viride;
+ CT4: Cấy Fu-DT12-PT trước, sau 24 giờ cấy T. Viride.
Hình 4.21. Khả năng đối kháng của nấm Trichoderma viride với isolate của nấm
Đồ thị 4.1. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm
Fu-DT12-PT trên môi trường PGA
Đối với công thức 4: nấm Fu-DT12-PT được cấy trước 24 giờ, vì thế trong hai ngày nấm hại vẫn phát triển bình thường. Đến ngày thứ 3, Fu-DT12-PT nấm phát triển chậm lại do sự ức chế của nấm Trichoderma viride, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 39.99% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 28.32%.
4.3.2. Khảo sát hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. niger-DT12-PT trên môi trường PGA
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nấm Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. niger-DT12-PT được trình bày ở Bảng 4.12, Hình 4.22 và Đồ thị 4.2:
Công thức 1: nấm A. niger-DT12-PT phát triển khá nhanh sau 4 ngày nuôi cấy, biểu hiện được hoàn toàn về màu sắc và sợi nấm trên đĩa Petri.
Công thức 2: nấm Trichoderma viride được cấy trước 24 giờ đã cho thấy quá trình ức chế được thể hiện rõ nhất. Nấm Trichoderma viride bao phủ toàn bộ bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-3 với 59.85% và thấp nhất là của isolate nấm TV-1 với 47.38%. Không thấy sự phát triển nhiều của nấm A. niger-DT12-PT.
Công thức 3: cả 2 nấm được cấy đồng thời, sau 24 giờ 2 nấm vẫn phát triển. Tuy nhiên, đến ngày thứ 3 nấm A. niger-DT12-PT phát triển chậm lại do tốc độ phát triển nhanh của nấm Trichoderma viride chiếm hết bề mặt môi trường, hiệu
lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-g với 45.32% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 36.88%.
Bảng 4.12. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate
nấm A. niger-DT12-PT trên môi trường PGA Isolate nấm
Trichoderma viride
Công thức
Hiệu lực ức chế (%) sau thí nghiệm (ngày)
1 2 3 4 TV-G CT2 39.99 50.01 52.35 CT3 15.38 23.22 41.84 45.32 CT4 10.91 34.71 40.64 TV-1 CT2 43.84 45.34 47.38 CT3 17.14 22.79 37.22 40.37 CT4 13.98 27.90 29.81 TV-2 CT2 46.56 49.98 50.00 CT3 14.31 24.10 36.34 40.52 CT4 13.76 29.53 33.62 TV-3 CT2 46.78 49.46 59.85 CT3 17.14 24.19 32.97 36.88 CT4 14.51 15.36 29.50 Ghi chú:
+ CT1: Đối chứng: cấy isolate nấm A. niger-DT12-PT
+ CT2: Cấy nấm T. viride trước, sau 24 giờ cấy isolate nấm A. niger-DT12-PT + CT3: Cấy đồng thời isolate nấm A. niger-DT12-PT và nấm T. viride
+ CT4: Cấy A. niger-DT12-PT trước, sau 24 giờ cấy T. viride
Hình 4.22. Khả năng đối kháng của nấm Trichoderma viride với
Đồ thị 4.2. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm
A. niger-DT12-PT trên môi trường PGA
Công thức 4: nấm A. niger-DT12-PT được cấy trước 24 giờ, vì thế trong hai ngày nấm hại vẫn phát triển bình thường. Đến ngày thứ 3, nấm A. niger-
DT12-PT phát triển chậm lại do sự ức chế của nấm Trichoderma viride, hiệu lực
đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-G với 40.64% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 29.50%.
4.3.3. Khảo sát hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với
nấm A. niger-L14-PT trên môi trường PGA
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. niger-L14-PT được trình bày ở Bảng 4.13, Hình 4.23 và Đồ thị 4.3.
Công thức 1: nấm A. niger-L14-PT phát triển khá nhanh sau 4 ngày nuôi cấy, biểu hiện được hoàn toàn về màu sắc và sợi nấm trên đĩa Petri.
Công thức 2: nấm Trichoderma viride được cấy trước 24 giờ đã cho thấy quá trình ức chế được thể hiện rõ nhất. Nấm Trichoderma viride bao phủ toàn bộ bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-3 với 59.57% và thấp nhất là của isolate nấm TV-G với 55.15%. Không thấy sự phát triển nhiều của nấm A. niger-L14-PT.
Công thức 3: cả 2 nấm được cấy đồng thời, sau 24 giờ 2 nấm vẫn phát triển. Tuy nhiên, đến ngày thứ 3 nấm A. niger-L14-PT phát triển chậm lại do tốc độ phát triển nhanh của nấm Trichoderma viride chiếm hết bề mặt môi trường, hiệu
lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 53.38% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 46.11%.
Bảng 4.13. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate
nấm A. niger-L14-PT trên môi trường PGA Isolate nấm
Trichoderma viride
Công thức
Hiệu lực ức chế (%) sau thí nghiệm (ngày)
1 2 3 4 TV-G CT2 39.99 53.10 55.15 CT3 22.48 23.22 45.91 50.74 CT4 10.91 31.85 44.85 TV-1 CT2 43.64 51.52 56.85 CT3 9.37 21.82 44.45 48.67 CT4 9.06 25.24 44.52 TV-2 CT2 46.44 25.24 58.10 CT3 9.10 21.42 51.00 53.38 CT4 10.71 45.00 45.94 TV-3 CT2 55.09 58.71 59.57 CT3 11.74 23.17 38.54 46.11 CT4 17.39 32.09 41.13 Ghi chú:
+ CT1: Đối chứng: cấy isolate nấm A. niger-L14-PT
+ CT2: Cấy nấm T. viride trước, sau 24 giờ cấy isolate nấm A. niger-L14-PT
+ CT3: Cấy đồng thời isolate nấm A.niger-L14-PT nấm T. viride
+ CT4: Cấy A.niger-L14-PT trước, sau 24 giờ cấy T. viride
Hình 4.23. Khả năng đối kháng của nấm Trichoderma viride với nấm A. niger-L14-
Đồ thị 4.3. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride
với isolate nấm A. niger-L14-PT trên môi trường PGA
Công thức 4: nấm A. niger-L14-PT được cấy trước 24 giờ, vì thế trong hai ngày nấm hại vẫn phát triển bình thường. Đến ngày thứ 3, nấm A. niger-L14-PT
phát triển chậm lại do sự ức chế của nấm Trichoderma viride, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 45.94% và thấp nhất là của isolate nấm TV-3 với 41.13%.
4.3.4. Khảo sát hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. flavus-DT12-PT trên môi trường PGA
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. flavus-DT12-PT được trình bày ở Bảng 4.14, Hình 4.24 và Đồ thị 4.4.
Công thức 1: nấm A. flavus-DT12-PT phát triển khá nhanh sau 4 ngày nuôi cấy, biểu hiện được hoàn toàn về màu sắc và sợi nấm trên đĩa Petri.
Công thức 2: nấm Trichoderma viride được cấy trước 24 giờ đã cho thấy quá trình ức chế được thể hiện rõ nhất. Nấm Trichoderma viride bao phủ toàn bộ bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-3 với 58.99% và thấp nhất là của isolate nấm TV-G với 45.46%. Không thấy sự phát triển nhiều của nấm A. flavus-DT12-PT.
Bảng 4.14. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm A. flavus-DT12-PT trên môi trường PGA
Isolate nấm
Trichoderma viride
Công thức
Hiệu lực ức chế (%) sau thí nghiệm (ngày)
1 2 3 4 TV-G CT2 41.54 43.37 45.46 CT3 8.83 22.64 34.95 39.11 CT4 11.32 25.30 32.70 TV-1 CT2 43.64 45.58 52.60 CT3 13.92 23.62 26.59 43.96 CT4 12.71 16.45 33.62 TV-2 CT2 46.05 51.10 58.82 CT3 11.48 25.38 32.23 45.15 CT4 17.48 25.57 37.89 TV-3 CT2 48.28 51.59 58.99 CT3 8.57 24.51 30.53 43.17 CT4 18.08 20.02 33.96 Ghi chú:
+ CT1: Đối chứng: cấy isolate nấm A. flavus-DT12-PT
+ CT2: Cấy nấm T. viride trước, sau 24 giờ cấy isolate nấm A. flavus-DT12-PT + CT3: Cấy đồng thời isolate nấm A. flavus-DT12-PT nấm T. viride
+ CT4: Cấy A. flavus-DT12-PT trước, sau 24 giờ cấy T. Viride
Hình 4.24. Khả năng đối kháng của nấm Trichoderma viride với nấm A. flavus-
Đồ thị 4.4. Hiệu lực ức chế của các đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm A. flavus-DT12-PT trên môi trường PGA
Công thức 3: cả 2 nấm được cấy đồng thời, sau 24 giờ 2 nấm vẫn phát triển. Tuy nhiên, đến ngày thứ 3 nấm A. flavus-DT12-PT phát triển chậm lại do tốc độ phát triển nhanh của nấm Trichoderma viride chiếm hết bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 45.15% và thấp nhất là của isolate nấm TV-1 với 39.11%..
Công thức 4: nấm A. flavus-DT12-PT được cấy trước 24 giờ, vì thế trong hai ngày nấm hại vẫn phát triển bình thường. Đến ngày thứ 3, nấm A. flavus-
DT12-PT phát triển chậm lại do sự ức chế của nấm Trichoderma viride, hiệu lực
đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-2 với 37.89% và thấp nhất là của isolate nấm TV-G với 32.70%.
4.3.5 Khảo sát hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm A. flavus-L14-PT trên môi trường PGA
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nấm đối kháng Trichoderma viride đến sự phát triển của nấm A. flavus-L14-PT được trình bày ở Bảng 4.15, Hình 4.26 và Đồ thị 4.5.
Bảng 4.15. Hiệu lực ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride với isolate nấm A. flavus-L14-PT trên môi trường PGA
Isolate nấm
Trichoderma viride Công thức
Hiệu lực ức chế (%) sau thí nghiệm (ngày)
1 2 3 4 TV-G CT2 CT3 8.57 41.53 24.56 43.22 34.55 46.35 40.00 CT4 13.24 16.04 30.92 TV-1 CT2 53.21 54.02 57.73 CT3 17.14 24.19 31.03 46.34 CT4 9.67 20.69 37.39 TV-2 CT2 52.33 53.28 56.90 CT3 16.67 29.26 34.79 43.90 CT4 20.03 31.53 38.22 TV-3 CT2 48.21 55.23 57.54 CT3 14.65 25.01 40.00 41.01 CT4 10.71 24.77 28.05 Ghi chú:
+ CT1: Đối chứng: cấy isolate nấm A. flavus-L14-PT
+ CT2: Cấy nấm T. viride trước, sau 24 giờ cấy isolate nấm A. flavus-L14-PT
+ CT3: Cấy đồng thời isolate nấm A. flavus-L14-PT nấm T. viride
+ CT4: Cấy A. flavus-L14-PT trước, sau 24 giờ cấy T. Viride
Công thức 1: nấm A. flavus-L14-PT phát triển khá nhanh sau 4 ngày nuôi cấy, biểu hiện được hoàn toàn về màu sắc và sợi nấm trên đĩa Petri.
Công thức 2: nấm Trichoderma viride được cấy trước 24 giờ đã cho thấy quá trình ức chế được thể hiện rõ nhất. Nấm Trichoderma viride bao phủ toàn bộ bề mặt môi trường, hiệu lực đối kháng cao nhất của isolate nấm TV-1 với 57.73% và thấp nhất là của isolate nấm TV-G với 46.35%. Không thấy sự phát triển nhiều của nấm A. flavus-L14-PT.
Công thức 3: cả 2 nấm được cấy đồng thời cùng nhau, vì thế sau 24 giờ 2