5. Cấu trúc luận văn
2.2.7. Cách nạp silicagel vào cột [9]
Để việc tách chất được tốt, silicagel phải được nạp vào cột một cách đồng nhất để hạn chế việc “nứt” cột, bất thường. Silicagel được nạp vào cột theo hai cách.
a. Nạp silicagel ở dạng sệt
cho một lớp bơng mỏng vào đáy để ngăn khơng cho silicagel chảy xuống bình hứng. Cho hệ dung mơi chạy cột ban đầu vào bình đựng (cốc, ca nhựa). Cân lượng silicagel cần thiết (đã tính tốn xác định được ở trên) cho vào bình đựng đều đặn, mỗi lần một lượng nhỏ và khuấy đều.
Lưu ý: khơng nên thực hiện ngược lại nghĩa là rĩt dung mơi vào silicagel bởi vì silicagel khi gặp dung mơi sẽ phát nhiệt, cĩ thể làm vĩn cục, khơng đồng nhất.
Lượng dung mơi phải vừa đủ để hỗn hợp khơng được quá sệt khiến bọt khí sẽ bị bắt giữ trong cột và cũng khơng được quá lỏng.
Rĩt hỗn hợp sệt vào cột qua một phễu lọc và mở nhẹ khố để dung mơi chảy xuống bình hứng (dung mơi này tiếp tục được dùng để rĩt trở lại đầu cột).
Tiếp tục rĩt hỗn hợp vào cột đến hết số lượng, vừa rĩt vừa gõ nhẹ thành cột bằng thanh cao su để silicagel nén đều trong cột.
Sau khi nạp xong cho dung mơi chảy đều qua cột hai, ba lần để cột được đồng nhất.
Lưu ý: Nhất thiết khơng để đầu cột bị khơ, nghĩa là luơn luơn cĩ dung mơi phủ trên phần đầu cột.
Sau khi nạp cột xong, mặt thống silicagel phải phẳng. Nếu mặt thống chưa phẳng ta cĩ thể dùng đũa thuỷ tinh khuấy phần dung mơi sát mặt thống làm xáo trộn phần trên đầu cột rồi để yên cho silicagel lắng xuống từ từ tạo nên mặt thống bằng phẳng.
Với sắc kí cột sephadex ta thao tác tương tự nhưng cần ngâm sephadex với dung mơi một thời gian để sephadex trương nở trước khi cho vào cột.
b. Nạp silicagel dạng khơ
Nếu mẫu chất khơng tan trong dung mơi lựa chọn để bắt đầu quá trình sắc ký cột, vì đây là loại dung mơi kém phân cực, thay vì phải hịa tan mẫu
trong dung mơi phân cực (cĩ thể ảnh hưởng đến quá trình giải ly) cĩ thể nạp mẫu khơ.
Cột được giữ thẳng đứng trên giá. Cho miếng bơng nhỏ vào đáy cột (nếu cột khơng cĩ lớp thủy tinh xốp), rĩt dung mơi chạy cột ban đầu vào khoảng hai phần ba cột. Cho từ từ silicagel dạng khơ vào cột qua phễu lọc, vừa cho vào vừa gõ nhẹ thành cột. Sau khi nạp silicagel xong, cho dung mơi chảy qua vài lần, kết hợp dùng máy nén cho đến khi đuổi hết bọt khí trong cột, để cột được ổn định trước khi nạp mẫu vào.
Thơng thường người ta nạp silicagel vào cột ở dạng sệt.