CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
2.3. Đối tƣợng, vật liệu và địa điểm nghiên cứu
2.3.1. Đối tượng
Đối tƣợng nghiên cứu là 19 cây bố mẹ của 3 loài bạch đàn (Bạch đàn urô - E. urophylla, Bạch đàn caman - E. camaldulensis, Bạch đàn liễu - E. exserta) với các tính trạng đối lập về sinh trƣởng (nhanh – chậm). Tiêu chí xác định sinh trƣởng nhanh và chậm theo Tiêu chuẩn ngành 04 TCN 147 – 2006, cụ thể cây trội đƣợc chọn ở rừng trồng phải đồng tuổi ở giai đoạn thành thành thục công nghệ hoặc gần thành thục công nghệ, có sinh trƣởng trung bình trở lên, có độ vƣợt so trị số trung bình của đám rừng (30-40 cây chung quanh) ít nhất 1,2Sx (độ lệch chuẩn) về đƣờng kính và chiều cao, hoặc 25% về đƣờng kính và 10% về chiều cao.
Cây sinh trƣởng chậm đƣợc chọn là những cây sinh trƣởng kém trong quần thể thuần loài và đồng tuổi cùng hiện trƣờng chọn cây trội, nhƣng có khả năng ra hoa, kết quả.
Bảng 2.1. Danh mục các cây bạch đàn bố mẹ đƣợc sử dụng trong nghiên cứu
TT Tên cây đƣợc lựa chọn Địa điểm D1.3 (cm) Độ vƣợt (%) Hvn (m) Độ vƣợt (%) Nhận xét sinh trƣởng
1 E.urophylla 1 (U1) Bắc Giang 40,6 36,7 27,5 25,0 Nhanh
2 E.urophylla 2 (U2) Bắc Giang 41,1 38,4 27,0 22,7 Nhanh
3 E. urophylla 3 (U3) Phú Thọ 39,8 48,5 25,0 19,0 Nhanh
4 E. urophylla 4 (U4) Bắc Giang 17,9 -39,7 18,5 -15,9 Chậm 5 E. urophylla 5 (U5) Bắc Giang 17,2 -42,1 18,0 -18,2 Chậm 6 E. urophylla 8 (U8) Phú Thọ 17,5 -34,7 17,5 -16,7 Chậm 7 E. urophylla 29 (U29) Hà Nội 38,7 35,3 26,5 22,3 Nhanh
8 E. camaldulensis 1 (C1) Bắc Giang 36,7 42,2 24,0 20,0 Nhanh
9 E. camaldulensis 3 (C3) Vĩnh Phúc 34,2 40,2 25,0 28,2 Nhanh 10 E. camaldulensis 4 (C4) Vĩnh Phúc 14,8 -39,3 17,0 -12,8 Chậm 11 E. camaldulensis 5 (C5) Bắc Giang 15,7 -39,1 17,0 -15,0 Chậm 12 E. camaldulensis 7 (C7) Vĩnh Phúc 31,1 27,5 24,0 23,1 Nhanh 13 E. camaldulensis 13 (C13) Vĩnh Phúc 16,6 -32,0 17,5 -10,3 Chậm 14 E. exserta 1 BV (E1BV) Ba Vì - Hà Nội 40,3 38,7 25,5 27,3 Nhanh
15 E. exserta 1 (E1) Vĩnh Phúc 24,1 31,7 19,5 14,7 Nhanh
16 E. exserta 2 (E2) Vĩnh Phúc 11,4 -37,7 13,0 -23,5 Chậm 17 E. exserta 5 (E5) Vĩnh Phúc 24,9 36,1 20,5 17,6 Nhanh
18 E. exserta 6 (E6) Vĩnh Phúc 13,6 -25,7 14,0 -17,6 Chậm 19 E. exserta 7 (E7) Vĩnh Phúc 25,1 37,2 21,0 20,6 Nhanh
Hình 2.1. Cây bố mẹ U4 (D1.3=17,9 cm) Hình 2.2. Cây bố mẹ U3 (D1.3=39,8cm) (U4 - sinh trƣởng chậm) (U3 – sinh trƣởng nhanh)
2.3.2. Các cặp mồi SSR sử dụng trong nghiên cứu
- Nghiên cứu này sử dụng 34 cặp mồi đƣợc tổng hợp sƣu tập từ các bài báo có liên quan và một số cặp mồi đƣợc chọn từ dữ liệu các cặp mồi EMBRA trên Gen Bank (Phụ lục 1).
2.3.3. Địa điểm nghiên cứu
- Các nội dung nghiên cứu trong phòng thí nghiệm đƣợc tiến hành tại Viện nghiên cứu Giống và Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp
- Khảo nghiệm các tổ hợp lai tại Trƣờng Sơn – Hòa Bình
2.3.4. Hóa chất
- Hóa chất tách chiết ADN tổng số: đệm CTAB 4% (Thành phần đệm CTAB 4% (100ml): 10ml 1M Tris pH 8: 28ml 5M NaCl, 4ml 0,5M EDTA
pH8, 2g CTAB, 1ml 14M BME, 67ml dH2O), isopropanol, cồn tuyệt đối, cồn
70%, Chloroform:Isoamin alcohol (24:1), Rnase, nƣớc dezion, nƣớc cất, nito lỏng và một số hóa chất khác.
- Hóa chất chạy điện di ADN trên gel agarose: dung dịch đệm TAE 50X , dung dịch đệm TAE 1X, Agarose 1% ; Ethidium bromide (EtBr) 0,5µg/ml.
Đệm kiểm tra mẫu ADN (Loading buffer: Bromophenol Blue, Xylene Cyanol FF, glycerol)
- Hóa chất chạy PCR: Taq Polymerase, Buffer, dNTPs.
- Các hóa chất chạy điện di trên gel Polyacrylamide 4,5%: Gel 4,5% acrylamide, TEMED, APS 10%, 10XTBE, đệm load mẫu loading dye SSR, AgNO3, Sodiumcarbonat, Sodium Thiosulfat, Formaldehyde, Formamide, Thang chuẩn Ladder ADN 100.
2.3.5. Thiết bị
Máy PCR system 9700 (Applied Biosystem, Mỹ), máy điện di gel agarose Powerpac 300 (Bio-Rad, Mỹ), máy soi ADN (Mini-transllumminatior, BioRad, Mỹ), máy chụp ảnh (Amersham Pharmacia Biotech, Thụy Điển), máy điện di, máy Vortex, máy khuấy từ, máy ly tâm, máy ổn nhiệt... và các trang thiết bị khác.