PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
3.3. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
3.3.1. Đối tượng nghiên cứu
- Mẫu huyết thanh từ gà ≥3 tuần tuổi, chưa từng chủng vacxin aMPV, nuôi tại các tỉnh khu vực miền Bắc;
- Virus aMPV trong các mẫu bệnh phẩm gà được chẩn đoán lâm sàng do aMPV gây ra.
3.3.2. Vật liệu nghiên cứu
3.3.2.1. Các loại hóa chất sử dụng
- Các loại hoá chất, môi trường dùng cho các phản ứng huyết thanh học và phản ứng RT-PCR được chuẩn hóa theo quy trình nghiên cứu của Phòng thí nghiệm bộ môn Vi Sinh Vật – Truyền nhiễm, khoa Thú y -Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam và Phòng thí nghiệm Trung tâm chẩn đoán thú y Greenlab, Công ty CP Medion Việt Nam.
Sinh phẩm, hóa chất dùng cho phản ứng RT- PCR: (i) Trizol™ Reagent (15596026, Invitrogen); Chloroform (102445, Merck Millipore); 2-propanol (109634, Merck Millipore); Ethanol 75%; nước 3D (Deionized Double Distilled Water); (ii) Random hexamers (N8080127, Invitrogen); kit M-MLV Reverse
Transcriptase (28025013, Invitrogen); (iii) Kit MaximeTM PCR PreMix (i-Taq) (25025, INTRON Biotechnology, Hàn Quốc); (iv) Dung dịch nhuộm RedsafeTM Nucleic Acid Staining Solution (21141, INTRON Biotechnology, Hàn Quốc); cặp mồi đặc hiệu gen G (kích thước 451bp) của virus theo nghiên cứu đã công bố (Bayon-Auboyer & cs., 1999; Bäyon-Auboyer & cs., 2000), chi tiết xem bảng 3.1.
3.3.2.2. Thiết bị và dụng cụ sử dụng
- Dụng cụ mổ khám gia cầm gồm: kéo (kéo cắt da, cơ và cắt xương), kẹp... - Dụng cụ lấy mẫu xét nghiệm: syringe, tăm bông vô trùng, dao vô trùng cắt bệnh phẩm, túi plastic vô trùng đựng bệnh phẩm, túi chứa formol 10%, thùng đá bảo quản mẫu, nhãn ghi thông tin...
- Trang bị bảo hộ: găng tay và khẩu trang, áo blouse.
- Elisa gián tiếp và bộ kit Kit ELISA ID Screen Avian metapneumovirus Indirect 5P (IDVET_MPVS-5P, IDvet).
- Máy móc thí nghiệm cần thiết: máy RT-PCR, máy đọc gel, máy điện di, máy ly tâm, tủ lạnh, buồng an toàn sinh học cấp 2.
3.3.2.3. Mẫu virus tham chiếu
- Mẫu virus chủng PL21 strain thuộc aMPV/B có trong vacxin nhược độc Nemovac-hãng Merial, Pháp.