Tóm lại: Những tổ hợp lai có hình thái thân tƣơng đối đẹp là U4E1, E6U4, C4U3, C4U4, C7U4, U3E2 và U4C1, khi kết hợp với đánh giá sinh trƣởng, có thể chọn đƣợc 6 cây bố mẹ là C7, C1, C4, E1, E6, U4 xây dựng đƣợc 4 cặp lai có sinh trƣởng tốt là U4C1, C7U4, U4E1 và C4U4 là các cặp lai đều có ƣu thế lai so với cả bố và mẹ của chúng.
CHƢƠNG 4
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận
- Đề tài xác định đƣợc khoảng cách di truyền giữa 19 cây bạch đàn bố mẹ nằm trong [0,28; 3,882] và đƣợc chia thành nhiều nhánh có sự sai khác lớn, các cây trong cùng một loài tạo thành nhánh riêng biệt. Quan hệ giữa cây khác nhóm loài có ý nghĩa lớn trong chọn giống và lai giống.
- Tiến hành lai giống giữa các cây bố mẹ và thu đƣợc 61 tổ hợp lai, gồm 20 tổ hợp lai có bố mẹ cùng sinh trƣởng nhanh; 19 tổ hợp lai có mẹ sinh trƣởng nhanh, bố sinh trƣởng chậm; 13 tổ hợp có mẹ sinh trƣởng chậm, bố sinh trƣởng nhanh và 9 tổ hợp có bố mẹ cùng sinh trƣởng chậm. Tỉ lệ đậu quả của các loài khác nhau là khác nhau, nhìn chung tỷ lệ đậu quả cao nhất là loài Bạch đàn urô và Bạch đàn liễu, tùy vào từng phép lai mà có tỉ lệ đậu quả cao hay thấp.
- Tại khảo nghiệm Trƣờng Sơn – Hòa Bình, đề tài đã chọn đƣợc 4 tổ hợp lai có sinh trƣởng triển vọng là: U4C1, C7U4, U4E1 và C4U4, các tổ hợp lai này có ƣu thế lai so với bố mẹ của chúng và vƣợt từ 10-153%. Các tổ hợp lai này đều là lai giữa Bạch đàn urô với Bạch đàn caman và Bạch đàn urô với Bạch đàn liễu.
4.2. Kiến nghị
Hiện trƣờng nghiên cứu cần đƣợc tiếp tục theo dõi và bảo vệ, đây là các vật liệu rất quý cho các nghiên cứu tiếp theo về công nghệ sinh học cũng nhƣ chọn giống truyền thống.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt:
1. Lê Trần Bình, Phan Văn Chi, Nông Văn Hải, Lê Quang Huấn (2003), Áp
dụng các kỹ thuật phân tử trong nghiên cứu tài nguyên sinh vật Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội.
2. Nguyễn Việt Cƣờng (2005), Báo cáo tổng kết đề tài “ Nghiên cứu lai giống cho một số loài bạch đàn, keo, tràm và thông” giai đoạn 2001 - 2005, Hà Nội.
3. Nguyễn Việt Cƣờng, Phạm Đức Tuấn (2007), “Ứng dụng của chỉ thị phân
tử (RAPD và ADN lục lạp) trong nghiên cứu đa dạng di truyền và xây
dựng vƣờn giống cây Cóc hành”, Tạp chí Nông nghiệp và phát triển nông
thôn, số 19.
4. Nguyễn Việt Cƣờng, Phạm Đức Tuấn, Nguyễn Đức Thành (2007), “Ứng
dụng chỉ thị phân tử (RADP và ADN lục lạp) trong nghiên cứu đa dạng di truyền các cây trội và lựa chọn cặp bố mẹ để xây dựng vƣờn giống Keo tai
tƣợng (Acacia mangium)”, Tạp chí Nông nghiệp và phát triển nông thôn,
số 16, trang 56-59.
5. Nguyễn Việt Cƣờng (2010), Báo cáo tổng kết đề tài “Nghiên cứu lai giống cho một số loài bạch đàn, keo, tràm và thông” giai đoạn 2006- 2010, Hà Nội.
6. Lê Đình Khả và cs (1993), “Trồng bạch đàn ở nƣớc ta nhƣ thế nào cho có
hiệu quả”, Tạp chí lâm nghiệp, số 2, trang 9-10.
7. Lê Đình Khả (2001), Báo cáo tổng kết đề tài KHCN 08.04 “Chọn tạo giống và nhân giống cho một số loài cây trồng rừng chủ yếu” giai đoạn 1996-2000, Hà Nội.
8. Lê Đình Khả và cs (2003), Chọn tạo giống và nhân giống cho một số loài
9. Nguyễn Đức Kiên, Hà Huy Thịnh, Đỗ Hữu Sơn, Mai Trung Kiên, La Ánh Dƣơng (2009), “Sinh trƣởng của một số tổ hợp lai giữa Bạch đàn urô và Bạch đàn pellita trên một số lập địa ở miền Bắc và Bắc trung bộ”. Tạp chí Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn, số 12/2009, trang 168-172.
10.Nguyễn Hoàng Nghĩa, Trần Quốc Trọng và Nguyễn Đức Thành (2005), “Kết quả bƣớc đầu đánh giá đa dạng di truyền của ba xuất xứ Lim xanh
bằng chỉ thị RADP và ADN lục lạp”, Tạp chí Nông nghiệp và Phát triển
Nông thôn số 65, trang 80-81.
11.Nguyễn Hoàng Nghĩa (2006), Báo cáo tổng kết đề tài “Nghiên cứu chọn
giống kháng bệnh có năng suất cao cho một số loài bạch đàn và keo’’ giai đoạn 2001-2005, Hà Nội
12.Trần Hồ Quang (2010), Báo cáo tổng kết đề tài “Nghiên cứu phát triển và
ứng dụng chỉ thị phân tử ADN trong chọn giống Bạch đàn uro”, Hà Nội.
13.Nguyễn Minh Thanh (2010), Nghiên cứu cơ sở khoa học trồng thâm canh
Mây nếp (Calumus tetradactylus Hance) dưới tán rừng tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam. Luận án Tiến sĩ nông nghiệp, Trƣờng Đại học lâm nghiệp, Hà Nội.
14.Hà Huy Thịnh (2006), Báo cáo tổng kết đề tài “ Nghiên cứu chọn tạo giống có năng suất và chất lượng cao cho một số loài cây trồng rừng chủ yếu” giai đoạn 2001 -2005, Hà Nội.
15.Trần Thanh Trăng (2012), Báo cáo tổng kết đề tài “Chọn giống Bạch đàn
trắng (Eucalyptus camaldulensis) kháng bệnh đốm lá (Cryptosporiopsis eucalypti) bằng chỉ thị phân tử”, Hà Nội.
16.Vƣơng Đình Tuấn (2009), Báo cáo tổng kết đề tài “Nghiên cứu ứng dụng
chỉ thị ADN trong chọn giống Keo lá tràm (A. auriculiformis) cho vùng Nam bộ” giai đoạn 2005-2009, TP. HCM.
Tiếng Anh:
17.Agrama, H.A., George, T.L. and Salah, S.F. (2002), “Construction of Genome Map for E. camaldulensis Dehn”, Silvae Genetica 51, pp. 5-6. 18.Assis, T.F. (2000), “Production and use of Eucalyptus hybrids for
industrial purposes”, Hybrid Breeding and Genetics of Forest Trees, page 63.
19.Bala R. Thumma & Brian S. Baltunis & John C. Bell & Livinus C. Emebiri & Gavin F. Moran & Simon G. Southerton, 2010, “Quantitative trait locus (QTL) analysis of growth and vegetative propagation traits in Eucalyptus nitens full-sib families”, Tree Genetics & Genomes 6, pp. 877–889.
20.Bala Thumma, Saravanan Thavamanikumar, Jeremy Brawner and Simon
Southerton (2015), “Applying Marker-assited Selection in Eucalyptus
Scientific Cultivation and Green Development to Enhance the Sustainability of Eucalyptus Plantions”. IUFRO Eucalyptus Conference 2015.
21.Bouvet, J.M., Combes, J.G. (1997), “Expression of growth traits,
morphological traits and wood property traits ortet population of E. urophylla x E. grandis and E. urophylla x E. pellita”. IUFRO Cenference on Silviculture and Improverment of Eucalypt, 205 pp.
22.Brawner J.T., Bush D.J., Macdonel P.F., Warburton P.M., Clegg P.A., (2012), “Genetic parameter of red mahagany breeding populations grown in the tropics”, Australian Forestry 73, pp. 177-183.
23.Brondani, R..P.V., Brondani, C., Tarchini, R. and Grattapaglia. D. (1998), “Development, characterization and mapping of microsatellite markers in
24.Brondani, R.P.V., Brondani, C. and Grattapaglia, D. (2002), “Towards a genus-wide reference linkage map for Eucalyptus based exclu sively on highly informative microsatellite markers”. Genomics 267, pp.338-347. 25.Brondani, R.P.V., Williams E.R., Brondani, C. and Grattapaglia, D.
(2006), “A microsatelite-based consensus linkage map for species of Eucalyptus and a novel set of 230 microsatelite markers for the genus”,
BMC Plant Biology, pp. 6-20.
26.Brown S. M., Kresovich S. (1996), “Molecular characterization for plant
genetic resources conservation”, Genome mapping in plants, pp. 85 - 93.
27.Bundock, P.C., Hayden, M. and Vaillancourt, R.E. (2000), “Linkage maps
of Eucalyptus globulus using RAPD and Microsatellite markers”. Silvae Genetica 49, pp. 4-5.
28.Bundock, P.C, Brad M. Potts and René E. Vaillancourt, (2008),
“Detection and stability of quantitative trait loci (QTL) in Eucalyptus globules”, TREE GENETICS & GENOMES Volume, Number 1, pp. 85- 95.
29.Chew, T.K. (1980), “Grown of Eucalyptus species in perninsular
Malaysia”, Malaysian Forester, 43:1, pp. 8-15.
30.Darrow, W. K. (1983), "Provenance-type of Eucalyptus grandis and Eucalyptus saligna in South Africa: eight year results", South African Forestry Journal, (126), pp. 30-38.
31.Dow B. D., Ashley M. V., Howe H. F. (1995), “Characterization of highly
variable (GA/CT) microsatellites in the bur oak Quercus macrocarpa”,
Theor Appl Genet 91, pp. 137 - 141.
32.Eldridge. K, Davidson. J, Harwood. C, G. van Wyk, (1993). “Eucalypt Domestication and Breeding”. Oxford Science Publications 288, pp. 51. 33.Jacobs, M.R. (1981), “Eucalyptus for planting”, FAO Forestry Series
34.Kirst, M., Cordeiro, G.D., Rezende, S.P. and Grattapaglia, D. (2005),
Power of microsatellite markers for fingerprinting and parentage analysis in Eucalyptus grandis breeding populations.
35.Li Z. (1999), “DNA markers and QTL mapping in rice’, Genetic
improvement of rice for water - limited environments, IRRI, pp. 157 - 172. 36.Murugan, S. and Y. Ramasamy (2014), "Microsatellite resources of
Eucalyptus: current status and future perspectives", Botanical Studies, pp. 55- 73.
37.Ottewell, K.M., Donnellan, S.C., Moran, G.F. and Paton, D.C. (2005),
Multiplexed microsatellite markers for the genetic analysis of Eucalyptus leucoxylon (Myrtaceae) and their utility for ecological and breeding studies in other Eucalyptus species. J. Hered. 96:445-451.
38. Rao, D.V. (1984), "Provenance trials of Eucalyptus", Indian Forester, 110(1), pp. 28-34.
39.Rongwen J., Akkaya M. S., Bhagwat A. A., Lavi U., Cregan P. B. (1995),
“The use of microsatellite DNA markers for soybean genotype identification”, Theor Appl Genet 90, pp. 43-48.
40.Shen Xihuan (2000), "Hybridization of forest tree species in Chiana,
Hybird Breeding and Genetics of Forest Trees”, QFRI/CRC-SPF
Symposium Noosa, Queensland, Australia 9 - 14 April, pp. 491 - 499. 41.Steane, D.A., Vaillancourt, R.E., Russell, J., Powell, W., Marshall, D. and
Potts, B.M. (2001), “Development and characterisation of microsatellite loci in Eucalyptus globulus (Myrtaceae)”, Silvae Genet 50, pp. 89-91.
42.Turvey, N.D, (1995). “Afforestation of Imperata grasslands in Indonesia:
Results of Industrial Tree Plantation Research Trials at Teluk Sirih on Pulau Laut, Kalimantan Selatan”, ACIAR Technical Reports No. 35, pp. 43.
43.Verryn, S.D. (2000), "Eucalyptus Hybrid breeding in south Africa, Hybrid
Breeding and Genetics of Forest Trees”, QFRI/CRC-SPF Symposium
Noosa, Queensland, Australia 14 April, pp. 191 - 199.
44.Yasodha, R., Sumathi, R., Chezhian, P., Kavitha, S., Ghosh, M. (2008) “Eucalyptus microsatellites mined in silico: survey and evaluation”,
Journal of Genetics 87, pp. 21-25.
45. https://en.wikipedia.org/wiki/Eucalyptus
Phụ lục 1. Danh mục 34 cặp mồi sử dụng trong phân tích đa dạng di truyền các cây bố mẹ bạch đàn
Cặp mồi Trình tự lặp lại Trình tự mồi 5’- 3’
Nhiệ độ bắt cặp Kích thƣớc Nhóm liên kết
EMBRA2 (AG)15 CgTgACACCAggACATTAC 56 121 11
ACAAATgCAAATTCAAATgA
EMBRA9 (AGA)3(AG)28 AgTgAgAgAgATATTCgCgT 56 94 5
CCAATACAATCATCAATCCA
EMBRA12 (AG)22 AggATTTgTggggCAAgT 56 98 1
gTTCCCCATTTTCATgTCC
EMBRA39 (AG)9(CA)11 gCATTCgTACTCATTTTCAA 54 146 11
gCATCgAgAgTggATTAgTT
EMBRA47 (AG)24 AgAACCCTCTATAAAACCCC 56 106 8
gggCTAgACATgATggAg
EMBRA51 (AG)20 gATgCATTCCTTTTTTTCC 58 115 6
CATTCTCTTgCATCTggAC
EMBRA53 (AG)17GT(AG)5 ATTAgCTTTTCTgTAACCCg 60 130 8
gAATggACAAgCTCTgATg
EMBRA54 (AG)17 TgTATgAggTACATCCgg 50 144 5
AAAgTTATCAgCgAgAgTTC
EMBRA58 (AG)20 CACCAACTggTACTATgAggAT 56 143 9
TTggCTTAgggTAgAACACT EMBRA116 (TC)21 CTCCTACTACTggTTCTATCACT 56 104 8 TCCTgCTCTTTCTCTCTCTA EMBRA124 (TC)34 TgTggACATgATAgATgAAgT 58 90 10 AATTATTTCgATAgAAACggA EMBRA126 (TCCTC)4TCC...(CT)18 gTAgTCCCTgACgCAAAC 58 99 2 AgTACgATATTTTCgCgAgT
EMBRA135 (AG)15AAT...(AG)10 CTgACTTggCCggTACATA 54 116 5
AAATCTAgTCggTCTCAAAgC
EMBRA138 (TC)26CC(TC)3 gTTATgTTTggTTgAAAggAg 60 115 10
AgACACCATgTCCCCAgg
EMBRA147 (AG)n CTCgTCTTgCACgCTCTCTT 58 273 4
gAgAgTgTgTTCATgCggCT
EMBRA152 (AC)24 TCTCCTCTggCTCTTCTA 56 122 5
gCATgTACACTAACgACg EMBRA153 (CT)24 CACACTTCTAgTCCATCC 56 215 10 ggAgTATAgAACgATTgTg EMBRA157 (CT)19 TggATggTCAACggCgTA 60 247 1,6 CATgCATTggCCATTggT EMBRA165 (TC)n ggTTgTCggTTCACTCTTgT 60 144 10 ATAggATTgCgTCATgAAgC
EMBRA168 (GA)12 ggAgTgAAgACggTAAAT 55 82 5
ATCTCACTTTTCTCTCgC
EMBRA186 (GA)27 ggAAggCTTTgAgATAAC 56 186 4
ACCgAgACCAgTTgAgAg
EMBRA188 (GA)9CAGG(GA)20 CTCATgCATAgCTgCTACTC 56 193 6
gCAgCTCAgTgTACATTgg
EMBRA191 (CT)25 gAgCgAgATCTAATCTTC 56 180 5
ggATgCAgTTCTAgAgAg
EMBRA194 (CT)17A(CA)14 CgTgCTTTTgAggCTCT 56 143 3
gATTgAggATgAgTggTC EMBRA202 (CT)22 gCCTTCCACTTCTTCAggTC 57 254 5 gTTATACTgCggTgAAggCT EMBRA206 (TC)21 CAgCAACgTCTACCTCTTCC 57 348 8 TgATCCAgTTCCgACTAgTg EMBRA208 (TC)25 CTCgTgTggTTATgTgAACT 56 147 9 gCTTgTCTACTATgCACATgA
EMBRA209 (GA)21 AggAAggCggATTgATgAgg 57 182 8
gAACggACggAggTgAgCTA
EMBRA214 (GA)8AA(GA)11 gAACAgCTACTCgTCgATTC 57 316 1
gTAACCAggCTTggACgAT
EMBRA225 (CT)12 gATATTCCTCggTCTCTCTg 58 225 2
TCCTCTTgTTgTCgCCTC
EMBRA229 (GA)20 AgAACgTTAACTCCTAAggT 56 181 5
CTgCAATACATATCTTCTCC
EMBRA232 (GA)30 gTACTTAATCTgTggCAATC 56 173 6
gATCCTTgCATTATCgAC EMBRA237 (CT)21 gTCATTgTTgCgATCACTgC 50 222 3,7 ACgTgACTTggTTgATCTgC EMBRA240 (TC)21 CAgCAACgTCTACCTCTTCC 56 344 8 CCAgTTCCgACTAgTgTTCC
Phụ lục 2. Kết quả chạy SSR của 34 cặp mồi sử dụng trong phân tích đa dạng di truyền các cây bố mẹ bạch đàn
Sample File pop. EMBRA186 EMBRA194 EMBRA147 EMBRA214
C1 C1 0 0 0 0 0 0 230 230 C3 C3 180 194 140 164 190 204 0 0 C4 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 C5 0 0 140 164 190 204 0 0 C7 C7 175 185 164 164 190 190 0 0 C13 C13 0 0 164 164 0 0 0 0 E1 E1 190 190 0 0 0 0 110 110 E1BV E1BV 175 195 135 135 160 160 0 0 E2 E2 0 0 150 175 0 0 0 0 E5 E5 0 0 164 164 170 190 0 0 E6 E6 190 196 0 0 190 204 0 0 E7 E7 0 0 175 175 0 0 0 0 U1 U1 177 177 0 0 175 180 0 0 U2 U2 177 177 0 0 190 204 0 0 U3 U3 177 177 0 0 190 204 0 0 U4 U4 177 177 0 0 190 204 0 0 U5 U5 177 177 140 140 190 204 0 0 U8 U8 177 183 140 140 0 0 250 260 U29BV U29BV 160 170 85 85 0 0 0 0
Sample File pop. EMBRA51 EMBRA135 EMBRA126 EMBRA153
C1 C1 0 0 0 0 0 0 0 0 C3 C3 0 0 0 0 0 0 0 0 C4 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 C5 0 0 0 0 0 0 0 0 C7 C7 0 0 0 0 0 0 0 0 C13 C13 0 0 0 0 160 180 0 0 E1 E1 0 0 0 0 0 0 0 0 E1BV E1BV 0 0 140 140 120 130 220 220 E2 E2 0 0 0 0 140 140 0 0 E5 E5 0 0 0 0 0 0 240 260 E6 E6 0 0 0 0 0 0 180 180 E7 E7 0 0 140 140 145 145 215 250 U1 U1 0 0 130 130 140 145 220 240 U2 U2 0 0 130 140 140 145 220 240 U3 U3 0 0 130 140 140 145 220 240 U4 U4 0 0 130 140 140 145 220 240 U5 U5 0 0 130 140 140 145 220 240 U8 U8 0 0 0 0 150 150 215 250 U29BV U29BV 105 110 130 140 130 145 155 155
Sample File pop. EMBRA208 EMBRA237 EMBRA2 EMBRA138 C1 C1 0 0 0 0 0 0 120 120 C3 C3 0 0 0 0 125 125 0 0 C4 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 C5 0 0 0 0 125 125 0 0 C7 C7 0 0 0 0 0 0 0 0 C13 C13 0 0 0 0 125 125 0 0 E1 E1 0 0 0 0 0 0 0 0 E1BV E1BV 0 0 112 112 190 190 175 205 E2 E2 0 0 0 0 125 125 0 0 E5 E5 0 0 0 0 125 125 175 205 E6 E6 120 120 0 0 0 0 0 0 E7 E7 120 120 0 0 130 130 0 0 U1 U1 0 0 0 0 120 130 200 200 U2 U2 100 120 0 0 120 130 0 0 U3 U3 0 0 0 0 120 130 200 205 U4 U4 115 115 0 0 120 130 200 205 U5 U5 0 0 0 0 120 130 100 205 U8 U8 100 120 0 0 125 125 175 175 U29BV U29BV 130 135 105 105 100 100 0 0
Sample File pop. EMBRA209 EMBRA168 EMBRA225 EMBRA232
C1 C1 150 150 0 0 0 0 140 150 C3 C3 0 0 0 0 180 190 140 150 C4 C4 125 150 0 0 0 0 0 0 C5 C5 0 0 0 0 180 190 140 150 C7 C7 120 135 0 0 0 0 140 150 C13 C13 0 0 0 0 0 0 120 150 E1 E1 120 135 0 0 160 160 130 150 E1BV E1BV 130 130 125 125 0 0 140 145 E2 E2 0 0 90 90 0 0 140 140 E5 E5 130 130 0 0 160 160 0 0 E6 E6 130 145 0 0 0 0 140 140 E7 E7 155 155 90 90 0 0 0 0 U1 U1 0 0 90 105 164 170 120 140 U2 U2 130 150 90 105 164 164 0 0 U3 U3 130 150 90 105 0 0 120 140 U4 U4 130 150 0 0 0 0 120 140 U5 U5 0 0 0 0 0 0 120 140 U8 U8 0 0 90 90 170 175 0 0 U29BV U29BV 160 160 70 90 0 0 140 170
Sample File pop. EMBRA12 EMBRA188 EMBRA53 EMBRA58 C1 C1 0 0 240 240 150 150 145 160 C3 C3 0 0 0 0 150 150 175 180 C4 C4 0 0 0 0 150 150 175 180 C5 C5 0 0 0 0 150 150 0 0 C7 C7 0 0 0 0 0 0 175 180 C13 C13 0 0 0 0 140 160 0 0 E1 E1 0 0 0 0 150 155 165 190 E1BV E1BV 135 160 155 170 160 160 145 145 E2 E2 0 0 170 180 155 160 165 175 E5 E5 0 0 160 160 155 155 175 175 E6 E6 0 0 0 0 150 150 0 0 E7 E7 0 0 0 0 150 150 155 175 U1 U1 0 0 110 110 180 180 0 0 U2 U2 0 0 110 110 0 0 160 160 U3 U3 0 0 0 0 180 185 0 0 U4 U4 0 0 0 0 180 185 160 160 U5 U5 0 0 0 0 185 185 160 160 U8 U8 0 0 0 0 145 160 0 0 U29BV U29BV 155 160 170 190 163 170 0 0
Sample File pop. EMBRA191 EMBRA206 EMBRA124 EMBRA116
C1 C1 0 0 100 110 0 0 130 150 C3 C3 0 0 0 0 180 180 130 160 C4 C4 0 0 90 110 0 0 0 0 C5 C5 165 165 0 0 170 180 130 160 C7 C7 165 165 0 0 0 0 150 150 C13 C13 170 170 0 0 150 170 150 160 E1 E1 170 175 0 0 0 0 130 150 E1BV E1BV 190 200 0 0 145 145 150 150 E2 E2 0 0 95 105 0 0 130 150 E5 E5 0 0 0 0 0 0 130 135 E6 E6 0 0 0 0 0 0 130 140 E7 E7 0 0 0 0 0 0 150 160 U1 U1 0 0 0 0 0 0 0 0 U2 U2 0 0 0 0 0 0 0 0 U3 U3 0 0 0 0 0 0 130 160 U4 U4 0 0 0 0 0 0 130 160 U5 U5 0 0 0 0 0 0 130 160