* Khảo nghiệm giống
Khảo nghiệm giống đƣợc thiết kế theo William, E. R & Matheson, A. C., (1994), và tiêu chuẩn ngành 04TCN 147-2006 về khảo nghiệm giống. Tất cả các thí nghiệm đều đƣợc bố trí theo khối hàng ngẫu nhiên đầy đủ, với mỗi công thức là 32 cây/4 lặp, mật độ 1.660 cây/ha, trồng cây cách cây 2m hàng cách hàng 3m, kích thƣớc hố đào (50x50x50)cm. Phân bón mỗi hố 3kg phân chuồng hoai + 200g lân nung chảy + 200g NPK.
2.4.3. Phương pháp xử lý số liệu
* Phương pháp thu thập và xử lý số liệu sinh trưởng
-Các chỉ tiêu sinh trƣởng đƣờng kính ngang ngực (D1.3), chiều cao vút ngọn (Hvn), Chiều cao dƣới cành (Hdc) đƣợc đo đếm định kỳ hằng năm 1 lần theo các phƣơng pháp thông dụng trong điều tra rừng (giáo trình Điều tra rừng - Vũ Tiến Hinh, Phạm Ngọc Giao, 1997; quy phạm xây dựng rừng giống và vƣờn giống QPN 15-93).
-Thu thập số liệu về chỉ tiêu chất lƣợng cây nhƣ: độ thẳng thân, độ nhỏ
cành, phát triển ngọn, màu sắc lá… theo phƣơng pháp mục trắc và cho điểm (Lê Đình Khả, Dƣơng Mộng Hùng, 2003):
+ Độ thẳng thân (Dtt) đƣợc cho điểm theo 5 cấp (1 - 5 điểm): Cây rất cong:1 điểm
Cây cong: 2 điểm Cây hơi cong: 3 điểm Cây thẳng: 4 điểm Cây rất thẳng: 5 điểm
+ Độ nhỏ cành (Dnc) đƣợc cho điểm theo 5 cấp (1 - 5 điểm): Cành rất lớn ( > 1/3 đƣờng kính gốc cành): 1 điểm
Cành lớn (1/4 - 1/3 đƣờng kính gốc cành): 2 điểm
Cành nhỏ (1/9 - 1/7 đƣờng kính gốc cành): 4 điểm Cành rất nhỏ (< 1/10 đƣờng kính gốc cành): 5 điểm
+ Phát triển ngọn (Ptn) đƣợc cho điểm theo 5 cấp (1 - 5 điểm):
Cây rất kém phát triển (ngọn bị teo hoặc mất ngọn chính, tán lá rất thƣa hoặc lá úa vàng): 1 điểm
Cây kém phát triển (ngọn chính thiếu sức sống, tán lá thƣa và xanh nhạt): 2 điểm
Cây phát triển trung bình (ngọn chính phát triển bình thƣờng, tán lá vừa phải): 3 điểm
Cây phát triển khá (ngọn chính phát triển khá, tán lá phát triển lá xanh): 4 điểm
Cây rất phát triển (ngọn chính rất phát triển, cây khoẻ mạnh, có sức sống, tán lá cân đối, lá xanh có ánh vàng): 5 điểm
+ Màu sắc lá ( Msl) đƣợc cho điểm theo năm cấp (1 - 5 điểm): Màu lá rất vàng : 1 điểm
Màu lá vàng: 2 điểm Màu lá hơi vàng: 3 điểm Màu lá xanh: 4 điểm
Màu lá xanh có ánh vàng: 5 điểm
+ Độ rậm tán lá (Drt) cho điểm theo năm cấp (1 - 5 điểm): Tán lá rất thƣa và không đầy đủ: 1 điểm
Tán lá hơi thƣa; ít đầy đủ: 2 điểm
Tán lá phát triển trung bình và tƣơng đối đầy đủ: 3 điểm Tán lá tốt tƣơng đối đồng đều: 4 điểm
Tán lá phát triển tốt và đầy đủ: 5 điểm
+ Thể tích thân cây cả vỏ (V) đƣợc tính theo công thức 1: D21.3
V = --- .Hvn.f (1) 4
Trong đó f là hệ số hình dạng, đƣợc ƣớc tính = 0,5. + Tính tỷ lệ đậu quả bằng công thức (2):
∑ số quả đậu x 100
Tỉ lệ đậu quả = (%) (2) ∑ số hoa thụ phấn
Các số liệu thu thập đƣợc xử lý bằng chƣơng trình DATAPLUS, GENSTAT (Williams & Matheson, 1994) và phần mềm EXCEL 5.0 (Nguyễn Hải Tuất và Ngô Kim Khôi, 1996). Các chƣơng trình này đang đƣợc dùng phổ biến để phân tích và xử lý các số liệu trong nghiên cứu sinh học và cải thiện giống cây rừng.
* Nguyên tắc xác định các phân đoạn
Sau khi điện di sẽ đƣợc xác định vị trí và kích thƣớc từng băng ADN trên bản gel. Số liệu đƣợc lập thành bảng theo vị trí và kích thƣớc các băng ADN so với kích thƣớc các băng ADN marker 100bp trên bản gel để thuận tiện cho việc theo dõi, ghi nhận số liệu và phân tích. Số liệu thu nhận đƣợc nhập vào phần mềm excel để phân tích số liệu.
* Phân tích cấu trúc di truyền
Chạy các phần mềm GenAIEx 6.501, Treeview 1.6.6, GDA 1.0 để đánh giá quan hệ di truyền giữa các cây bạch đàn trong loài và khác loài. Thông qua đó đƣa ra những nhận xét, nhận định về quan hệ di truyền của các cây bạch đàn nghiên cứu.
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1.Phân tích đa dạng di truyền của các cây bố mẹ đã chọn
3.1.1. Kết quả tách chiết ADN tổng số
Sau khi tiến hành tách chiết ADN tổng số, đề tài đã tiến hành kiểm tra độ tinh sạch, nồng độ và chất lƣợng ADN bằng phƣơng pháp điện di trên gel agarose 0,8%. Mẫu ADN sạch và không bị đứt gãy là yếu tố đầu tiên cho phản ứng PCR –SSR thành công cũng nhƣ cho cả quá trình nghiên cứu.
Kết quả đo nồng độ ADN và kiểm tra chất lƣợng ADN trên gel agarose 0,8% cho thấy tất cả ADN tập trung một băng chính, hình ảnh rõ nét, không bị đứt gãy, nhƣ vậy các mẫu ADN đều có chất lƣợng tốt, đủ điều kiện để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo (hình 3.1).
.