Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.8. Phương pháp khảo sát định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp
bằng phản ứng hóa học
2.3.8.1. Định tính polyphenol
a) Phản ứng với muối sắt (III).
- Thuốc thử: Dung dịch muối sắt (III)
- Tiến hành: Lấy vào ống nghiệm 5 ml dịch thử (cao chiết tổng), cho thêm 0,5ml muối sắt (III). Quan sát, tùy theo số lượng và vị trí nhóm hydroxyl trong phân tử polyphenol mà cho màu lục, xanh hoặc nâu.
b) Tác dụng với H2SO4 đặc.
- Thuốc thử: Dung dịch H2SO4 đặc.
- Tiến hành: Lấy vào ống nghiệm 2ml dịch thử, cho thêm 1 - 2 giọt H2SO4 đặc. Quan sát, khi nhỏ H2SO4 lên các dẫn xuất của Flavon và Flavonol thì cho
màu vàng đậm, đối với Chalcon và Auron cho màu đỏ, đỏ thẫm và đỏ tươi; Flavanon cho màu đỏ da cam do sự chuyển thành Chalcon.
2.3.8.2. Định tính flavonoit
- Thuốc thử: HC1 đặc và bột Magie kim loại
- Tiến hành: Trong 3 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 1 - 2 ml dung dịch thử. Ống 1: Làm đối chứng.
Ống 2: Thêm 0,5 ml HC1 đặc + 3 - 5 giọt hạt Magie. Quan sát trong 10 phút. Nếu màu từ vàng, đỏ đến xanh là có flavonoit. Có thể sơ bộ nhận định thêm:
Vàng cam - đỏ: Flavon
Đỏ thẫm: Flavonol, Flavanon.
Chalcon và Auron cho màu đỏ ngay sau khi cho HC1
Ống 3: Thêm 0,5 ml CH1 đặc đun cách thủy 5 phút, nếu có màu đỏ tím: leucoantoxyanidin.
2.3.8.3. Định tính cumarin.
- Thuốc thử: Dung dịch NaOH 10%.
- Tiến hành: Lấy vào 2 ống nghiệm mỗi ống 2 ml dung dịch thử. Ống 1: Làm đối chứng
Ống 2: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cả hai ống trên bếp cách thủy đun sôi, lấy ra để nguội cho thêm 4 ml nước cất. Nếu chất lỏng trong ống 2 trong hơn ống 1 có thể xem là dương tính. Nếu đam axit hóa ống 2 bằng một vài giọt HC1 đậm đặc mà làm cho dịch đang trong suốt xuất hiện vẩn đục và có thể tạo kết tủa là dương tính.
2.3.8.4. Định tính ancaloit
- Thuốc thử Dragendorff: hòa tan 8,0 gram Bitmut nitrat kiềm trong 20 ml HNO3. Hòa tan 27,2 gram KI trong 50 ml H2O. Hỗn hợp 2 dung dịch lại, thêm nước vửa đủ 100 ml. Phản ứng cho tủa màu vàng cam.
- Tiến hành: Lấy vào 2 ống nghiệm mỗi 2 ml dung dịch thử thêm 3 ml HCl và 1 ml nước cất khuấy đều.
Ống 2: Nhỏ 1- 2 giọt thuốc thử Dragendorff nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tính.