1. 2G iới thieơu các dược lieơu nghieđn cứu
3.6.1Thử nghieơm dược lý các chât tinh khiêt
Nguyeđn lieơu:
Các chât tinh khiêt sau đađy được tiên hành thử nghieơm dược lý:
X ( M1) : Chuôi hoơt
Ds1, Ds2 : Kim tieăn thạo
L1, L2, L3 : Rau om
Các chât này được phađn laơp từ nhieău phađn đốn dung mođi khác nhau neđn tính tan rât khác nhau. DMSO (dimethyl sulfoxid) được sử dúng đeơ làm chât trung gian hòa tan. Súc vaơt, phương tieơn và phương pháp thử tương tự phaăn thử nghieơm cụa các phađn đốn dung mođi (xem múc 2.5.2.1 trang 35 và múc 2.5.2.2 trang 37).
3.6.1.1 Thử nghieơm tác dúng lợi tieơu
Chuaơn bị mău thử nghieơm: tiên hành tređn 4 mău M1, Ds1, Ds2, L2. Sau khi thaím
dò, lieău thử nghieơm được ân định như sau:
Lođ thử M1: 1 mg / 0,25 ml DMSO + 2,75 ml nước cât / 1 con
Lođ thử Ds1 : 0,6 mg / 0,25 ml DMSO + 2,75 ml nước cât / 1 con
Lođ thử Ds2 : tương tự lođ thử Ds1
Lođ thử L2 : 0,6 mg / 0,25 ml DMSO + 2,75 ml nước cât / 1 con
Kêt quạ:
Từ những sô lieơu thử nghieơm tređn, kêt quạ được ghi nhaơn như sau:
• Mău Ds1 có tác dúng lợi tieơu với chư sô T = 1,42 > 1: tỷ leơ lợi tieơu là 42,1%.
MĂU TN THỨ TỰ TN
THEƠ TÍCH NƯỚC TIEƠU V (ml)
V TB Thử VTB Chứng CHƯ SÔ T LỢI TIEƠU %
CON SÔ 1 CON SÔ 2 CON SÔ 3
M1 1 2 3 4,1 5,7 4,9 4,6 5,0 4,4 4,6 3,9 4.2 4.6 3,9 1,17 17,9
Ds1 1 2 3 3,5 6,0 4,7 4,7 4,2 6,2 4,2 5,7 4,3 5,4 3,8 1,42 42.1 Ds2 1 2 3 4,2 7,4 6,7 7,5 5,7 5,2 7,7 6,7 7,2 3.8 3,0 1,48 26,7 L2 1 2 3 4,8 4,2 4,4 4,0 3,8 5,7 5,0 3,5 4,8 4,46 4,85 0,92 0
• Mău Ds2 có tác dúng lợi tieơu với chư sô T = 1,27 > 1: tỷ leơ lợi tieơu là 26,7%.
• Mău M1 có tác dúng lợi tieơu với chư sô T = 1,17 > 1: tỷ leơ lợi tieơu là 17,9%.
• Mău L2 có chư sô T = 0,9 < 1 : chưa thây tác dúng lợi tieơu.
Xử lý baỉng thông keđ cho thây lođ thử Ds1 và lođ chứng khác bieơt có ý nghĩa (P < 0.05).
Lođ M1, Ds2, L2 và lođ chứng khác bieơt khođng có ý nghĩa thông keđ (P > 0,05)
3.6.1.2 Thử nghieơm tác dúng giãn cơ
Mău thử nghieơm: M1 (Chuôi hoơt); Ds2 (Kim tieăn thạo); L1, L2, L3 (Rau om)
Kêt quạ: trình bày ở Bạng 3.44 và 3.45
3.6.1.3 Kêt quạ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong 6 chât tinh khiêt phađn laơp từ Chuôi hoơt, Kim tieăn thạo và Rau om
được đem thử tác dúng dược lý có 3 mău là M1 (cụa Chuôi hoơt), Ds1 và Ds2 (cụa
Kim tieăn thạo) có theơ hieơn tính lợi tieơu. Tính giãn cơ theơ hieơn ơ û M1 (cụa Chuôi
hoơt), L1, L2 vaøø L3 (cụa Rau om). Ds2 chư theơ hieơn tính giãn cơ ở lieău khá cao
(0,6-0,8 ml/60 ml).
3.6.2 Kêt quạ thử nghieơm đoơc tính câp dieên
Thử nghieơm đoơc tính câp dieên được thực hieơn tái Trung Tađm Sađm và Dược lieơu (TP Hoă Chí Minh).
Đeơ thaím dò lieău, đôi với moêi dược lieơu dùng 6 con chuoơt, moêi con có trĩng
có theơ thu nhaơn được là 0,2 ml thuôc/10 gam theơ trĩng/laăn/ngày (quy định cho
chuoơt nhaĩt, đađy là lieău thực hieơn cho lượng cao coăn tôi đa có theơ hòa tan được
trong 0,2 ml nước cât hoaịc hoên hợp nước cât và chât trợ tan...) [5],[15]. Quan sát trong 48 giờ khođng thây có chuoơt nào chêt. Giại phău đái theơ cho thây các cơ quan noơi táng văn bình thường khođng bị sung huyêt.
Tiêp túc khạo sát với lieău tương tự như tređn với 10 chuoơt tređn moêi dược lieơu, ở lieău tôi đa chuoơt có theơ thu nhaơn được tương đương với 105,88 g dược lieơu Chuôi hoơt/kg theơ trĩng; ở lieău tương đương với 94,43 g dược lieơu Kim tieăn thạo/kg theơ trĩng; ở lieău tương đương với 371,93 g dược lieơu Rau om/kg theơ trĩng. Kêt quạ đeău khođng thây có chuoơt bị chêt, khođng ghi nhaơn được dâu hieơu bât thường xạy ra tređn thú thử nghieơm. Quan sát sau 48 giờ tât cạ chuoơt thử nghieơm đeău hốt đoơng bình thường. Kêt quạ giại phău đái theơ các lođ cho thây các cơ quan noơi táng (tim, phoơi, gan, thaơn, lách) bình thường, khođng có dâu hieơu toơn thương.
Nhaơn xét: qua thử nghieơm đoơc tính câp cụa 3 dược lieơu Chuôi hoơt, Kim tieăn thạo, Rau om cho thây chúng khođng theơ hieơn đoơc tính ở lieău thử nghieơm.
CHƯƠNG 4
BÀN LUAƠN
4.1 BÀN LUAƠN VEĂ KÊT QUẠ KHẠO SÁT THỰC VAƠT
Các dược lieơu được khạo sát veă maịt thực vaơt với những đaịc đieơm veă hình thái hĩc và phaăn vi hĩc khá đieơn hình, ví dú ở cađy Kim tieăn thạo với dáng lá tròn, có những gađn phú song song, maịt dưới cụa lá có nhieău lođng mịn rât đaịc bieơt. Beđn cánh đó phaăn vi hĩc cho thây các lođng mịn đó chính là lođng che chở đa bào có câu táo hêt sức đaịc bieơt goăm 1 đên 2 tê bào rât nhỏ ở gôc, phaăn đaău rât dài và nhĩn (deê nhaăm là lođng đơn bào), trong phaăn soi boơt có những lođng bị găy chừa lái những loê tròn naỉm tređn mạnh bieơu bì trođng rât đaịc bieơt; lođng tiêt cũng rât đieơn hình với gôc phình to goăm nhieău tê bào chứa chât tiêt beđn trong, đaău lođng thuođn nhỏ. Đieău này khá khác bieơt với những lođng tiêt thođng thường khác là tê bào chứa chât tiêt thường taơp trung ở đaău lođng.
Rau om rât deê nhaơn biêt do có lá mĩc vòng ba, toàn cađy có mùi thơm đaịc trưng. Phaăn vi hĩc rât đieơn hình với mođ meăm có nhieău khuyêt to, đaịc trưng cho những cađy sông gaăn/trong nước.
Những đaịc đieơm veă thực vaơt góp phaăn xađy dựng tieđu chuaơn kieơm nghieơm cho các dược lieơu, trước maĩt là giúp cho các xí nghieơp Dược phaơm gaịp khó khaín trong khađu thu mua nguyeđn lieơu làm thuôc, nhât là đôi với Kim tieăn thạo do khođng chụ đoơng được nguyeđn lieơu neđn đã thu mua từ nhieău nơi có xuât xứ khác nhau do đó chât lượng thuôc khođng được oơn định.
4.2 BÀN LUAƠN VEĂ KÊT QUẠ THỰC NGHIEƠM SINH HĨC
sỏi thaơn baỉng thuôc có nguoăn gôc tự nhieđn thường dựa vào các cơ chê như làm
mòn hoaịc tan sỏi, tông sỏi ra ngoài cơ theơ nhờ tác đoơng lợi tieơu hoaịc làm giãn cơ trơn giúp vieđn sỏi thoát ra ngoài deê dàng [7],[13],14],[22],27],[53],[106]. Nhờ những cơ chê này có theơ sơ boơ giại thích tác đoơng trị sỏi cụa các dược lieơu như sau: thứ nhât là có theơ làm tan sỏi; thứ đên là lợi tieơu, pha loãng dòng nước tieơu, làm ngưng sự lớn leđn theđm cụa hòn sỏi. Sau đó nhờ tác dúng chông vieđm kháng khuaơn mà làm giạm sự phù neă cụa nieơu quạn, giạm sự co thaĩt cụa cơ trơn táo đieău kieơn thuaơn lợi cho vieđn sỏi di chuyeơn xuông dưới và được đào thãi ra ngoài.
Tác dúng lợi tieơu
Tác dúng lợi tieơu là moơt yêu tô caăn thiêt cụa thuôc có tác dúng bài sỏi qua
đường tiêt nieơu.
Đôi với Chuôi hoơt thì phađn đốn C1 (ether daău hỏa) hơi có tác dúng lợi tieơu
(10%). Tuy nhieđn, xử lý baỉng phương pháp thông keđ cho thây khođng có sự khác
bieơt giữa lođ thử và lođ chứng. Từ phađn đốn này phađn laơp được chât X (= M1 =
hoên hợp phytosterol) có tác dúng lợi tieơu là 17,1%. Do đó có theơ xem tác dúng lợi tieơu cụa Chuôi hoơt là có nhưng khođng đáng keơ.
Đôi với Kim tieăn thạo thì phađn đốn K1 (ether daău hỏa) có tác dúng lợi tieơu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
34,8%. Từ phađn đốn này đã phađn laơp được 2 chât Ds1 và Ds2 với tác dúng lợi
tieơu laăn lượt là 42,1% và 26,7%.
Beđn cánh đó, đađy là hoên hợp phytosterol mà thành phaăn chính là sitosterol và các sterol lieđn quan có trong thực vaơt, chât này rât phoơ biên trong thực vaơt baơc cao như trong maăm lúa mì, baĩp [66]...Theo Wangchai và Yuo-Zing-Zhu
”Sitosterol có tác dúng làm giạm sự hâp thu cụa cholesterol và được dùng đeơ làm giạm noăng đoơ cholesterol trong máu” [89], [97]. Từ những nhaơn định tređn đưa đên gợi ý những thử nghieơm sau này trong vieơc dùng Kim tieăn thạo cho những beơnh veă tim mách có lieđn quan đên sterol.
Đôi với Rau om chư có phađn đốn benzen hơi có hướng lợi tieơu (8,33%) và
phađn đốn R7 (coăn 20%) cũng chư hơi có hướng lợi tieơu (14,1%). Hơn nữa, áp
dúng phương pháp thông keđ cho thây khođng có sự khác bieơt giữa lođ thử và lođ chứng. Có theơ xem tính lợi tieơu cụa Rau om là khođng đáng keơ.
Qua thử nghieơm xác định hàm lượng K+ trong các dược lieơu, chúng tođi nhaơn
thây hàm lượng cụa K+ có trong dược lieơu khá cao (0,24% ở Chuôi hoơt; 0,15% ở
Kim tieăn thạo; 0,58% ở Rau om). Đieău này đã góp phaăn lý giại vào tác dúng lợi tieơu đáng keơ ở phađn đốn coăn 20% cụa các dược lieơu. Tuy nhieđn nêu chư caín cứ
vào hàm lượng K+ đeơ đánh giá tác dúng lợi tieơu thì chưa hợp lý vì theo kêt quạ
neđu tređn thì hàm lượng K+ trong Kim tieăn thạo thâp hơn trong Rau om, nhưng
tác đoơng lợi tieơu cụa Kim tieăn thạo lái cao hơn, có lẽ có moơt tác dúng hoê trợ
giữa K+ và các thành phaăn khác trong những dược lieơu tređn, sẽ làm taíng tính lợi
tieơu ví dú như ở cađy Rađu mèo (Orthosiphon spiralis L., Lamiaceae), hàm lượng
khá cao cụa K+ trong Rađu mèo kêt hợp với sinensetin (moơt flavonoid có trong
cađy) táo ra tính lợi tieơu khá mánh ở dược lieơu này. Đieău này văn thường gaịp đôi với moơt sô thuôc có nguoăn gôc từ dược lieơu [28].
Tác đoợng giãn cơ
Tác đoơng giãn cơ giúp cho cơ trơn nieơu đáo giạm co thaĩt, làm giạm đau. Hòn sỏi nêu co,ù sẽ deê di chuyeơn hơn trong nieơu đáo đeơ được tông ra ngoài.
• Tređn những cơ sở vừa trình bày thì các phađn đốn C1 , Co cụa Chuôi hoơt có
tác dúng giãn cơ. Từ phađn đốn C1 (ether daău hỏa) đã phađn laơp được chât
X
(= M1) có tác dúng giãn cơ rõ bieơu thị baỉng bieđn đoơ giạm từ 28-64,86% và taăn
sô giạm từ 32,57-56,2%.
• Các phađn đốn cụa Kim tieăn thạo khođng thây theơ hieơn tính giãn cơ rõ,
tuy phađn đốn K7 (coăn 20%) có thây giạm bieđn đoơ nhưng taăn sô đeău taíng (hieơn
tượng giông như ruoơt bị yêu).
• Đôi với Rau om, phađn đốn R1 (ether daău hỏa) và R2 (benzen) có theơ hieơn
tính giãn cơ. Từ các phađn đốn này đã phađn laơp được các chât L1 (acid betulinic),
L2 (nevadensin), L3 (24z-methyl-homocholesterol) có tác dúng giãn cơ rõ. Kêt (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
quạ này cũng phù hợp với tài lieơu tham khạo và sát thực với tình hình sử dúng thực tê, là khi bị những cơn đau do sỏi thaơn, beơnh nhađn dùng dịch chiêt Rau om sẽ cạm thây giạm đau. Trong mĩi trường hợp đeău có khuyên cáo “Khođng dùng cho phú nữ có thai” [9].
Đeơ được đánh giá là có tác đoơng giãn cơ thì đốn ruoơt thí nghieơm phại theơ hieơn 1 trong 3 tác đoơng: hoaịc là giạm bieđn đoơ, hoaịc là giạm taăn sô, hoaịc là giạm cạ bieđn đoơ lăn taăn sô. Qua thử nghieơm tính giãn cơ, các sô lieơu ghi nhaơn được cho thây kêt quạ đã theơ hieơn được những tác đoơng này nhưng chư ở mức đoơ trị lieơu (khi tới ngưỡng, tác đoơng giãn cơ khođng còn taíng theo noăng đoơ chât thử), chứ khođng làm lieơt cơ hoaịc làm ạnh hưởng nhieău đên các cơ quan có câu táo cơ trơn khác.
Tác đoơng mòn sỏi
Qua thử nghieơm tính mòn sỏi cụa ba dược lieơu tređn cho thây lượng sỏi tan nhieău ở laăn ngađm I, các đợt sau càng ít tan cạ veă khôi lượng tan tuyeơt đôi (gam) và cạ
theo tỷ leơ phaăn traím so với khôi lượng trước moêi laăn ngađm, có lẹ lớp beđn ngoài
cụa vieđn sỏi mới được táo thành neđn deê tan hơn.
- Trong thử nghieơm này sỏi được dùng là calci oxalat, đađy là lối sỏi chiêm đa
sô (hơn 80%) trong các lối sỏi thaơn và có theơ chât raĩn chaĩc nhât.
- Trong thử nghieơm hoán chuyeơn (sau các đợt thử nghieơm), cú theơ là lây vieđn
sỏi trước ngađm ở dung dịch chứng thì nay ngađm ở dung dịch thuôc (cao dược lieơu) và ngược lái. Kêt quạ cho thây khôi lượng (gam) sỏi tan là :
Chuôi hoơt: 0,017/CH 1:10 (chứng 0,014)
Kim tieăn thạo: 0,0141/KTT 1:1 và 0,0082/KTT 1:10 (chứng 0,0068) Rau om: 0,0049/RO 1:1 và 0,005/RO 1:10 (chứng 0,0183)
Tóm lái qua thử nghieơm tác đoơng mòn sỏi cụa các dược lieơu Chuôi hoơt, Kim tieăn thạo và Rau om kêt quạ ghi nhaơn các vieđn sỏi đeău có giạm khôi lượng sau moêi đợt thí nghieơm nhưng chư có mău cao Chuôi hoơt 1:10 và cao Kim tieăn thạo
1:1 và 1:10 có tác dúng mòn sỏi rõ so với chứng.
Tuy nhieđn, đađy là thử nghieơm in-vitro, sô lượng vieđn sỏi quy định đeơ thử cũng khođng được nhieău, đieău kieơn thử là mođi trường nước tieơu nhađn táo khođng hoàn toàn giông cơ theơ con người neđn kêt quạ thử nghieơm chư có tính sơ boơ nhaơn định, thaím dò.
Vieơc tìm kiêm theđm những mođ hình thử nghieơm tính mòn sỏi, thử nghieơm tređn nhieău lối sỏi, nhieău lối mău thử nghieơm là những vieơc hữu ích caăn làm đeơ làm taíng tính thuyêt phúc cụa thử nghieơm này.
Tác dúng kháng khuaơn
Mău thử nghieơm được chuaơn bị dưới nhieău dáng khác nhau như cao coăn, cao nước, dịch ép dược lieơu tươi, tinh daău (Rau om), sử dúng phương pháp pha loãng
tređn mođi trường raĩn đeơ xác định MIC cụa các chât kháng khuaơn. Kêt quạ thử nghieơm cho thây cao coăn cụa các dược lieơu đeău theơ hieơn tính kháng khuaơn tređn
trực khuaơn mụ xanh (Pseudomonas aeruginosa) nhưng yêu, còn dịch ép tươi và
cao nước Rau om lái khođng theơ hieơn đaịc tính này. Tinh daău Rau om có tác dúng kháng khuaơn tređn tât cạ các vi khuaơn thử nghieơm, đađy là moơt đaịc đieơm hữu ích và caăn thiêt vì đođi khi tređn đường di chuyeơn, vieđn sỏi có theơ táo ra những vêt thương deê gađy nhieêm trùng trong mođi trường heơ tiêt nieơu. Tređn thực tê các thuôc chông nhieêm trùng văn thường được sử dúng trong các phác đoă đieău trị sỏi thaơn. Từ các kêt quạ thử nghieơm sinh hĩc cho thây moêi dược lieơu có những tác dúng rieđng bieơt tređn sỏi thaơn dựa tređn các mođ hình đeă ra. Chuôi hoơt theơ hieơn moơt sô tác đoơng giãn cơ và tác đoơng mòn sỏi, tác đoơng lợi tieơu lái khođng đáng keơ. Trong khi đó Kim tieăn thạo lái có tác đoơng lợi tieơu tôt (cao coăn), tác đoơng mòn sỏi
theơ hieơn rât rõ nhưng lái khođng có tính giãn cơ. Đôi với Rau om thì tác đoơng giãn
cơ rât tôt, trong khi 2 tác đoơng còn lái thì khođng theơ hieơn rõ. Từ những nhaơn định tređn đã gợi ý cho vieơc đieău trị sỏi thaơn baỉng sự phôi hợp cụa các dược lieơu tređn - với lieău lượng thích hợp - có theơ là moơt phác đoă toơng hợp có tính hoê tương giúp nađng cao hieơu quạ đieău trị.
Đoơc tính câp dieên
Qua khạo sát thử nghieơm đoơc tính câp cụa 3 dược lieơu Chuôi hoơt, Kim tieăn thạo và Rau om cho thây chúng khođng theơ hieơn đoơc tính hay dâu hieơu bât thường ở lieău thử nghieơm, bước đaău cho thây vieơc sử dúng các dược lieơu này làm thuôc là khođng ạnh hưởng đoơc cho cơ theơ. Những kêt quạ thử nghieơm này cũng phù
hợp với thực tê vì Chuôi hoơt, Rau om là những lối rau được dùng khá phoơ biên và lađu đời trong nhađn dađn.
4.3 BÀN LUAƠN VEĂ KHẠO SÁT HOÁ HĨC
Tređn cơ sở kêt hợp các phương tieơn và những tiên boơ mới trong lãnh vực nghieđn cứu như phương pháp HPLC áp dúng trong phađn tích và đieău chê , SPE trong tinh chêâ, APCI-MS trong phađn tích, ... moơt sô các hợp chât laăn đaău tieđn được phát hieơn trong các dược lieơu nghieđn cứu, cú theơ như sau:
- Từ Chuôi hoơt đã phađn laơp được M2 là hợp chât propelargonidin. Câu trúc
cụa M2 được chứng minh baỉng kỹ thuaơt LC-MS, phađn tử khôi M+ = 546 tương (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
ứng với propelargonidin dimer câu táo bởi 2 đơn phađn pelargonidin C15H14O5.
Qua tài lieơu tham khạo, các tác giạ chư đeă caơp moơt cách toơng quát trong hát Chuôi hoơt có proanthocyanidin mà thođi. Như vaơy, đađy là laăn đaău tieđn propelargonidin được phađn laơp từ Chuôi hoơt, flavonoid này toăn tái trong thieđn nhieđn ở dáng trùng hợp dimer.
- Đôi với Kim tieăn thạo, theo các tác giạ Su, Y. L.; Wang, Y. L.; Yang, J. S.
(1993) từ phađn đốn nước cụa Kim tieăn thạo đã phađn laơp được 3 C-glycosid là