- Dẫn xuất CD cationic (dẫn xuất CD điện tích dương):
O- sulfo)-β CD
2.2.1. Khảo sát điều kiện phân tích
31
Ảnh hưởng pH và nồng độ của dung dịch điện ly nền
Hình 2.1. Ảnh hƣởng pH dung dịch điện ly nền trên độ phân giải đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5 giây, 214 nm, 10 mM HB -CD, các dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM có giá trị pH khác nhau.
Hình 2.2. Ảnh hƣởng nồng độ dung dịch điện ly nền trên độ phân giải đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5 giây, 214 nm, 10 mM HB -CD, các dung dịch điện ly nền TRIS pH 2,5 có nồng độ khác nhau
Nhận xét: Khi pH dung dịch điện ly nền tăng thì độ phân giải giảm. Khả năng
tách đạt cao nhất khi dung dịch điện ly nền có pH 2,5 (hình 2.1) và nồng độ TRIS 50mM. (hình 2.1) (hình 2.2) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 20 40 60 80 Nồng độ dung dịch điện ly nền (mM) Đ ộ p h â n g iả i S-và R-propranolol Rs 0 0.5 1 1.5 2 2.5 2 3 4 5 6 pH dung dịch điện ly nền Đ ộ p h â n g iả i S-và R-propranolol Rs
32
Ảnh hưởng nồng độ tác nhân đối quang và nồng độ dung môi hữu cơ
Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ HB -CD (trong dung dịch TRIS 50 mM, pH 2,5) ở các giá trị 10mM, 20mM, 30mM. và hiệu quả tách khi có sự hiện diện của methanol
Hình 2.3. Ảnh hƣởng nồng độ HB -CD trên độ phân giải đồng phân propranolol
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm,dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5.
Hình 2.4. Ảnh hƣởng nồng độ methanol trên độ phân giải đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm, 20mM HB -CD, các dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5 có nồng độ methanol khác nhau
Nhận xét: HB -CD nồng độ 20mM (Hình 2.3) và Methanol đƣợc thêm vào dung dịch điện ly nền (Hình 2.3) làm tăng độ phân giải của hai pic đồng phân
Ảnh hưởng của -CD, HP--CD, HB--CD trên khả năng tách hỗn hợp racemic của propranolol.
0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 5 10 15 20 25
Nồng độ dung môi hữu cơ (%)
Đ ộ p h â n g iả i S-và R-propranolol Rs 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 10 20 30 40 Nồng độ dung dịch HB beta-CD (mM) Đ ộ p h ân g iả i S-và R-propranolol Rs
33
Hình 2.5. Ảnh hƣởng các tác nhân đối quang trên độ phân giải của đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5 giây, 214 nm, các dung dịch điện ly nền TRIS 50mM có giá trị pH 2,5: (a) 20 mM -CD (Rs = 0), (b) 20 mM HP -CD (Rs = 0,94), (c) 20 mM HB -CD (Rs = 1,21)
Khả năng tách đồng phân propranolol với tác nhân HP -CD và sự hiện diện của methanol
Hình 2.6. Ảnh hƣởng nồng độ HP -CD trên độ phân giải của đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5 giây, 214 nm, dung dịch điện ly nền TRIS-phosphat 50 mM giá trị pH 2,5 và 20% methanol. (a) 10mM HP -, (b) 20 mM HP -CD (c) 30 mM HP -CD.
34
Khả năng tách đồng phân propranolol với tác nhân -CD và sự hiện diện của methanol
Hình 2.7. Ảnh hƣởng nồng độ -CD trên độ phân giải đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm,dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5có 10% methanol
Hình 2.8. Ảnh hƣởng nồng độ -CD trên độ phân giải đồng phân propranolol.
Điều kiện điện di: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm, dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5 có 20% methanol
Nhận xét:
Với tác nhân -CD khả năng tách đồng phân propranolol kém.
Sự thay đổi hóa học của nhóm 2-hydroxy của -CD với nhóm hydroxyalkyl làm cho khoang sơ nƣớc của -CD linh động hơn. Do đó, tính chọn lọc đối với đồng phân propranolol của tác nhân HP -CD, HB -CD cao hơn -CD
35
Qua khảo sát, chọn hai điều kiện tách đồng phân với hai tác nhân HP -CD, HB -CD :
Điều kiện điện di 1: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm, dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5 có 20% methanol, 20 mM HB -CD
Điều kiện điện di 2: cột mao quản 64 cm (55,5 cm) x 50 m, 25oC, 20 kV, 50 mbar x 5giây, 214 nm, dung dịch điện ly nền TRIS 50 mM pH 2,5 có 20% methanol, 30 mM HP -CD
Hình 2.9. Điện di đồ hỗn hợp racemic của propranolol đối chiếu. (Điều kiện điện di 1)
Hình 2.10. Điện di đồ hỗn hợp racemic của propranolol trong mẫu thử. (Điều kiện điện di 1)
36
Hình 2.11. Điện di đồ hỗn hợp racemic của propranolol đối chiếu. (Điều kiện điện di 2)
Hình 12. Điện di đồ hỗn hợp racemic của propranolol trong mẫu thử. (Điều kiện điện di 2)
37