3.3.1. Tổng hợp hệ nano liposome quy mô phòng thí nghiệm
a) Kết quả khảo sát tỷ lệ các thành phần cấu thành liposome
Công thức bào chế cơ bản của hệ nano liposome được thiết lập như sau: tỷ lệ lecithin:vitamin E là 9:1, dung dịch hydrate hóa là nước cất chứa Tween 80 (0,5%; w/v). Công thức đông khô có kết hợp thêm tá dược maltodextrin tỷ lệ maltodextrin:lipid là 4:1.
b) Kết quả khảo sát dung môi hòa tan lipid
Bảng 3.9. Kết quả khảo sát dung môi hòa tan lipid
Dung môi Độ tan (mg/mL)
Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình
MeOH 22,50 26,60 24,23 24,44 ± 2,06
CHCl3 222,45 224,20 220,00 222,22 ± 2,11
58
Nhận xét: Kết quả khảo sát dung môi hòa tan lipid cho thấy lecithin:vitamin E tan trong cả ba dung môi, tan tốt trong CHCl3 và ít tan trong MeOH. Độ tan của lecithin:cholesterol trong hệ CHCl3:MeOH tuy thấp hơn CHCl3 nhưng giảm được lượng CHCl3 sử dụng vì vậy chọn CHCl3:MeOH (2:1, v/v) làm dung môi hòa tan lipid.
c) Kết quả khảo sát môi trường hydrate hóa
Bảng 3.10. Kết quả khảo sát môi trường hydrate hóa màng lipid
Chỉ tiêu Đệm pH 5,0 Nước cất Đệm pH 7,4
Cảm quan sau bào chế Trong
Độổn định sau một tuần Lắng cặn Ổn định
Nhận xét: Nước cất và đệm pH 7,4 cho hệ nano liposome có cảm quan và độổn định tốt nhất. Môi trường đệm pH 5,0 cho cảm quan tốt nhưng không ổn định bằng nước cất sau một tuần bảo quản. Mặc khác nước cất không độc, an toàn, dễbay hơi, rẻ tiền, do đó nghiên cứu chọn nước cất làm môi trường hydrate hóa lớp màng lipid để tiếp tục khảo sát các thành phần tiếp theo.
d) Kết quả khảo sát nhiệt độ hydrate hóa
Bảng 3.11. Kết quả khảo sát nhiệt độ hydrate hóa
Chỉ tiêu Rt (30oC) 40oC 50oC 60oC 70oC 80oC Cảm quan sau bào chế Đục Đục Hơi đục Trong Hơi đục Hơi đục Độổn định sau một tuần Lắng cặn Ổn định
Nhận xét: Kết quả cho thấy liposome ở nhiệt độ 60oC cho cảm quan và độ ổn định tốt nhất trong các nhiệt độ hydrate hóa khảo sát. Nghiên cứu lựa chọn 60oC làm nhiệt độ hydrate hóa lớp màng lipid.
e) Kết quả khảo sát tỷ lệ lecithin:vitamin E
Bảng 3.12. Kết quả khảo sát tỷ lệ lecithin:vitamin E
Lecithin:vitamin E 9:1 8:2 7:3 6:4 5:5
Cảm quan sau bào chế Trong Hơi đục Đục
Độổn định sau 1 tuần Ổn định Lắng cặn
Nhận xét: Tỷ lệ lecithin:vitamin E là 9:1 (w/w) cho hệ phân tán liposome có cảm quan và độ ổn định ở điều kiện 2 − 8 oC sau một tuần bảo quản. Kết luận: Chọn tỷ lệ lecithin:vitamin E là 9:1 (w/w) để tiếp tục khảo sát tỷ lệ Tween 80 được bổ sung và pha nước trong quá trình hydrate hóa lớp màng lipid.
f) Kết quả khảo sát tỷ lệ chất hoạt động bề mặt trong pha nước
Khảo sát nồng độ Tween 80 trong pha nước bằng cách hydrate hóa màng mỏng lipid với lecithin:vitamin E. Môi trường hydrate hóa sử dụng Tween 80 trong pha nước ở các nồng độ lần lượt là 0,1%; 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0% (w/v).
59
Bảng 3.13. Kết quả khảo sát tỷ lệ Tween 80 Tween 80 trong môi
trường hydrate (%) 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0
Cảm quan sau bào chế Hơi đục Trong
Độổn định sau 1 tuần Lắng cặn Ổn định Lắng cặn
Nhận xét: Với tỷ lệ là 0,5%, hệ nano liposome cho cảm quan hệ tiểu phân nano sau bào chế trong và ổn định ởđiều kiện 2 – 8 ℃ sau một tuần bảo quản. Ở tỷ lệ Tween 80 là 0,1%; hệ phân tán sau bào chế cho cảm quan hệ tiểu phân nano hơi đục và không ổn định. Tỷ lệ Tween80 trên 0,5% mặc dù cho cảm quan hệ tiểu phân sau bào chế trong nhưng bị sa lắng sau một tuần bảo quản. Kết luận: Chọn nồng độ Tween 80 trong môi trường hydrate hóa là 0,5% để hydrate hóa lớp màng lipid.
Hình 3.15. Quy trình tổng hợp hệ nano liposome quy mô phòng thí nghiệm. ▪ Mô tả quy trình:
Cô quay áp suất loại dung môi hữu cơ 45oC trong 4 giờ
Hòa tan trong CHCl3:MeOH (2:1,
v/v) Lecithin:vitamin E
Cô quay tạo màng lipid
Hydrat hóa tạo liposome Siêu âm Đồng hóa Nước cất chứa Tween 80
Khuấy 400 rpm ở 60oC trong 2 giờ
Thời gian: 30 phút Tần số: 37 kHz Số chu kỳ: 10 Áp suất: 800 bar Khuấy 400 rpm, 10 phút Bảo quản ở 2-8 oC
60 - Cân chính xác 540 mg lecithin; 60 mg vitamin E cho vào bình cầu 100 mL; hòa tan
các thành phần vào 5 mL dung môi CHCl3:MeOH (2:1, v/v). - Khuấy 400 vòng/ phút trong 10 phút cho hỗn hợp đồng nhất.
- Tiến hành cô quay ở nhiệt độ 45 oC trong 4 giờ, áp suất chân không được điều chỉnh để loại dung môi bằng cách cho dung môi bay hơi từ từ, không quá nhanh tạo màng lipid mỏng và trong suốt bám xung quanh thành bình.
- Khi đã tạo được màng lipid khô hoàn toàn, hỗn hợp được hydrat hóa với 10 mL nước cất chứa 50 mg Tween 80 ở nhiệt độ 60 oC trong 2 giờ cho đến khi lớp màng lipid mỏng bong ra hết khỏi thành bình.
- Hệ phân tán liposome được làm giảm kích thước hạt bằng phương pháp siêu âm trong 30 phút và đồng hóa 10 chu kỳ dưới áp suất 800 bar.
- Hệ phân tán liposome sau khi đồng hóa được bảo quản ở nhiệt độ 2-8 oC.
g) Kết quả xác định cấu trúc và kích thước hạt của hệ nano liposome.
Kết quả TEM
Hình 3.16. kết quả TEM của hệ nano liposome
Nhận Xét: Kết quả chụp TEM cho thấy hình dạng, kích thước các hạt liposome thông qua kính điện tử truyền qua TEM to hơn so với kích thước được đo bằng phương pháp DLS do mẫu bị tụ do thời gian vận chuyển không được bảo quản với nhiệt độ phù hợp. Ta qua ảnh chụp TEM có thể quan sát thấy rõ các hạt có dạng hình cầu và đường đường kính trung bình thể hiện trong ảnh TEM là 239± 6,4 nm.
61
Hình 3.16. kết quả đo DLS nano liposome