Hình 3.8. Trình tự gen survivin đã đăng ký trong Genbank
từ mẫu nghiên cứu
Đường chạy 3-4: sản phẩm RNA tách chiết từ mẫu máu UTV
Đường chạy 5: Sản phẩm RNA tách chiết từ mô u xơ vú
Nhận xét:
Kết quả trên điện di đồ cho thấy 3 băng rõ nét với kắch thước 3 tiểu phần rRNA là 28s; 18s; 5,8s. Như vậy chúng tôi đã tách chiết được RNA tổng số từ các mẫu máu và mô nghiên cứu không có dấu hiệu bị tạp nhiễm.
3.2.4.2. Xác định nồng độ và độ tinh sạch của mẫu RNA tách chiết từ máu và mô nghiên cứu bằng phổ hấp thụ.
Những mẫu nào đạt được nồng độ tối ưu và có độ tinh sạch mới được chúng tôi sử dụng tổng hợp cDNA đểđáp ứng yêu cầu của các thắ nghiệm tiếp theo. Khi xác định phổ hấp thụ của các mẫu RNA tổng số đã tách chiết trên máy đo NaNodrop-1000 đối với mẫu RNA đã tách chiết từ mẫu mô và máu nghiên cứu có các thông sốđược thể hiện trên bảng 3.5.
Bảng 3.5. Nồng độ và độ tinh sạch của RNA đã tách chiết từ máu và mô nghiên cứu
RNA tách từ mô RNA tách từ máu Mẫu Họ tên Tuổi Chẩn đoán Nồng độ
(ng/ộl)
OD260/280 Nồng độ
(ng/ộl)
OD260/280
1 Phạm Thanh T 39 UTV gđ IIIb 313,98 2,03 133,33 1,81 2 Tô Thị D 66 UTV gđ IIb 163,04 2,05 101,95 1,93 3 Nguyễn Thị H 55 UTV gđ IIb 163,38 1,98 91,62 1,85 4 Tô Thị H 61 UTV gđ IIb 354,82 2,01 153,43 1,96 5 Tô Thị S 74 UTV gđ IIb 309,1 2,05 146,52 1,85 6 La Thu H 36 UTV gđ IIb 307,50 2,01 90,06 1,89 7 Phan ThịƠ 71 UTV gđ IIb 333,79 1,91 89,89 1,9 8 Nguyễn Thị H 53 UTV gđ IIb 226,08 1,83 116,79 1,85 9 Ng Thanh H 39 UTV gđ IIb 135,69 1,82 97,85 1,95 10 Nguyễn Thị L 65 UTV gđ IIIb 232,52 1,95 75,78 1,89 11 Đoàn T.Lệ K 61 UTV gđ I 102,49 2,0 101,5 2,06
12 Vũ Thị Th 33 UTV gđ IIIb 156,25 2,06 88,7 2,03 13 Kiều Thị Th 56 UTV gđ IIb 268,34 1,97 121,19 1,96 14 Ngô Thị P 51 U xơ vú P 248,79 1,99 15 Nguyễn Thị T 44 U xơ vú P 251,1 2,01 16 Hoàng Thị M 34 U xơ vú T 145,5 1,89 17 Hoàng Thị T 50 U xơ vú P 189,7 1,8 18 Nguyễn Thị M 34 U xơ vú T 167.9 1,95 Nhận xét:
Kết quả xác định OD cho thấy hàm lượng RNA ở các mẫu mô, mẫu máu là khá cao (từ 75,78 ng/ộl đến 354 ng/ộl) và có độ tinh sạch cao (tỉ lệ của
độ hấp thụở bước sóng 260/280 nằm trong khoảng từ 1,8 đến 2,06). Như vậy RNA của các mẫu đều đáp ứng được yêu cầu của phản ứng tiếp theo.
3.2.5. Tổng hợp cDNA
Sau khi tách chiết RNA tổng số, tiến hành tổng hợp cDNA nhờ enzyme phiên mã ngược và quy trình đã mô tả ở phần phương pháp 2.4.2.6. Sản phẩm cDNA được sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu GADPHF/R. Kết quả PCR được kiểm tra trên gel agarose 0,8% (hình 3.11).
Hình 3.11. Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR