Chương 1 : TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU
1.6. Một số thành tựu trong nhân giống cây có múi
Đã có nhiều công trình nghiên cứu khác nhau nhằm hoàn thiện quy trình nuôi cấy in vitro cây có múi trên thế giới cũng như ở Việt Nam.
Trên thế giới
Trong nghiên cứu của Sunette L. (2004), khi nhân giống quýt Mega-loxycarpa Lush ở Ấn Độ cho thấy, môi trường thuận lợi nhất cho sự tạo chồi từ đoạn thân làMS
cơ bản bổsung BAP 0,25mg/l + NAA 0,5mg/l, môi trường MS cơ bản bổsung BAP 1mg/l và kinetin 0,5mg/l cho hệ số nhân chồi lần lượt là 4,7 và 4,4. Chồi non ra rễ tốt nhất trên môi trường MS bổ sung NAA 2mg/l, số rễ/chồi đạt 4,4 [43].
Theo nghiên cứu của Rezadost M.H. và cs (2013), khi nghiên cứu tái sinh in vitro cây cam chua (Citrus aurantium L.) đã công bố, hạt cam chua nảy mầm tốt nhất trên môi trường MS có bổ sung BAP 2mg/1 và NAA 0,1mg/l. Tỉ lệ tạo chồi từ đoạn thân tốt nhất trên môi trường có BAP 2,5mg/l, kéo dài chồi đạt hiệu quả tối ưu trên môi trường có GA3 0,5mg/l [37].
Tác giả Ehsan E. và cs đã nghiên cứu tái sinh in vitro từ mô trưởng thành của cây cam ngọt Thomson. Kết quả cho thấy, chồi thí nghiệm phát triển tốt nhất trên môi trường MS có bổ sung BAP 1mg/l,NAA 0,1mg/l (3,2chồi/mẫu). Khi cắt mẫu theo chiều dọc hoặc chiều ngang đoạn thân có tỷ lệ phản ứng tạo chồi 56%. Rễ phát sinh trên môi trường MS cơ bản có NAA ( 0,5 - 1mg/l). Tỉ lệ tạo rễ cao nhất đạt 76% [33].
Nghiên cứu môi trường nhân nhanh giống Cam ngọt (Citrus sinensis L. Osbeck), tác giả Shahid A. K. và cs (2011) đã chỉ ra, môi trường tạo mô sẹo tốt nhất là BAP 1mg/l và NAA 0,5mg/l (98%). Môi trường tạo đa chồi tối ưu là môi trường MS cơ bản có bổ sung BAP 1,5mg/l và NAA 1mg/l, tỉ lệ mẫu tạo đa chồi khoảng 90% và đạt 10 chồi/mẫu sau 35 ngày nuôi cấy. Số rễ được tạo ra nhiều nhất trên môi trường MS cơ bản có bổ sung IBA 2,5 mg/l (3,4 rễ/cây) [42].
Trong nghiên cứu nhân giống cây chanh từ lá mầm, Anna K. P. và cs (2015) đã công bố, khi kết hợp các chất điều hòa sinh trưởng thực vật cả auxin và cytokinin trên môi trường MS cơ bản với nồng độ kinetin 0,2mg/l và NAA 1mg/l cho tỉ lệ mẫu tạo đa chồi là 97%. Môi trường MS cơ bản có bổ sung BAP 3,5mg/l cho tỉ lệ mẫu tạo đa chồi đạt 85%. Các chồi tạo rễ tốt nhất trên môi trường MS cơ bản + BAP 5mg/l+NAA 1mg/l, tỉ lệ tạo rễ đạt 82% [30].
Trong nghiên cứu nhân giống cam ngọt Bahia, tác giả Rosely P. và cs (2006) đã chỉ ra, hạt nảy mầm trên môi trường MS cơ bản có bổ sung đường 25g/l và agar 8g/l. Môi trường thuận lợi cho sự phát sinh chồi từ các đoạn thân mầm trên môi trường MS cơ bản + BAP 3mg/l + NAA 0,5mg/l, tỉ lệ mẫu tạo đa chồi là 45,5%.Các chồi tạo rễ trên môi trường MS cơ bản + IBA 1mg/l + NAA 0,5mg/l [41].
Tác giả Komal G. và cs (2013) khi nghiên cứu nhân giống tạo cây chanh không hạt (Citrus limon) đã nhận thấy, môi trường tối ưu cho sự tái sinh chồi nách là MS cơ bản +BAP 0,25mg/l+ kinetin 0,5mg/l + IBA 0,5mg/l (đạt 5,5chồi/mẫu). Khi kết hợp 2 cytokinin trên môi trường MS cơ bản là BAP 0,25mg/l và kinetin 1mg/l, thí nghiệm cho tỉ lệ mẫu phát sinh chồi là 75%, thu được nhiều nhất là 7chồi/mẫu [36].
Ở Việt Nam
Nghiên cứu nuôi cấy in vitro trên lá mầm giống cam Vinh (Citrus sinensis) và quýt Đường Canh (Citrus reticulata), Phan Hữu Tôn và cs (2014) đã công bố xác định được chất khử trùng tốt nhất là Johnson 10% lắc trong 15 phút. Tỉ lệ tái sinh chồi tốt nhất đối với giống cam Vinh là môi trường MS cơ bản + đường 30g/l + vitamin B5 5mg/l + agar 8g/l + BAP 1,5 mg/l, với quýt Đường Canh là môi trườngMS cơ bản + đường 30g/l + agar 8,0g/l + vitamin B51,0mg/l + BAP 1,0mg/l, số chồi/mẫu của giống cam Vinh đạt 4,7 và quýt Đường Canh là 5,5. Môi trường tốt nhất cho sự tạo rễ của chồi cam Vinh là môi trường MS cơ bản + đường 30g/l + vitamin B5 5mg/l + agar 8g/l + NAA 0,4mg/l + IAA 0,4mg/l. Tỉ lệ chồi phát sinh rễ là 82,3%, số rễ/chồi là 3,5 và chiều dài rễ là 3,5cm. Với quýt Đường Canh là môi trường MS cơ bản + đường 30g/l + agar 8,0g/l + vitamin B51,0mg/l + NAA 0,3mg/l + IAA 0,4mg/l cho tỉ lệ chồi phát sinh rễ là 86,3%, số rễ/chồi là 3,5 và chiều dài rễ là 3,2cm. Giá thể tốt nhất khi ra cây in vitro là cát vàng + trấu hun với tỷ lệ 1:1, sau 6 tuần tỉ lệ cây sống sót ở giống cam Vinh là 96% và quýt Đường Canh là 95% [19].
Năm 2007, Đỗ Tiến Phát và cs thuộc Viện Công nghệ Sinh học và Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội đã nghiên cứu và xây dựng thành công hệ thống tái sinh phục vụ công tác chuyển gen vào cây cam Sành bằng