5. CẤU TRÚC LUẬN VĂN
2.2.2. Chiết tách và xác định thành phần hóa học trong dịch chiết thân cây cẩu tích
cây cẩu tích
Phần nguyên liệu sau khi thu hái về đem rửa sạch, xắt lát, phơi tự nhiên từ 5kg mẫu tƣơi thu đƣợc 2,98kg mẫu khô, sau đó nghiền thành bột mịn thu đƣợc mẫu nghiên cứu.
Cân 1 kg bột mẫu cho vào túi lọc ngâm với 3 lít metanol ở nhiệt độ phòng trong bình thủy tinh có nắp đậy bảo quản trong tủ hút, thỉnh thoảng lắc, đảo trộn để tăng hiệu quả quá trình chiết. Sau khi ngâm 2 ngày lọc lấy phần dịch methanol bằng giấy lọc, phần cặn mẫu còn lại tiếp lục ngâm lần 2 với 2 lít methanol trong 2 ngày và lọc. Làm tƣơng tự với ngâm lần 3.
Dịch chiết 3 lần gộp lại và tiến hành cô quay chân không ở 600C thu đƣợc 114,25 mL dịch cô đặc methanol ở Hình 2.3.
Hình 2.3. Dịch cô đặc metanol
Hòa tan dịch cô đặc methanol bằng một lƣợng tối thiểu nƣớc cất vào thành dạng hỗn dịch rồi chiết phân bố nối tiếp với lần lƣợt các dung môi là n-hexane, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate thu đƣợc các cao chiết tƣơng ứng.
29
Cao chiết n-hexane: lấy 70 mL dịch chiết methanol chiết lỏng– lỏng, lắc với 50 mL dung môi n-hexane trong khoảng 30 phút bằng phễu chiết, để một thời gian cho tách lớp hoàn toàn. Sau đó thu lại phần dịch nƣớc và dịch chiết n-hexane vào 2 cốc khác nhau. Sử dụng phần dịch nƣớc thu đƣợc tiếp tục chiết lỏng - lỏng với 50mL n-hexane, chiết tƣơng tự nhiều lần cho đến khi màu của dịch chiết n-hexan nhạt dần nhƣ mô tả ở hình 2.4, thử trên mặt kính đồng hồ nếu không còn vết thì dừng lại. Gộp các dịch chiết rồi tiến hành thu hồi dung môi, thu đƣợc cao n-hexan.
Hình 2.4. Quá trình chiết với dung môi n-hexane
Các dịch chiết còn lại ta sử dụng dịch nƣớc thu đƣợc thực hiện tƣơng tự chiết nối tiếp, thu đƣợc các cao chiết tƣơng ứng.
Các cao sau khi thu đƣợc, trích một lƣợng nhỏ đem phân tích GC-MS để xác định thành phần và hàm lƣợng các cấu tử có trong mỗi cao chiết.
– Thiết bị: máy đo sắc ký khí ghép phổ GC-MS Agilent.
– Đo tại trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩn đo lƣờng chất lƣợng 2, 02 Ngô Quyền, thành phố Đà Nẵng.
30