CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.3. Kết quả thực hiện một số chỉ tiêu kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Chó đẻ thân xanh 39
3.3.1. Kết quả định tính
3.3.1.1. Định tính flavonoid và poliphenol
Lấy 5 g bột dược liệu, thêm 50 ml ethanol 90% (TT), lắc đều, đun hồi lưu trong cách thủy 30 phút. Lọc. Cô dịch lọc còn khoảng 40 ml, chia đều thành 2 phần.
Phần 1: Chia vào 2 ống nghiệm.
- Ống 1: Làm ống đối chiếu.
- Ống 2: Thêm 4 – 5 giọt acid hydrocloric (TT) và một ít bột magnesi (TT),đặt trong cách thủy vài phút. Dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu hồng (xem hình 3.2).
Hình 3.2. Định tính flavonoid (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau khi thêm Mg/HCl Như vậy dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm flavonoid.
Phần 2: Chia vào 2 ống nghiệm.
- Ống 1: Làm ống đối chiếu.
- Ống 2: Thêm 2 – 3 giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT). Xuất hiện màu xanh thẫm (xem hình 3.3).
Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm poliphenol.
Hình 3.3. Định tính poliphenol (1): Mẫu đối chiếu (2): Mẫu sau khi thêm dd FeCl3
3.3.1.2. Định tính tanin
Lấy 1 g bột dược liệu, thêm 5 ml nước, đun sôi trong vài phút rồi lọc.
Lấy 2ml dịch lọc đã nguội rồi thêm 2 – 3 giọt dung dịch gelatin 1% (TT).
Xuất hiện tủa bông trắng (xem hình 3.4).
Hình 3.4. Định tính tanin Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm tanin.
3.2.1.3. Định tính ankaloit - Phương pháp thử:
Lấy 2 g bột dược lệu cho vào bình nón có nút mài, thấm ẩm bột dược liệu bằng dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT),sau 15 phút thêm 10 ml cloroform (TT). Lắc khoảng 15 phút rồi để qua đêm. Lọc qua giấy lọc vào bình gạn,thêm 5 ml dung dịch acid sulfuric 10% (TT), lắc 2 – 3 phút, gạn lấy lớp acid vào 4 ống nghiệm để làm các phản ứng sau và cho kết quả như sau (xem hình 3.4).
+ Ống 1: Làm ống đối chiếu.
+ Ống 2: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer (TT), xuất hiện tủa màu vàng
+ Ống 3: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff (TT), xuất hiện tủa đỏ cam.
+ Ống 4: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat (TT), xuất hiện tuả nâu.
Như vậy trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh có nhóm ankaloid.
Hình 3.5. Định tính ankaloid (1): Mẫu đối chiếu.
(2): Mẫu sau khi cho thuốc thử Mayer.
(3): Mẫu sau khi cho thuốc thử Dragendorff.
(4): Mẫu sau khi cho thuốc thử Bouchardat.
- Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Sắc kí lớp mỏng (SKLM):
+ Bản mỏng: Silica gel GF254
+ Dung môi khai triển: cloroform – methanol (7:3).
+ Dung dịch thử: Lấy 5 g bột dược liệu vào bình nón nút mài, thấm ẩm bột dược liệu bằng dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT) trong 5 phút. Lắc 3 lần với cloroform (TT), mỗi lần 20 ml. Gộp dịch chiết cloroform, lọc, bay hơi trên cách thủy đến còn 2 ml, dùng làm dung dịch thử.
Cách tiến hành:
Chấm riờng biệt lờn bản mỏng 20 àl mỗi dung dịch trờn. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, phun thuốc thử Dragendorff (TT). Để khô tự nhiên ngoài không khí. Thu được sắc kí đồ (xem hình 3.6).
Hình 3.6. Sắc kí đồ lớp mỏng.
Lớp mỏng có 5 vết: có các giá trị Rf như sau: 0,12 – 0,23 – 0,25 – 0,61 – 0.89. So với Rf
của mẫu chuẩn (0,13 – 0,21 – 0,27 – 0,58 – 0,93) [10].
Nhận xét: Lớp mỏng có những vết tách tương đối xa và không có hiện tượng trùng vết chứng tỏ trong dịch chiết cây Chó đẻ thân xanh không lẫn những tạp chất và chứng tỏ trong dịch chiết có nhóm ankaloit.
3.3.2. Thử độ tinh khiết 3.3.2.1. Độ ẩm
Độ ẩm được xác định bằng cách đo bằng máy đo độ ẩm AMB50 tại công ty Cổ Phần Dược Phẩm Danapha. Độ ẩm chung chính là độ ẩm trung bình của 5 lần đo.
Bảng 3.4. Kết quả khảo sát độ ẩm.
Lần đo Khối lượng bột (g) Độ ẩm (%)
1 2,000 5,060
2 2,009 5,040
3 2,007 5,060
4 2,000 5,050
5 2,008 5,040
Độ ẩm trung bình 5,050
Vậy độ ẩm trung bình là 5,050%.
3.3.2.2. Hàm lượng tro toàn phần
Sử dụng phương pháp tro hóa mẫu.Lấy 5 mẫu bột cây chó đẻ thân xanh, đem nung trong lò nung ở nhiệt độ 400 - 4500C. Hàm lượng tro chính là hàm lượng tro trung bình của 5 mẫu.
Bảng 3.5. Kết quả khảo sát hàm lượng tro STT m1 (g) m2 (g) m3 (g) % tro (%)
1 44,004 2,006 44,137 6,630
2 44,534 2,015 44,660 6,253
3 40,263 2,012 40,389 6,262
4 41,036 2,010 41,175 6,915
5 42,251 2,005 42,385 6,683
Hàm lượng tro trung bình 6,549
Vậy hàm lượng tro trung bình là: 6,549 %.
Căn cứ vào tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Chó đẻ thân xanh trong Dược điển Việt Nam IV đối với độ ẩm: không quá 12%, hàm lượng tro: không quá 20% thì độ ẩm và hàm lượng tro của cây Chó đẻ thân xanh thu hoạch ở xã Hòa Khương, huyện Hòa Vang,
thành phố Đà Nẵng phù hợp với tiêu chuẩn vì độ ẩm trung bình là 5,05%, hàm lượng tro trung bình 6,549%.
3.3.3. Định lượng
Tiến hành theo phương pháp chiết nóng : Bột dược liệu sau khi cân, được đun cách thủy sôi nhẹ dưới hồi lưu với dung môi là ethanol 96%, khối lượng cắn thu được từ dich chiết được sấy và cân khối lượng. Hàm lượng chất chiết được trong dược liệu chính là hàm lượng trung bình sau 3 lần tiến hành:
Bảng 3.6. Kết quả khảo sát hàm lượng chất chiết được trong dược liệu
Lần m1(g) m2(g) % hàm lượng (%)
1 3,986 0,377 9,458
2 4,098 0,447 10,908
3 3,983 0,374 9,390
Hàm lượng trung bình chất chiết được 9,919
Như vậy hàm lượng trung bình chất chiết được trong dược liệu là 9,919%.
Kết luận: Căn cứ vào tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Diệp hạ châu đắng trong Dược điển Việt Nam IV đối với chỉ tiêu định lượng chất chiết được trong dược liệu : không ít hơn 7%, thì hàm lượng chất chiết được trong cây Chó đẻ thân xanh thu hoạch ở xã Hòa Khương, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng phù hợp với tiêu chuẩn vì hàm lượng chất chiết được là 9,919%.
3.3.4. Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật của cây Chó đẻ thân xanh
Nhóm hợp chất
Thuốc thử Cách thực
hiện
Phản ứng dương tính
Kết quả định tính trên các dịch chiết
Kết quả định tính
chung Dịch
chiết ether
Dịch chiết cồn
Dịch chiết nước Không
thủy phân
Thuỷ phân
Không thủy phân
Thủy phân
Chất béo Nhỏ dd lên giấy
Vết trong
mờ (+) Có
Carotenoid H2SO4
Xanh dương hay lục→Xanh
dương
(+) Có
Tinh dầu Bốc hơi tới cắn
Có mùi
thơm (++) Có
Triterpenoid tự do Liebermann- Burchard
Đỏ nâu-tím lớp trên có màu xanh
lục
(+++) Có
Alkaloid T/thử chung
alkaloid Kết tủa (±) (+) (-) Có
Coumarin Phát quang trong kiềm
Phát quang
mạnh hơn (++) (±) (±) (-) Có
Anthraglycosid KOH 10%
Dd kiềm có màu hồng tới đỏ
(-) (-) (-) Không có
Flavonoid Mg/HCl đđ Dd có màu
hồng tới đỏ (+) (++) (++) (++) (-) Có Glycosid tim Thuốc thử
vòng lacton Hồng (-) (-) (-) Không có
T/thử đường
2-desoxy Màu xanh (-) (-) Không có
Anthocyanosid HCl Đỏ (+) (-) (-) Có
KOH Xanh (+) (-) Có
Proanthocyanidin HCl/t0 Đỏ (-) (-) Không có
Tanin Dd FeCl3
Xanh rêu hay xanh
đen
(++) (-) Có
Triterpenoid thủy phân
Liebermann- Burchard
Đỏ nâu-tím lớp trên có màu xanh
lục
(++) (-) Có
Saponin Tt
Liebermann
Có vòng
tím nâu (++) (++) Có
Lắc mạnh
với dd nước Tạo bọt (-) (+) Có
Acid hữu cơ Na2CO3 Sủi bọt (±) (-) Nghi ngờ
Chất khử T/thử
Fehling
Tủa đỏ
gạch (+++) (++) Có
Hợp chất polyuronic
Pha loãng với cồn 90%
Tủa bông trắng-vàng
nâu
(-) Không có
Đánh giá theo các mức sau: (-) Không có (±) Nghi ngờ (+) Có ít (++) Có (+++) Có nhiều (++++) Có rất nhiều
Ghi chú:
Có thể có phản ứng nhưng không thực hiện.
Không có mặt nhóm hợp chất trong dịch chiết.
3.4. Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu