3.3. Kết quả thực hiện một số chỉ tiêu kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn dược
3.3.1. Kết quả định tính
3.3.1.1. Định tính flavonoid và poliphenol
Lấy 5 g bột dược liệu, thêm 50 ml ethanol 90% (TT), lắc đều, đun hồi lưu trong cách thủy 30 phút. Lọc. Cơ dịch lọc cịn khoảng 40 ml, chia đều thành 2 phần.
Phần 1: Chia vào 2 ống nghiệm. - Ống 1: Làm ống đối chiếu.
- Ống 2: Thêm 4 – 5 giọt acid hydrocloric (TT) và một ít bột magnesi (TT),đặt trong cách thủy vài phút. Dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu hồng (xem hình 3.2).
Hình 3.2. Định tính flavonoid (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau khi thêm Mg/HCl
Như vậy dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm flavonoid. Phần 2: Chia vào 2 ống nghiệm.
- Ống 1: Làm ống đối chiếu.
- Ống 2: Thêm 2 – 3 giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT). Xuất hiện màu xanh thẫm (xem hình 3.3).
Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm poliphenol.
Hình 3.3. Định tính poliphenol (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau khi thêm dd FeCl3
3.3.1.2. Định tính tanin
Lấy 1 g bột dược liệu, thêm 5 ml nước, đun sôi trong vài phút rồi lọc.
Lấy 2ml dịch lọc đã nguội rồi thêm 2 – 3 giọt dung dịch gelatin 1% (TT).
Xuất hiện tủa bơng trắng (xem hình 3.4).
Hình 3.4. Định tính tanin
Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm tanin.
3.2.1.3. Định tính ankaloit
- Phương pháp thử:
Lấy 2 g bột dược lệu cho vào bình nón có nút mài, thấm ẩm bột dược liệu bằng dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT),sau 15 phút thêm 10 ml cloroform (TT). Lắc khoảng 15 phút rồi để qua đêm. Lọc qua giấy lọc vào bình gạn,thêm 5 ml dung dịch acid sulfuric 10% (TT), lắc 2 – 3 phút, gạn lấy lớp acid vào 4 ống nghiệm để làm các phản ứng sau và cho kết quả như sau (xem hình 3.4).
+ Ống 1: Làm ống đối chiếu. + Ống 2: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer (TT), xuất hiện tủa màu vàng
+ Ống 3: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff (TT), xuất hiện tủa đỏ cam.
+ Ống 4: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat (TT), xuất hiện tuả nâu.
Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm ankaloid.
Hình 3.5. Định tính ankaloid (1): Mẫu đối chiếu.
(2): Mẫu sau khi cho thuốc thử Mayer. (3): Mẫu sau khi cho thuốc thử Dragendorff.
(4): Mẫu sau khi cho thuốc thử Bouchardat.
- Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Sắc kí lớp mỏng (SKLM):
+ Bản mỏng: Silica gel GF254
+ Dung môi khai triển: cloroform – methanol (7:3).
+ Dung dịch thử: Lấy 5 g bột dược liệu vào bình nón nút mài, thấm ẩm bột dược liệu bằng dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT) trong 5 phút. Lắc 3 lần với cloroform (TT), mỗi lần 20 ml. Gộp dịch chiết cloroform, lọc, bay hơi trên cách thủy đến còn 2 ml, dùng làm dung dịch thử.
Cách tiến hành:
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20 µl mỗi dung dịch trên. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, phun thuốc thử Dragendorff (TT). Để khô tự nhiên ngồi khơng khí. Thu được sắc kí đồ (xem hình 3.6).
Hình 3.6. Sắc kí đồ lớp mỏng.
Lớp mỏng có 5 vết: có các giá trị Rf như sau: 0,12 – 0,23 – 0,25 – 0,61 – 0.89. So với Rf của mẫu chuẩn (0,13 – 0,21 – 0,27 – 0,58 – 0,93) [10].
Nhận xét: Lớp mỏng có những vết tách tương đối xa và khơng có hiện tượng trùng vết chứng tỏ trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh không lẫn những tạp chất và chứng tỏ trong dịch chiết có nhóm ankaloit.