Các nghiên cứu trong nước

M Ở ĐẦ U

1.2.2.2. Các nghiên cứu trong nước

Tại Việt Nam vào năm 2015, nhóm của Trần Mạnh Hùng và cộng sựđã công bố

sự xuất hiện các flavonoid là rhamnazin (42), quercetin 3,3′-dimethyl ether (43), apigenin (44), isoschaftoside (45) và schaftoside (46) [14].

Năm 2015, nhóm của Van Thu Nguyen đã phân lập được 3 triterpene khung serratane mới gồm: 3β,21β,29-trihydroxyserrat-14-en-24-oic acid-3β-yl-(7ʹ- hydroxycinnamate) (72), 21β-hydroxyserrat-14-en-3,16-dione (73), 3β,14α,15α,21β-tetrahydroxyserratan-24-oic acid-3β-yl-(4ʹ-methoxy-5ʹ- hydroxybenzoate) (74) [18].

Năm 2018, nhóm nghiên cứu của Phạm Hữu Điển và cộng sựđã phân lập được 3 serratane triterpenoid từ loài Thông đất thu hái tại Hà Giang, Việt Nam bao gồm: serrat-14-en-3β,21β-diol (77), serrat-14-en-3β,21α-diol (78), 3β,21β- dihydroxyserrat-14-en-21-yl acetate (79) [19].

Cũng trong nghiên cứu của Trần Mạnh Hùng năm 2015, có các hợp chất phenolic

như 4-hydroxy-3-methoxyphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside (80), guaiacylglycerol (81), 4-hydroxy-3-methoxyphenyl-β-D-glucopyranoside-(1→6)-β-D- glucopyranoside (82), dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside (83) , bombasin-4-O-β-D-glucopyranoside (84), lycocernuaside A (85) [14].

1.2.3. Hoạt tính sinh học của loài Thông đất

1.2.3.1. Hoạt tính gây độc tế bào

Các serratane triterpenoid 56-62được thử hoạt tính gây độc tế bào trên 3 dòng tế bào ung thư ở người (K562, SMMC-7221 và SGC7901) theo phương pháp MTT. Kết quả cho thấy hợp chất 61 có khảnăng gây độc trên cả 3 dòng tếbào ung thư với IC50 lần lượt là 20,3; 34,0 và 22,5 µg/mL khi so sánh với chất chuẩn mitomycin C với IC50 dao động từ 13,0 - 22,1 µg/mL. Hợp chất 52 thể hiện hoạt tính trên dòng tế

bào K562 với IC50 56,1 µg/mL [18].

1.2.3.2. Hoạt tính chống oxi hóa

Hoạt tính chống oxi hóa của dịch chiết methanol của cây Thông đất được đánh

giá bằng phương pháp quét gốc tự do DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) cho thấy sự có mặt của các phân tử chống oxi hóa có khảnăng cho điện tửđể khử phân tử DPPH. Kết quả cho thấy dịch chiết methanol của phần trên mặt đất và dưới mặt

đất của loài thực vật này có hoạt tính quét gốc tự do lần lượt là 19,13± 0,88% và 12,21 ± 0,9%. Tuy nhiên hoạt tính này tương đối thấp khi so sánh với một số loại thực vật như Ipomoea batatas (89,53 ± 0,2 %) và Corchorus olitorius (63,76 ± 4,1 %) sử dụng 1 mg/mL ascorbic acid làm chất chuẩn [20].

1.2.3.3. Hoạt tính kháng viêm

Hoạt tính kháng viêm của hoạt chất thể hiện bằng khả năng ức chế enzyme cyclooxygenase 2 (COX-2) và cyclooxygenase 1 (COX-1). Nồng độ của dịch chiết là 100 ppm, mỗi cặn chiết được thử nghiệm 2 lần (4 vòng lặp lại/lần), sử dụng chất

đối chứng là celecoxib (Celebrex). Kết quả cho thấy cặn chiết methanol của loài

Thông đất thể hiện hoạt tính kháng viêm khá cao trên enzyme COX-2 với % ức chế

COX-2 là 74,78 ± 18,61% và COX-1 là 57,8 ± 3,46%, chỉ số chọn lọc là 1,29. Khi so sánh với các thuốc kháng viêm đang dùng trên thị trường thì chỉ số chọn lọc của nó nhỏhơn Aspirin (2) nhưng lớn hơn Ibuprofen (0,67). COX-1 được sản sinh ra từ

14 và cân bằng thành mạch. Trong khi đó, COX-2 lại được tạo ra khi có các kích thích tiền viêm, được cho là có liên quan đến quá trình gây viêm. Như vậy, việc chọn lọc

ức chế COX-2 là hữu ích hơn trong việc điều trị viêm [20].

1.2.3.4. Hoạt tính ức chế enzyme xanthine oxidase (XO)

Xanthine oxidase (XO) là một enzyme quan trọng tham gia vào quá trình chuyển hóa purin, việc ức chế XO có thể làm giảm nồng độ uric acid trong huyết thanh. Vì vậy, chất ức chế XO có thể sử dụng để điều trị sự tăng uric acid trong máu và các bệnh lý liên quan, bao gồm bệnh gout.

Các hợp chất 68-70 và 86-92 được thử nghiệm khả năng ức chế XO với chất chuẩn là allopurinol (IC50: 25,12 ± 0,32 µM). Kết quả cho thấy các hợp chất 86 cho hoạt tính mạnh nhất với IC50 là 30,36 ± 0,53 µM, tiếp đến là hợp chất 92 có IC50 35,33 ± 0,68 µM và cuối cùng là hợp chất 87 có IC50 42,65 ± 1,12 µM [17].

1.2.3.5. Hoạt tính kháng nấm Candida

Các aspartic proteases (SAP) được tiết ra của nấm Candida albicans được cho là yếu tố gây độc chính trong việc nhiễm nấm Candida. Để kiểm soát tình trạng bệnh này, việc ức chế SAP được cho là cách tiếp cận mới. Các hợp chất 37, 56-61 đã được thử hoạt tính ức chế SAP, kết quả cho thấy hợp chất 37 và 56 cho hoạt tính mạnh nhất với IC50 lần lượt là 20 và 8,5 µg/mL với chất chuẩn pepstatin A có IC50 là 0,0015 µg/mL [16].

1.2.3.6. Hoạt tính ức chế acetycholinesterase

Các chất ức chế acetylchlolinesterase (AChE) giúp làm tăng sản sinh acetylcholine trong hệ thần kinh trung ương, hứa hẹn là những loại thuốc tốt đểđiều trị bệnh Alzheimer.

Năm 2014, nhóm nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Chương và cộng sựđã tiến hành phân lập, thu được phân đoạn alkaloidcủa loài Thông đất và thử hoạt tính ức chế

enzyme AChE. Kết quả cho thấy, trên nghiên cứu in vitro, phân đoạn này cho hoạt tính ức chế enzyme AChE rất mạnh; trên nghiên cứu in vivo, tác dụng tăng nhận thức trên chuột bị mất trí nhớ gây ra bởi scopolamine được chứng minh bằng thử

nghiệm né tránh thụ động và mê cung nước Merris. Tác dụng ức chế AChE trên vỏ não phía trước của chuột, vùng dưới đồi và hệ thống striatum (tân thể vân) thể hiện qua giá trị IC50 lần lượt là 26,7; 32,2 và 25,7 µg/mL. Điều này cho thấy, loại dược liệu này rất có tiềm năng trong việc điều trị suy giảm nhận thức [21].

Trong công bố của Trần Mạnh Hùng và cộng sự năm 2015, hợp chất isoschaftoside (45) cho hoạt tính ức chế AchE cao nhất với IC50 0,23 µM. Hợp chất schaftoside (46) có khả năng ức chế tốt nhất với butyrylcholinesterase và β- secretase 1 với IC50 lần lượt là 0,62 và 2,16 µM. Hợp chất guaiacylglycerol (81) có

IC50 với AChE là 1,56 µM [14].

1.3. Tổng quan về chi Kadsura Juss.

1.3.1. Tổng quan chung vềthành phần hóa học chi Kadsura Juss.

Chi Na rừng còn gọi là Nắm cơm (Kadsura Juss.) thuộc họ Ngũ vị

(Schisandraceae Blume.) có khoảng 16 loài, phân bố chủ yếu ở khu vực châu Á. Tại Việt Nam, theo Phạm Hoàng Hộ thì chi này có 4 loài [22], theo Nguyễn Tiến Bân có 5 loài và 1 thứ là: Nắm cơm lá hẹp (K. angustifolia A.C. Smith), Na rừng (K. coccinea (Lem.) A. C. Smith.), Xưn xe tạp (K. heteroclita (Roxb.) Craib.), Ngũ vị

15 nam (K. longipedunculata Fin & Gagnep.), Nắm cơm lá thuôn (K. oblongifolia

Merr.), Xưn xe trung bộ (K. coccineavar. annamensis (Gagnep.) Ban) [3].

Thành phần hóa học chính của các thực vật thuộc chi này là các terpenoid, flavonoid và lignan.

1.3.2. Các terpenoid

Ở chi này, các terpenoid đặc trưng nhất là các triterpenoid và tập trung vào 4 bộ

khung chính là: lanostane (3,4-seco-lanostane; 14(13→12)-abeolanostane; 18 (13→12)-abeolanostane, norlanostane và các nhóm lanostane triterpenoid khác);

kadlongilactone; cycloartane (cycloartane; 3,4-secocycloartane; 14(13→12)-abeo-

cycloartane; 3,4:9,10-disecocycloartane); schinortriterpenoid và các triterpenoid khác [23].

Hình 1.2. Cấu trúc khung terpenoid từ chi Kadsura Juss.

1.3.3. Flavonoid

Có rất ít công bố về flavonoid từ các loài thuộc chi Kadsura Juss. Các flavonoid phần lớn thuộc dẫn xuất của catechin [24] và anthocyanin [25].

1.3.4. Lignan

Đây là nhóm chất chính được phân lập từ các loài thuộc chi Kadsura Juss. Trong thời gian từ 2014-2021 đã có 81 lignan được công bố [26] và tập trung vào 5 bộ

khung chính là: dibenzocyclooctadiene, spirobenzofuranoid, alryltetralin, diarylbutane và tetrahydrofuran.

Hình 1.3. Cấu trúc khung lignan từ chi Kadsura Juss.

1.4. Tổng quan về loài Na rừng (Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm.)

1.4.1. Đặc điểm thực vật cây Na rừng

1.4.1.1. Phân loại khoa học

- Tên Việt Nam: Na rừng, tên khác: Nắm cơm, (dây) Xưn xe, Ngũ vịnam…

- Tên khoa học: Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm. - Giới: Thực vật

- Ngành: Ngọc lan - Magnoliophyta - Lớp: Ngọc lan - Magnoliopsida - Phân lớp: Ngọc lan - Magnoliidae

16 - Bộ: Hồi - Illiciales

- Họ: Ngũ vị - Schisandraceae - Chi: Kadsura Juss.

- Loài: Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm.

1.4.1.2. Mô tả cây

Hình 1.4. Hình ảnh cây Na rừng (Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm.)

Hình ảnh được lấy từ trang web http://www.plantsoftheworldonline.org và https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1674638420300538

Thuộc loại dây leo to có nhánh mọc trườn, mảnh, phủ lớp long tuyến màu sậm, rồi về sau lại có lỗ bì hình dải. Lá bầu dục hay thuôn, dạng góc ở gốc, thon hẹp, tù, dài 6-10 cm, rộng 3-4 cm, nhạt màu ở dưới, rất nhẵn. Hoa đơn tính ở nách lá dài 15 mm, rộng 10 mm, màu tía. Quả giống như một quả na to. Cây na rừng phân bố rải rác trong rừng, ởđộ cao 400-800 m. Ra hoa vào tháng 5-6, có quả tháng 8-9 [1].

1.4.1.3. Phân bố, thu hái, chế biến

Phân bốở vùng Lào Cai, Yên Bái, Thái Nguyên (Đại Từ, Linh Thông), Lạng Sơn (Văn Quan), Vĩnh Phúc (Tam Đảo), Hà Nội (Ba Vì), Quảng Trị (Đông Trị), Kon

Tum, Lâm Đồng (Di Linh, Braian, Bảo Lộc). Còn có ở Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Myanmar.

1.4.1.4. Tính vị, tác dụng, công dụng

- Tính vị, tác dụng: Rễ có vị cay ấm, hơi đắng, có hương thơm; có tác dụng hành khí chỉ thống, hoạt huyết tán ứ, khư phong tiêu thũng. Quả cũng có tác dụng hành khí chỉ thống, hoạt huyết, tán ứ. Thân, lá có vị chua, ngọt, tính hơi ấm; có tác dụng noãn vị, tán ứ, tiêu thũng, giải độc, hành khí, chỉ thống.

- Công dụng: Quảăn được, quả Na rừng rang lên làm thuốc an thần, gây ngủ. Rễ

có tác dụng viêm ruột mạn tính, viêm dạ dày ruột cấp tính, viêm loét dạ dày, hành tá tràng, phong thấp đau xương, đòn ngã ứđau, đau bụng trước khi hành kinh, sản hậu

17

Trong dân gian thường dùng vỏ thân, vỏ rễ làm thuốc bổ, kích thích thích tiêu hóa, giảm đau [1].

1.4.2. Thành phần hóa học cây Na rừng

Các công trình nghiên cứu trên thế giới và trong nước đã phân lập và xác định thành phần hóa học của Na rừng. Trong đó tìm thấy các thành phần hóa học gồm: terpenoid, flavonoid, lignan và steroid.

1.4.2.1. Các nghiên cứu ngoài nước

a. Các terpenoid

Theo một báo cáo vào năm 2020, các terpenoid được phân lập từ Na rừng chủ

yếu là sesquiterpenoid và triterpenoid [27].

Trong các triterpenoid, phần lớn tập trung vào khung lanostane, seco-lanostane, kadlongilactone, cycloartane và seco-cycloartane, nortriterpenoid. Thuộc bộ khung lanostane phải kể đến coccinilactone A-B (93-94) [28], kadcoccinone D-F (95-97)

[29]; bộ khung seco-lanostane là seco-coccinic acid A-B (98-99) [30]; bộ khung kadlongilactone là kadcoccilactone K-M (100-102) [31]; các cycloartane triterpenoid có kadcoccilactone Q (103) [31]; seco-cycloartane có coccinetane A-B

18

Năm 2008, Gao và cộng sựđã phân lập được từ dịch chiết acetone của thân cây Na rừng các triterpenoid là kadcoccilactone A-J (106-115); 2 triterpenoid đã biết là

kadsuphilactone A và micrandilactone B [33].

Trong một công bố của Wang và cộng sự vào năm 2008, 7 hợp chất triterpenoid

khung lanostane đã được phân lập từ rễ của loài này. Đó là các seco-coccinic acid A-B (98-99), seco-coccinic acid C-F (116-119) và coccinilactone A (93) [28].

Đến năm 2009, nhóm này tiếp tục phân lập được 5 triterpenoid khung lanostane mới từ dịch chiết ethanol của rễ cây Na rừng bao gồm: Coccinone A-D (120-123) và coccinilactone B (94) [34].

Theo Li và cộng sựvào năm 2012, các triterpenoid từ cây Na rừng có thể kể đến neokadsuranic acid B (124), kadsuracoccin acid A (125) và anwuweizonic acid (126) [35].

Năm 2010, một triterpenoid mới thuộc bộ khung lanost-9(11)-3-one được các nhà khoa học Trung Quốc phân lập từ rễ cây Na rừng là hợp chất 3-hydroxy-12- acetoxycoccinic acid (127) [36].

Huang và cộng sự đã phân lập được thêm 2 triterpenoid mới từ thân cây trong một công bốnăm 2019. Đó là kadsuricoccin A-B (128-129) [37].

Ngoài các triterpenoid đặc trưng, các nhà khoa học còn phân lập được các

sesquiterpenoid. Năm 2016, Hu và cộng sựđã công bố sự xuất hiện của kadcoccinin A (131) và kadcoccinin B (132) – các sesquiterpenoid được phân lập từ thân cây Na rừng [38].

19

Bảng 1.5. Một số terpenoid phân lập từ loài Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm.

Tên chất Ký hiệu TLTK

Coccinilactone A 93 [27, 28]

Coccinilactone B 94 [27, 34]

Kadcoccinone D-F 95-97 [27]

Seco-coccinic acid A-B 98-99 [27, 28]

Kadcoccilactone K-M 100-102 [27]

Kadcoccilactone Q 103

Coccinetane A-B 104-105

Kadcoccilactone A-J 106-115 [27, 33]

Seco-coccinic acid C-E 116-118 [28]

Kadcoccilactone F 119 [28, 39] Coccinone A-D 120-123 [34] Neokadsuranic acid B 124 [35] Anwuweizonic acid 125 Kadsuracoccin acid A 126 3-Hydroxy-12-acetoxycoccinic acid 127 [36] Kadsuricoccin A 128 [37] Kadsuricoccin B 129

20(R),24(E)-3-Oxo-9β-lanosta-7,24-dien-26-oic acid 130 [39]

Kadcoccinin A 131 [38]

Kadcoccinin B 132

b. Các flavonoid

Một số lượng ít các flavonoid phân lập từ cây Na rừng được công bố. Theo nghiên cứu của Gao và cộng sự năm 2012, bên cạnh các lignan, 1 flavonoid được phân lập từ cây Na rừng là ascovertin [40].

Năm 2020, Mi Hee Woo và cộng sựđã công bố một số flavonoid phân lập từ rễ

của loài thực vật này là: (-)epi-catechin (133), (+)gallocatechin (134), catechin (135) [24].

20

c. Các lignan

Theo một tổng hợp của Yang và cộng sựvào năm 2020, các lignan có ở Na rừng tập trung vào 4 bộ khung chính [27]:

*Các dibenzocyclooctadiene lignan

Đã có 58 hợp chất khác nhau thuộc nhóm này được công bố. Sự khác nhau về

cấu trúc của các hợp chất do sự liên kết với các nhóm thế khác nhau của bộ khung dibenzocyclooctadiene lignan. Nhóm methoxy là nhóm thế xuất hiện nhiều nhất, bên cạnh đó là các nhóm thế như acetyl, angeloyl, tigloyl, propanoyl, benzoyl,

cinnamoyl và butyryl. Một sốtrong đó bao gồm: schisantherin P-Q (136-137) [41], kadsuralignan I (138) [42], kadsuralignan J (139), kadsuralignan F (140)[43], neokadsuranin (141) [44], kadsuralignan G (142) [45], isovaleroylbinankadsurin A (143) [39].

*Spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene lignan

Fang và cộng sự đã phân lập được 5 spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene lignan từ cặn ethyl acetate của rễ cây K.coccinea, gồm schiarisanrin B (144), heteroclitin D (145) kadsulignan H-I (146-147), và schiarisanrin A (148) [46].

Li và cộng sự cũng công bố sự xuất hiện của kadsulignan E (149) và F (150) trong một nghiên cứu từ rễ của cây Na rừng [47].

*Arylnaphthalene lignan

Li và cộng sựđã phân lập được kadsuralignan C (151) từ dịch chiết chloroform của thân cây Na rừng, đây là hợp chất đầu tiên trong nhóm này được báo cáo [48].

21 Yeon và cộng sự thu được (7′S,8′S,8R)-(8β,8′α)-dimethyl-4,4′-dihydroxy-5,3′- dimethoxy-5′-cyclolignan glucoside (152) [49].

Năm 2007, nhóm nghiên cứu của Li đã phân lập được kadsuralignan H (153) từ

cặn chiết ethyl acetate của rễ cây Na rừng [42].

*Diarylbutane lignan

Kadsurindutin E (154), coccilignan A (155) và meso-dihydroguaiaretic acid (156)

đã được nhóm nghiên cứu của Fang và cộng sự phân lập và xác định cấu trúc từ cặn chiết ethyl acetate của rễ cây Na rừng [46]. Bên cạnh đó còn có hợp chất kadcoccilignan (157) cũng được công bố bởi Gao và cộng sựvào năm 2012 [40].

Bảng 1.6. Các lignan phân lập từ loài Kadsura coccinea (Lem.) A. C. Sm.

Tên chất Ký hiệu TLTK Tên chất Ký hiệu TLTK Schisantherin P 136 [41] Kadsulignan H 147 [46] Schisantherin Q 137 Schiarisanrin A 148 Kadsuralignan I 138 [42] Kadsulignan E 149 [47] Kadsuralignan J 139 Kadsulignan F 150 Kadsuralignan F 140 [43] Kadsuralignan C 151 [49] Neokadsuranin 141 [44] (7′S,8′S,8R)- (8β,8′α)-dimethyl- 152

22 4,4′-dihydroxy- 5,3′-dimethoxy-5′- cyclolignan glucoside Kadsuralignan G 142 [45] Kadsuralignan H 153 [42] Isovaleroylbinankadsurin A 143 [39] Kadsurindutin E 154 [46] Schiarisanrin B 144 [46] Coccilignan A 155 Heteroclitin D 145 Meso- dihydroguaiaretic acid 156 Kadsulignan H 146 Kadcoccilignan 157 [40] d. Các hợp chất khác

Ngoài thành phần chính là terpeneoid, lignan, flavonoid, trong cây Na rừng còn chứa một số hợp chất khác như β-sitosterol (158) và β-sitosteryl-3-O-β-D- glucopyranoside (159) [39].

.

1.4.2.2. Các nghiên cứu trong nước

Tại Việt Nam, năm 2009, nhóm nghiên cứu của Ninh Khắc Bản và cộng sự đã

phân lập được một hợp chất 3,4-seco-lanostane triterpenoid là seco-coccinic acid F (119) và 1 hợp chất đã biết là 20(R),24(E)-3-oxo-9β-lanosta-7,24-dien-26-oic acid (130) từ cặn chiết methanol từ rễ cây Na rừng [39].

Trong một báo cáo tại Hội nghị khoa học ở Việt Nam vào năm 2009, từ rễ cây Na rừng ở Tràng Định, Lạng Sơn, các nhà khoa học đã tiến hành chiết tách tinh dầu

và xác định thành phần hóa học của chúng. Kết quả cho thấy đã xác định được 36 hợp chất có trong tinh dầu rễ cây Na rừng, một sốtrong đó là α-pinene, camphene,

α-terpeniol, β-caryophyllene, 1,2,3-trimethyl, β-himachalene…[50]

1.4.3. Hoạt tính sinh học

Các hợp chất và dịch chiết được phân lập từ cây Na rừng đã thể hiện nhiều hoạt tính sinh học bao gồm gây độc tế bào, kháng HIV, chống viêm gan, chống oxi hóa và tác dụng bảo vệ thần kinh.

1.4.3.1. Hoạt tính gây độc tế bào

Hợp chất kasuracin A thể hiện tác dụng chống tăng sinh đáng kể với giá trị IC50

dao động từ 1,05 đến 11,31 µg/mL trên 4 dòng tế bào ung thư người là HCT116, A549, HL-60 và HepG2.

Hợp chất heilaohulignan C đã chứng minh hoạt tính gây độc tế bào rất tốt trên dòng tế bào ung thư HepG-2 ởngười với IC50 9,92 µg/mL được báo cáo bởi Liu và cộng sự [51]. Seco-coccinic acid F, G và K cho thấy tác dụng ức chế tăng sinh tế

23 bào trên dòng tế bào bạch cầu HL-60 ởngười với GI50 lần lượt là 16,6; 15,2 và 28,4 µM.

Kadlongilactone A-B và longipedlactone A được báo cáo là thể hiện hoạt tính