5. Cấu trúc luận văn
2.2.5. Phương pháp lựa chọn chất hấp phụ và dung mơi chạy cột sắc kí
kí [9]
a. Chọn chất hấp phụ
Thơng thường ta sử dụng chất hấp phụ là silicagel, ngồi ra cịn dùng Sephadex, sắc kí trao đổi ion.
b. Lựa chọn dung mơi chạy cột sắc kí
Để lựa chọn dung mơi hay hệ dung mơi chạy cột sắc kí silicagel ta phải dựa vào sắc kí lớp mỏng với các bước cơ bản sau:
- Hồ tan hồn tồn một lượng nhỏ mẫu chạy cột trong dung mơi thích hợp. - Chuẩn bị 4 – 6 tấm bản mỏng rồi chấm dung dịch mẫu trên lên mỗi tấm với lượng tương đương nhau.
- Mỗi bản mỏng được chạy với loại dung mơi cĩ độ phân cực khác nhau. Tiếp theo hiện hình dưới đèn UV hoặc thuốc thử. Với đơn dung mơi sẽ dễ dàng thấy được dung mơi nào thích hợp. Từ kết quả đĩ tìm được hệ dung mơi (trong đĩ cĩ một dung mơi kém phân cực và một dung mơi phân cực, ví dụ n– hexan : EtOAc) phù hợp để chạy cột sắc kí.
- Với hỗn hợp mẫu chất là kết quả của một phản ứng tổng hợp (2 – 3 chất) thì hệ dung mơi phù hợp là hệ cĩ thể đẩy chất cần quan tâm lên trên bản mỏng với Rf = 0,2 – 0,3.
- Với mẫu chất được chiết từ cây cỏ (cĩ chứa nhiều chất từ khơng phân cực đến phân cực), lựa chọn dung mơi chạy cột ban đầu là dung mơi đẩy vết kém phân cực nhất lên Rf khoảng 0,5 và dung mơi chấm dứt sắc kí là dung
mơi đẩy vết phân cực nhất lên Rf khoảng 0,2 trên bản mỏng.
- Sau khi chọn được hệ dung mơi phù hợp ta thực hiện chạy cột sắc kí với hệ dung mơi từ kém phân cực tăng dần đến phân cực.
Chú ý:
- Phải sử dụng pha tĩnh của sắc kí lớp mỏng và sắc kí cột giống nhau. - Dung mơi ban đầu chạy cột là dung mơi phù hợp đã chọn được ở trên nhưng cần điều chỉnh cho độ phân cực kém hơn một ít. Vì chất hấp phụ, ví dụ như silicsgel tráng trên bản mỏng cĩ kích thước nhỏ hơn, độ mịn và độ chặt chẽ lớn hơn so với silicagel khi thực hiện chạy cột sắc kí.
- Đối với sắc kí cột Sephadex LH 20 ta thường dùng một dung mơi là MeOH.