2.3.2.1. Các hợp chất từ cao CHCl3 – NA.C
Cao NA.C (25,0 g) tiến hành CC-SC pha thường, rửa giải với hệ dung môi tăng dần độ phân cực n-hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 50/1→0/1, thu được 6 phân đoạn C.1-C.6.
Phân đoạn C.2 (2,8 g) tiến hành CC-SC pha thường với hệ dung môi tăng dần độ phân cực n-hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 30/1→0/1, thu được 3 phân đoạn C.2.1-C.2.3. Phân đoạn C.2.2 ( g) được CC-SC rửa giải bằng hệ dung môi tăng dần độ phân cực n- hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 20/1→0/1, thu được 4 phân đoạn C.2.2.1-C.2.2.4. Tinh chế phân đoạn C.2.2.2 bằng CC-SC thu được NA.07 (12 mg). Phần C.2.2.3 được tinh chế bằng CC-SC sử dụng chất rửa giải là n-hexane-EtOAc (5/1) thu được hai hợp chất NA.04 (26,0 mg) và NA.06 (17,0 mg).
Phân đoạn C.3 (3,4 g) được CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane- acetone (20/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được 4 phân đoạn C.3.1-C.3.4. Hợp chất NA.05 (12,0 mg) và NA.09 (15,0 mg) thu được từ C.3.2 bằng CC-SC pha thường. Phân đoạn C.3.3 tiếp tục được CC-SC và rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane-acetone (15/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được
2 phân đoạn C.3.3.1-C.3.3.2. Hợp chất NA.08 (8,0 mg) và NA.10 (14,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn C.3.3.2.
Phân đoạn C.5 (6,2 g) được điều chế bằng CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi của CHCl3-MeOH (20/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được 3 phân đoạn C.5.1-C.5.3. Phân đoạn C.5.2 được CC-SC nhiều lần sử dụng hệ dung môi CHCl3-MeOH (10/1) thu được NA.11
(10,0 mg). Hợp chất NA.03 (6,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn C.5.3 bằng CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi CHCl3-MeOH (7/1).
Sơ đồ 2.2. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao NA.C 2.3.2.2. Các hợp chất từ cao EtOAc – NA.E
Cao NA.E (90,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải với hệ dung môi tăng dần độ phân cực CHCl3-MeOH (50/1, 20/1, 15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100), thu được 7 phân đoạn lần lượt là E.1 (4,5 g), E.2 (10,0 g), E.3 (15,0 g), E.4 (12,0 g), E.5 (20,0 g), E.6 (15,0 g), E.7 (8,5 g).
Phân đoạn E.2 (10,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải ly với hệ dung môi CHCl3-MeOH (20/1, 15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100) thu được 5 phân đoạn E.2.1-E.2.5. Ở phân đoạn E.2.2 (2,0 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (20/1) thu được hợp chất NA.12 (20,0 mg). Tương tự phân đoạn E.2.3 (1,8 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1) thu được hợp chất NA.16 (17,0 mg).
Phân đoạn E.4 (12,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải ly với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100) thu được 5 phân đoạn E.4.1-E.4.5. Ở phân đoạn E.4.1 (1,5 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (20/1) thu được 3 phân đoạn E.4.1.1-E.4.1.3.Ở phân đoạn E.4.1.2 (0,9 g) tiến hành CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (15/1) thu được hợp chất NA.15 (32,0 mg) và hợp chất NA.19 (10,0 mg). Phân đoạn E.4.3 (3,1 g) tiếp tục CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (10/1) thu được 3 phân đoạn E.4.3.1-E.4.3.3. Ở phân đoạn E.4.3.2 (1,2 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH- H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA.24 (14,0 mg) và hợp chất NA.25 (26,0 mg). Tương tự phân đoạn E.4.5 (3,8 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (10/1) thu được 3 phân đoạn E.4.5.1-E.4.5.3. Ở phân đoạn E.4.5.2 (1,6 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA.20
(23,0 mg) và hợp chất NA.21 (14,0 mg). Ở phân đoạn E.4.5.3 (1,1 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất hợp chất
NA.22 (17,0 mg).
Phân đoạn E.5 (20,0 g) tiến hành CC-SC pha thường giải ly lần lượt với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1, 10/1, 7/1, 5/1, 1/1, 0/100). Dựa trên kết quả TLC với thuốc thử H2SO4 10%/EtOH để hiện hình, gom các vết giống nhau thu được 5 phân đoạn ký hiệu là E.5.1-E.5.5. Từ phân đoạn E.5.1 (3,2 g) tiến hành CC-SC pha thường giải ly nhiều lần với hệ dung môi CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA.01 (10,0 mg) và NA.02
(14,0 mg). Từ phân đoạn E.5.2 (4,5 g) tiến hành CC-SC với hệ dung môi giải ly CHCl3- MeOH-H2O (10/1/0,1), kết quả thu được các hợp chất NA.14 (18,0 mg) và NA.23 (8,0 mg). Từ phân đoạn E.5.4 (2,2 g) tiến hành CC-SC pha thường với hệ dung môi giải ly CHCl3- MeOH-H2O (7/1/0,1→3/1/0,1) dựa trên kết quả TLC gom các vết giống nhau thu được 3 phân đoạn ký hiệu là E.5.4.1-E.5.4.3. Phân đoạn E.5.4.2 được CC-SC pha đảo RP-18 với hệ dung môi giải ly MeOH-H2O (1/1) thu được hợp chất NA.13 (8,0 mg).
Phân đoạn E.6 (15,0 g) được tiến hành CC-SC pha thường giải ly lần lượt với hệ dung môi CHCl3-MeOH (10/1, 7/1, 5/1, 3/1, 1/1, 0/100). Dựa trên kết quả TLC gom các
vết giống nhau thu được 5 phân đoạn ký hiệu là E.6.1-E.6.5. Từ phân đoạn E.6.3 (2,8 g)
tiến hành CC-SC nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (5/1/0,1) kết quả
thu được hợp chất NA.18 (15,0 mg). Từ phân đoạn E.6.4 (2,2 g) tiến hành CC-SC nhiều
lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (7/1/0,1→3/1/0,1) kết quả thu được 3 phân
đoạn ký hiệu E.6.4.1-E.6.4.3. Từ phân đoạn E.6.4.2 (0,5 g) CC-SC nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (5/1/0,1), tiếp tục tiến hành CC-SC pha đảo RP-18 với hệ dung môi giải ly MeOH-H2O (1/2) thu được hợp chất NA.17 (11,0 mg).