cao gừng với hoạt chất shogaol quy mô phòng thí nghiệm
▪ Kết quả khảo sát lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA
Bảng 3.20. Kết quả khảo sát lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA Công Thức Tween 80- EDA-FA (%) Kích thước hạt trung bình (nm) PDI Thế Zeta (mV) CT1 10 144,9 0,299 -29,3 CT2 15 155,3 0,354 -17,6 CT3 20 - - -
Hình 3.22. Kết quả DLS hệ nano liposome chứa cao gừng gắn tác nhân hướng đích 10% Tween 80-EDA-FA.
Nhận xét: Kết quả DLS cho thấy liposome có tác nhân hướng đích gắn 10% Tween 80-EDA-FA chứa cao gừng cho kích thước hạt là 144.9 nm với PDI 0,299 và thế Zeta -29,3 mV phù hợp với điều kiện sử dụng như một chất mang thuốc kháng ung thư với kích thước nano. Kết luận: Nghiên cứu sử dụng lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA là 10% để tiến hành bào chế hệ nano liposome có gắn tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA chứa cao gừng.
72 ▪ Quy trình tổng hợp hệ nano liposome có gắn tác nhân hướng đích Tween
80-EDA-FA chứa cao gừng quy mô phòng thí nghiệm
Hình 3.23. Quy trình tổng hợp hệ nano liposome có gắn tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA chứa cao gừng quy mô phòng thí nghiệm
Cô quay áp suất loại dung môi hữu cơ 45oC trong 4 giờ
Hòa tan trong CHCl3:MeOH
(2:1, v/v) Lecithin:vitamin E
Cô quay tạo màng lipid Hydrat hóa tạo
liposome Siêu âm Đồng hóa Đông khô Nước cất chứa Tween 80, Tween 80-EDA- FA Maltodextrin Cao gừng Khuấy 400 rpm ở 60oC trong 2 giờ Thời gian 30 phút Tần số 37 kHz Số chu kỳ: 10 Áp suất 800 bar Ly tâm (5000 rpm, 15 phút, 25 oC) Khuấy 400 rpm trong 10 phút Bảo quản 2- 8 oC Loại thuốc tự do
73 ▪ Mô tả quy trình:
- Cân chính xác 540 mg lecithin; 60 mg vitamin E, 150 mg cao gừng cho vào bình cầu 100 mL; hòa tan các thành phần vào 5 mL dung môi CHCl3:MeOH (2:1, v/v).
- Khuấy 400 vòng/ phút trong 10 phút cho hỗn hợp đồng nhất.
- Tiến hành cô quay ở nhiệt độ 45 oC trong 4 giờ, áp suất chân không được điều chỉnh để loại dung môi bằng cách cho dung môi bay hơi từ từ, không quá nhanh tạo màng lipid mỏng và trong suốt bám xung quanh thành bình.
- Khi đã tạo được màng lipid khô hoàn toàn, hỗn hợp được hydrat hóa với 10 mL nước cất chứa 50 mg Tween 80 và 60 mg Tween 80-EDA-FA ở nhiệt độ 60 oC trong 2 giờ cho đến khi lớp màng lipid mỏng bong ra hết khỏi thành bình.
- Hệ phân tán liposome được làm giảm kích thước hạt bằng phương pháp siêu âm trong 30 phút và đồng hóa 10 chu kỳ dưới áp suất 800 bar.
- Hệ phân tán liposome được ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 15 phút ở 25 °C. Shogaol tự do sẽ bị loại ra khỏi hệ chất mang và kết tủa dưới đáy.
- Cân chính xác 1,2 g maltodextrin hòa tan trong 10 mL nước cất và bổ sung vào hệ liposome.
- Sản phẩm được đông khô trong máy đông khô EYELA FDU-1200. - Sản phẩm được bảo quản ở nhiệt độ 2-8 oC.
▪ Kết quả đánh giá khả năng nang hóa thuốc của liposome
Kết quảđịnh lượng thuốc tựdo được trình bảy trong Bảng 3.22.
Bảng 3.22. Khối lượng shogaol toàn phần và khối lượng shogaol tự do
Lần đo Khối lượng shogaol toàn phần (µg)
1 35279
2 36147
3 35852
Trung bình 35759
Lần đo Khối lượng shogaol tự do (µg)
1 2049
2 1992
3 2178
Trung bình 2073
Kết quảđịnh lượng shogaol toàn phần là 35,76 mg và shogaol không được nang hóa vào liposome là 2,07 mg. Lượng shogaol được nang hóa vào liposome, hiệu suất nang hóa thuốc của liposome được tính toán như sau:
- Khối lượng shogaol được nang hóa vào liposome = 35,76–2,07 = 33,69 (mg) - Hiệu suất nang hóa thuốc = 33,69
35,76 × 100 = 94,20 (%)
Kết luận: Kết quả cho thấy khả năng mang thuốc và hiệu suất nang hóa thuốc của hệliposome khá cao đạt 94,20%.
74 3.3.6. Tổng hợp hệ nano liposome gắn tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA chứa cao rong nâu với hoạt chất Fucoidan quy mô phòng thí nghiệm
a) Kết quả khảo sát lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA
Bảng 3.23. Kết quả khảo sát lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA Công thức Tween 80- EDA-FA (%) Kích thước hạt trung bình (nm) PDI Thế Zeta (mV) CT1 10 116,3 0,275 -20,7 CT2 15 265,5 0,474 -13,4 CT3 20 - - -
Hình 3.24. Kết quả DLS hệ nano liposome với 10% tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA chứa cao rong nâu.
Nhận xét: Thành phần tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA là 10% cho kích thước hạt là 116,3 nm với PDI 0,275 và thế Zeta -20,7 mV phù hợp với điều kiện sử dụng như một chất mang thuốc kháng ung thư với kích thước nano
75
Kết luận: Nghiên cứu sử dụng lượng tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA là 10% để tiến hành bào chế hệ nano liposome có gắn tác nhân hướng đích Tween 80- EDA-FA chứa cao rong nâu.
▪ Quy trình tổng hợp hệ nano liposome gắn tác nhân hướng đích Tween 80- EDA-FA chứa cao rong nâu
Hình 3.25. Quy trình tạo hệ nano liposome có gắn 10% tác nhân hướng đích Tween 80-EDA-FA chứa cao rong nâu.
Cô quay áp suất loại dung môi hữu cơ 45oC trong 4 giờ
Hòa tan trong CHCl3:MeOH
(2:1, v/v) Lecithin:vitamin E
Cô quay tạo màng lipid Hydrat hóa tạo
liposome Siêu âm Đồng hóa Đông khô Nước cất chứa Tween 80, rong nâu, Tween 80- EDA-FA Cao rong nâu
Maltodextrin Khuấy 400 rpm ở 60oC trong 2 giờ Thời gian 30 phút Tần số 37 kHz Số chu kỳ: 10 Áp suất 800 bar Ly tâm (5000 rpm, 15 phút, 25 oC) Khuấy 400 rpm trong 10 phút Bảo quản 2- 8 oC Loại thuốc tự do
76 ▪ Mô tả quy trình:
- Cân chính xác 540 mg lecithin; 60 mg vitamin E cho vào bình cầu 100 mL; hòa tan các thành phần vào 5 mL dung môi CHCl3:MeOH (2:1, v/v).
- Khuấy 400 vòng/ phút trong 10 phút cho hỗn hợp đồng nhất.
- Tiến hành cô quay ở nhiệt độ 45 oC trong 4 giờ, áp suất chân không được điều chỉnh để loại dung môi bằng cách cho dung môi bay hơi từ từ, không quá nhanh tạo màng lipid mỏng và trong suốt bám xung quanh thành bình.
- Khi đã tạo được màng lipid khô hoàn toàn,hỗn hợp được hydrat hóa với 10 mL nước cất chứa 50 mg Tween 80, 60 mg Tween 80-EDA-FA và 100 mg cao rong nâu ở nhiệt độ 60 oC trong 2 giờ cho đến khi lớp màng lipid mỏng bong ra hết khỏi thành bình.
- Hệ phân tán liposome được làm giảm kích thước hạt bằng phương pháp siêu âm trong 30 phút và đồng hóa 10 chu kỳ dưới áp suất 800 bar.
- Hệ phân tán liposome tiếp tục được ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 15 phút ở 25 °C. Shogaol tự do sẽ bị loại ra khỏi hệ chất mang và kết tủa dưới đáy.
- Cân chính xác 1,2 g maltodextrin hòa tan trong 10 mL nước cất và bổ sung vào hệ liposome.
- Sản phẩm được đông khô trong máy đông khô EYELA FDU-1200. - Sản phẩm được bảo quản ở nhiệt độ 2-8 oC.
▪ Kết quả đánh giá khả năng nang hóa thuốc của liposome
Kết quảđịnh lượng thuốc tựdo được trình bảy trong Bảng 3.22.
Bảng 3.24. Khối lượng Fucoidan toàn phần và khối lượng Fucoidan tự do
Lần đo Khối lượng Fucoidan toàn phần (µg)
1 48278
2 47829
3 47491
Trung bình 47866
Lần đo Khối lượng Fucoidan tự do (µg)
1 3671
2 3779
3 3591
Trung bình 3680
Kết quảđịnh lượng Fucoidan toàn phần là 47,87 mg và Fucoidan tự do là 3,68 mg. Lượng Fucoidan được nang hóa vào liposome, hiệu suất nang hóa thuốc của liposome như sau:
- Khối lượng Fucoidan được nang hóa vào liposome = 47,87–3,68 = 44,19 (mg) - Hiệu suất nang hóa thuốc = 44,19
77
Kết luận: Kết quả cho thấy khả năng mang thuốc và hiệu suất nang hóa thuốc của hệliposome khá cao đạt 92,31%.